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1 V3 CMV IgG Avidity testes; equivalente a 50 determinações de avidez de IgG anti-cmv Indica os analisadores onde o dispositivo pode ser utilizado Elecsys 2010 Português MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 601 cobas e 602 Utilização prevista Imunoensaio para a determinação qualitativa in vitro da avidez dos anticorpos IgG anti-citomegalovírus em soro e plasma humanos. O ensaio de electroquimioluminescência (electrochemiluminescence immunoassay ou ECLIA ) foi concebido para ser utilizado nos analisadores de imunoensaios Elecsys e cobas e. Resumo O citomegalovírus, um membro da família do vírus do herpes, é comum em todas as populações humanas, provocando infecções que ficam latentes durante toda a vida do hospedeiro, com reactivações ocasionais e com infecções recorrentes. As infecções por CMV são normalmente ligeiras e assintomáticas. No entanto, a infecção primária da mãe pelo CMV durante a gravidez acarreta um risco de transmissão intra-uterina, da qual podem resultar lesões graves para o feto, incluindo atraso mental e do crescimento, icterícia e anomalias do SNC. Os bebés assintomáticos ao nascer podem desenvolver defeitos de audição ou problemas de aprendizagem mais tarde na vida. A infecção pré-natal por CMV ocorre em aproximadamente % de todos os nados vivos. Diferentes estudos demonstraram que o risco de doença congénita sintomática no feto ou em recém-nascidos é elevado, quando ocorre infecção primária materna no início da gravidez, antes da 20.ª semana de gestação, sendo mais baixo a partir daí. A infecção congénita por CMV provocada por infecção não primária raramente dá origem a doença congénita no feto. 1,2,3,4,5 Na ausência de manifestação clínica aguda, o diagnóstico de infecção por CMV normalmente é feito através de serologia. Um primeiro passo para diagnosticar a infecção aguda por CMV é normalmente dado através da detecção dos anticorpos IgG e IgM específicos anti-cmv. As amostras reactivas aos anticorpos IgM anti-cmv podem indicar uma infecção aguda, recente ou reactivada. Como a infecção congénita sintomática no feto se deve principalmente a transmissão intra-uterina após infecção materna primária, o diagnóstico diferencial de infecção recorrente versus primária, estimulação policlonal ou persistência de anticorpos IgM específicos anti-cmv é crucial para o aconselhamento correcto e para a monitorização da gravidez. O teste de avidez de IgG anti-cmv é actualmente o procedimento mais fiável para identificar infecção primária em mulheres grávidas. O ensaio de avidez de IgG anti-cmv mede a afinidade de ligação funcional de anticorpos IgG anti-cmv em resposta à infecção. Os anticorpos produzidos durante a resposta primária têm uma avidez de antigénios mais baixa do que os anticorpos produzidos durante a resposta não primária ou na fase remota da infecção. Encontra-se avidez baixa aprox semanas após o aparecimento de sintomas em indivíduos imunocomprometidos. No entanto, existe variação individual na taxa de maturação de avidez. Em casos raros podem ser observados resultados de avidez baixa até 6 meses ou mesmo mais tempo após o aparecimento da infecção. Os testes de avidez devem ser realizados no início da gestação. Os anticorpos IgG anti-cmv com avidez baixa detectados antes da 16.ª-18.ª semanas de gravidez, em combinação com um resultado de IgM anti-cmv positivo, são uma evidência forte de infecção primária recente. Uma resultado de avidez alta após a gestação (após a 20.ª semana de gestação) não permite excluir uma infecção primária numa fase mais precoce da gestação, numa altura em que pode ter estado presente uma avidez baixa de IgG anti-cmv. Um índice de avidez alta durante as primeiras semanas de gravidez pode ser considerado um bom indicador de infecção no passado. 6,7,8,9 Princípio do teste O princípio do teste baseia-se em duas medições paralelas com o ensaio Elecsys CMV IgG Avidity. A primeira medição é uma medição de referência das amostras com o ensaio Elecsys CMV IgG Avidity. A segunda medição é a medição tratada com DilCMVAv das amostras, na qual é utilizada a função de diluição automática específica de amostras do analisador com o diluente de avidez (DilCMVAv), seguida pelo ensaio Elecsys CMV IgG Avidity. O diluente de avidez contém componentes que interferem com a ligação dos anticorpos IgG anti-cmv de avidez baixa. A avidez (Avi%) é avaliada determinando a relação entre a medição de referência e a medição tratada com DilCMVAv. O ensaio Elecsys CMV IgG Avidity utiliza o princípio de sandwich. O ensaio tem uma duração total de 18 minutos tanto no caso da medição de referência, como no caso da medição tratada com DilCMVAv. 1.ª incubação: 20 µl de amostra (diluída automaticamente com DilCMVAv ou referência não diluída), antigénios recombinantes biotinilados específicos de CMV e antigénios recombinantes específicos de CMV marcados com complexo de ruténio a reagem entre si e formam um complexo sandwich. No caso da medição tratada com DilCMVAv, só os anticorpos anti-cmv com avidez alta conseguem produzir o complexo sandwich, ao passo que com os anticorpos CMV de avidez baixa o complexo é dissolvido. 2.ª incubação: Após a adição das micropartículas revestidas de estreptavidina, o complexo formado liga-se à fase sólida pela interacção da biotina e da estreptavidina. A mistura de reacção é aspirada para a célula de leitura, onde as micropartículas são fixadas magneticamente à superfície do eléctrodo. Os elementos não ligados são então removidos com ProCell/ProCell M. A aplicação de uma corrente eléctrica ao eléctrodo induz depois uma emissão quimioluminescente que é medida por um fotomultiplicador. Os resultados são determinados com base numa curva de calibração gerada especificamente pelo analisador, através de uma calibração de 2 pontos, e numa curva principal incluída no código de barras dos reagentes. a) Complexo Tris(2,2 -bipiridil)ruténio(ii) (Ru(bpy) 2+ 3 ) Reagentes - soluções de trabalho M Micropartículas revestidas de estreptavidina (tampa transparente), 1 frasco, 6.5 ml: Micropartículas revestidas de estreptavidina, 0.72 mg/ml; conservante. R1 Antigénio de CMV~biotina (tampa cinzenta), 1 frasco, 9 ml: Antigénio biotinilado específico de CMV (recombinante, E. coli), > 400 µg/l, tampão MES 50 mmol/l, ph 6.5; conservante. R2 Antigénio de CMV~Ru(bpy) 2+ 3 (tampa preta), 1 frasco, 9 ml: Antigénio específico de CMV (recombinante, E. coli) marcado com complexo de ruténio > 400 µg/l; tampão MES 50 mmol/l, ph 6.5; conservante. Cal1 Calibrador negativo 1 (tampa branca), 2 frascos, cada com 1.0 ml: Soro humano, não reactivo para anticorpos IgG anti-cmv; tampão; conservante. Cal2 Calibrador positivo 2 (tampa preta), 2 frascos, cada com 1.0 ml: Soro humano, reactivo para anticorpos IgG anti-cmv; aprox. 40 U/mL; tampão; conservante. DilCMVAv Diluente Avidity Diluent (tampa branca), 1 frasco, 2.5 ml: 0.8 M de cloreto de guanidina, antigénio específico de CMV (recombinante, E. coli); tampão MES 50 mmol/l, ph 6.5; conservante. Precauções e avisos Para utilização em diagnóstico in vitro. Respeite as precauções normais de manuseamento de reagentes laboratoriais. Elimine todos os resíduos de acordo com os regulamentos locais. Ficha de segurança fornecida a pedido, para uso profissional. Todo o material de origem humana deve ser considerado como potencialmente infeccioso. Ambos os calibradores (Cal1 e Cal2) foram preparados exclusivamente com sangue de dadores testados individualmente e que estão isentos de HBsAg e de anticorpos anti-hcv e anti-hiv. O soro com IgG anti-cmv (Cal2) foi esterilizado por filtragem. Os métodos de análise aplicados foram aprovados pela FDA ou liberados em conformidade com a Directiva Europeia 98/79/CE, Anexo II, Lista A , V 3 Português 1 / 6 Analisadores Elecsys e cobas e

2 CMV IgG Avidity No entanto, como nenhum método pode excluir com total segurança o risco de potencial infecção, o material deve ser manipulado com o mesmo cuidado que é utilizado no caso das amostras dos pacientes. Em caso de exposição, cumpra as instruções das autoridades de saúde competentes. 10,11 Os reagentes não podem ser utilizados após o fim do prazo de validade indicado. Evite a formação de espuma em todos os reagentes e tipos de amostras (amostras de pacientes, calibradores e controlos). Preparação dos reagentes Os reagentes do dispositivo estão prontos a ser utilizados e são fornecidos em frascos compatíveis com o sistema. Analisadores Elecsys 2010 e cobas e 411: Os calibradores só deverão permanecer no analisador durante a calibração a C. Feche os frascos imediatamente após o seu uso e guarde-os a 2-8 C. Devido a possíveis efeitos de evaporação, não realize mais de 5 calibrações por conjunto de frascos de calibrador. Analisadores MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 e cobas e 602: Se não for necessário o volume total para a calibração no analisador, transfira alíquotas dos calibradores prontos a utilizar para os frascos vazios, munidos de tampa "snap-cap" (CalSet Vials). Coloque os rótulos fornecidos nestes frascos adicionais. Armazene as alíquotas a 2-8 C para posterior utilização. Efectue apenas um procedimento de calibração por alíquota. Toda a informação necessária ao correcto funcionamento é introduzida no analisador a partir dos respectivos códigos de barras do reagente. Armazenamento e estabilidade Conserve a 2-8 C. Conservar o dispositivo de reagentes Elecsys CMV IgG Avidity e o DilCMVAv na vertical para assegurar a total disponibilidade das micropartículas durante a mistura automática, antes da utilização. Estabilidade: Estabilidade do rackpack de reagentes e DilCMVAv até ao fim do prazo de validade fechado a 2-8 C indicado após abertura a 2-8 C nos analisadores Estabilidade dos calibradores fechado a 2-8 C após abertura a 2-8 C nos analisadores Elecsys 2010 e cobas e 411, a C nos analisadores MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 e cobas e semanas 3 semanas ou 8 semanas se for conservado alternadamente no frigorífico e nos analisadores (até 8 horas a C) até ao fim do prazo de validade indicado 8 semanas até 5 horas Utilize uma única vez! Guarde os calibradores na vertical! Não congelar. Evite que fiquem resíduos da solução de calibração na tampa "snap-cap" aberta. Colheita e preparação das amostras Apenas as amostras indicadas em seguida foram testadas em quantidade suficiente e consideradas aceitáveis. O soro é colhido em tubos de amostra padrão ou com gel separador. Plasma tratado com heparina-li, K 2 -EDTA e K 3 -EDTA. Critério: Recuperação média de amostras positivas dentro de % de valor sérico. Estabilidade durante 4 semanas a 2-8 C, 7 dias a 25 C, 6 meses a -20 C. As amostras podem ser congeladas 5 vezes. Os tipos de amostras indicados foram testados usando tubos de colheita de amostras seleccionados e comercialmente disponíveis à data do teste, i.e. nem todos os tubos dos diferentes fabricantes disponíveis no mercado foram testados. Os sistemas de colheita de amostras de diferentes fabricantes podem, por sua vez, conter materiais diferentes que, em alguns casos, podem afectar os resultados dos testes. Se processar amostras em tubos primários (sistemas de colheita de amostras) consulte as instruções do fabricante dos tubos. Não altere as amostras posteriormente com aditivos (biocidas, antioxidantes ou outros agentes que possam modificar o ph da amostra) para evitar a obtenção de resultados falsos. As amostras clínicas em pool e outros materiais artificiais podem ter diferentes efeitos em diferentes ensaios e pode dar origem a resultados discrepantes. As amostras congeladas e as amostras que contêm precipitado têm de ser centrifugadas antes da realização do ensaio. Podem ser utilizadas amostras liofilizadas e inactivadas por calor. Antes da determinação, certifique-se de que as amostras, os calibradores e os controlos estão à temperatura ambiente (20-25 C). Devido a possíveis efeitos de evaporação, as amostras e os calibradores colocados no analisador deverão ser analisados/medidos no prazo de 2 horas. Materiais fornecidos Consulte a secção "Reagentes - soluções de trabalho" para saber quais são os reagentes. Materiais necessários (mas não fornecidos) , PreciControl CMV IgG Avidity, 3 x 1.0 ml cada de PreciControl CMV IgG Avidity 1 e , Diluent Universal, 2 x 16 ml de diluente de amostras ou , Diluent Universal, 2 x 36 ml de diluente de amostras , CalSet Vials, 2 x 56 frascos vazios com tampas snap-cap Equipamento normal de laboratório Analisadores Elecsys 2010, MODULAR ANALYTICS E170 ou cobas e Acessórios para os analisadores Elecsys 2010 e cobas e 411: , tampão de sistema ProCell, 6 x 380 ml , CleanCell, 6 x 380 ml de solução de limpeza para a célula de leitura , Elecsys SysWash, 1 x 500 ml de aditivo para água de lavagem , Adaptador para SysClean , Elecsys 2010 AssayCup, 60 x 60 cuvetes de reacção , Elecsys 2010 AssayTip, 30 x 120 pontas de pipeta Acessórios para analisadores MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 e cobas e 602: , ProCell M, 2 x 2 L de tampão de sistema , CleanCell M, 2 x 2 L de solução de limpeza para a célula de leitura , PC/CC-Cups, 12 cuvetes para ProCell M e CleanCell M pré-aquecidos antes da utilização , ProbeWash M, 12 x 70 ml de solução de limpeza para finalização da análise e lavagem durante a mudança de reagentes , AssayTip/AssayCup Combimagazine M, 48 tabuleiros x 84 cuvetes de reacção ou pontas de pipeta, sacos de lixo , WasteLiner, sacos de lixo , SysClean Adapter M Acessórios para todos os analisadores: , Elecsys SysClean, 5 x 100 ml de solução de limpeza do sistema Ensaio Para assegurar a correcta execução do ensaio é importante cumprir as instruções fornecidas neste documento para o analisador utilizado. Consulte o manual do operador apropriado para obter informações mais específicas sobre o ensaio feito no analisador. A ressuspensão das micropartículas é efectuada automaticamente antes de usar. Introduza os parâmetros específicos do teste através dos códigos de barras dos reagentes. Se, em algum caso excepcional, não for possível ler o código de barras, o código numérico de 15 dígitos deverá ser introduzido manualmente. Analisadores Elecsys e cobas e 2 / , V 3 Português

3 V3 CMV IgG Avidity Eleve a temperatura dos reagentes refrigerados até aprox. 20 C e coloque-os no disco dos reagentes (20 C) do analisador. Evite a formação de espuma. O sistema regula automaticamente a temperatura dos reagentes e a abertura/fecho dos frascos. Coloque os calibradores na zona de amostras. Todas as informações necessárias para calibrar o ensaio são lidas automaticamente pelo analisador. Após a realização da calibração, conserve o calibrador Cal1 e o calibrador Cal2 a 2-8 C ou elimine-os (analisadores MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 e cobas e 602). Cada amostra e os controlos têm de ser analisados duas vezes (medição de referência e medição tratada com DilCMVAv) para calcular a avidez (Avi%). Tratamento da amostra no ensaio CMV IgG Avidity Amostra para determinação da avidez (Avi%) Resultado do ensaio Elecsys CMV IgG: U/mL Resultado do ensaio Elecsys CMV IgG: > 500 U/mL amostra pré-diluída manualmente a 1:20 com o diluente Diluent Universal divida a amostra em duas alíquotas, volume mínimo 300 µl MEDIÇÃO DE REFERÊNCIA coloque a 1.ª alíquota no analisador na posição n efectue uma determinação da avidez de IgG anti-cmv MEDIÇÃO TRATADA COM DilCMVAv coloque a 2.ª alíquota no analisador na posição n+1 seleccione S.Vol./Dil. Ratio e execute uma determinação da avidez de IgG anti-cmv com uma taxa de diluição de 1:2 executar série o analisador reporta o resultado da o analisador reporta o resultado da medição tratada com DilCMVAv medição de referência (U/mL) (U/mL) cálculo manual da avidez (Avi%), ver a secção Cálculo para mais informações As amostras consideradas reactivas no ensaio Elecsys CMV IgG com concentrações entre U/mL são divididas em duas alíquotas. Se a amostra for reactiva no ensaio Elecsys CMV IgG com uma concentração > 500 U/mL, a amostra tem de ser pré-diluída manualmente a 1:20 com o Diluent Universal (consulte a secção Diluição ) e depois divida em duas alíquotas. Medição de referência: Coloque a primeira alíquota de uma determinada amostra no analisador na posição n e execute uma medição da avidez de IgG anti-cmv. Medição tratada com DilCMVAv: Coloque a segunda alíquota da amostra acima mencionada no analisador na posição n+1 e execute uma medição da avidez de IgG anti-cmv com uma diluição específica da amostra de 1:2. Para mais informações, consulte o manual do operador do analisador. Por este meio, o analisador vai homogeneizar 50 µl de DilCMVAv com 50 µl de amostra, antes de efectuar a medição da avidez de IgG anti-cmv. O operador tem de garantir que ambas as medições são efectuadas consecutivamente com o mesmo lote de reagentes, com o mesmo analisador e a mesma calibração. Nota: Se não for possível fazer alíquotas de uma amostra, as duas medições têm de ser programadas e executadas consecutivamente. Não é possível a medição automática, efectuada em paralelo, da medição de referência e da medição tratada com DilCMVAv de uma alíquota. Calibração Rastreabilidade: Este método foi padronizado contra o padrão interno da Roche para IgG anti-cmv. Não está disponível nenhum padrão internacional para o CMV. Cada dispositivo de reagentes Elecsys CMV IgG Avidity contém um código de barras com informações específicas para a calibração do lote de reagentes em questão. A curva principal previamente definida é adaptada ao analisador utilizando os calibradores CMV IgG Avidity Cal1 e Cal2. Frequência das calibrações: Uma calibração por lote de reagentes utilizando o calibrador CMV IgG Avidity Cal1, Cal2, e reagente recém-colocado (i.e. dentro de um máximo de 24 horas depois de o dispositivo de reagentes ter sido registado no analisador). Devem ser feitas as seguintes recalibrações: após 1 mês (28 dias) quando se utiliza o mesmo lote de reagentes após 7 dias (quando se utiliza o mesmo kit de reagentes no analisador) conforme necessário: p. ex. em resultados de ensaios de controlo de qualidade com o controlo PreciControl CMV IgG Avidity fora dos limites definidos com mais frequência, quando tal se mostra necessário em conformidade com os regulamentos em vigor Controlo da qualidade Para o controlo da qualidade, utilize o controlo PreciControl CMV IgG Avidity. É recomendada a execução do controlo PreciControl CMV IgG Avidity 1 e 2 no início de cada dia de trabalho e após cada calibração. Prepare duas alíquotas de cada nível de controlo. Coloque ambas as alíquotas de cada nível de controlo uma a seguir à outra, num suporte de amostras. Os dois níveis devem ser analisados em paralelo tanto na medição de referência como na medição tratada com DilCMVAv, para verificar o desempenho. Cada laboratório deve estabelecer as medidas correctivas a tomar no caso de os valores se situarem fora dos limites definidos. Se necessário, repita a medição das amostras envolvidas. Cumpra os regulamentos governamentais aplicáveis e as directrizes locais de controlo da qualidade. Verificação da calibração: Os valores e os intervalos teóricos (U/mL) da medição de referência foram determinados e avaliados pela Roche. Foram obtidos utilizando os reagentes de teste Elecsys CMV IgG Avidity e os analisadores disponíveis na altura do teste. As medições de referência dos controlos têm de ser recuperadas dentro dos intervalos de controlo (U/mL) conforme especificado na folha de dados. Os valores de controlo têm de ser comparados manualmente com os intervalos de IgG do CMV (U/mL) indicados na folha de dados. Os valores e intervalos teóricos exactos são apresentados nas folhas de dados incluídas ou disponíveis electronicamente. Verificação da funcionalidade do Diluent Avidity (DilCMVAv): A avidez (Avi%) é calculada a partir da medição de referência e da medição tratada com DilCMVAv, de acordo com a secção Cálculo. O intervalo teórico do resultado de avidez calculado manualmente (Avi%) do controlo PreciControl CMV IgG Avidity 1 é < 45.0 Avi%, ao passo que o respectivo intervalo do controlo PreciControl CMV IgG Avidity 2 é 55.0 Avi%. Nota: Os controlos não têm etiquetas com códigos de barras e têm de ser tratados como amostras de doentes. Os controlos não podem ser definidos como controlos externos, uma vez que não é possível fazer a diluição dos controlos no analisador. Cálculo dos resultados O analisador calcula automaticamente a concentração de analito de cada amostra em U/mL para ambas as medições (medição de referência e medição tratada com DilCMVAv). A avidez (Avi%) tem de ser calculada manualmente: Avidez (Avi%) = resultado da medição tratada com DilCMVAv (U/mL) resultado da medição de referência (U/mL) x 100 % Só podem ser utilizadas para determinação da avidez (Avi%) amostras reactivas na medição de referência ( 1.0 U/mL). Se a medição tratada com DilCMVAv tiver como resultado valores < 0.3 U/mL, calcule a avidez (Avi%) com 0.3 U/mL , V 3 Português 3 / 6 Analisadores Elecsys e cobas e

4 CMV IgG Avidity Interpretação dos resultados Os resultados obtidos com o ensaio Elecsys CMV IgG Avidity são interpretados do seguinte modo: Avidez Interpretação < 45.0 Avi% avidez baixa Avi% zona cinzenta 55.0 Avi% avidez alta Não pode ser deduzida nenhuma interpretação clínica de um resultado na zona cinzenta. Recomenda-se que seja colhida uma amostra de seguimento num prazo apropriado (por ex., 2-4 semanas) e que o teste seja repetido. Os resultados do ensaio CMV IgG Avidity devem ser utilizados em conjunto com a história clínica do paciente, os sintomas clínicos e outros resultados de análises laboratoriais, por exemplo, os resultados dos anticorpos IgG e IgM específicos anti-cmv. No caso de um resultado de avidez de IgG anti-cmv discordante da história clínica do doente, os sintomas clínicos e outros testes laboratoriais, por ex., resultados de IgG e de IgM específica anti-cmv, deverão ser realizados mais testes para verificar o resultado, sendo recomendada a realização do teste numa amostra de seguimento. Os resultados da avidez de IgG anti-cmv numa determinada amostra, determinados através de ensaios de diferentes fabricantes, podem variar devido a diferenças nos métodos de ensaio e nos reagentes utilizados. Por isso, os resultados reportados pelo laboratório ao médico devem incluir a seguinte indicação: Os resultados que se seguem foram obtidos com o ensaio Elecsys CMV IgG Avidity. Os resultados de ensaios de outros fabricantes não podem ser utilizados em substituição destes. Podem ocorrer resultados de avidez até 110 Avi% devido à variância inerente ao ensaio, sendo interpretados como resultados de avidez alta. Para uma avidez > 110 Avi%, aconselha-se a pré-diluição (de acordo com a secção Diluição ) da amostra e a repetição de ambas as medições, para calcular a nova avidez (Avi%). Limitações interferências Em doentes com HIV, em doentes submetidos a terapêutica imunossupressora ou em doentes com outras alterações que possam dar origem a supressão imunitária, os resultados devem ser interpretados com precaução. Não foram testadas amostras colhidas em recém-nascidos, no cordão umbilical, em doentes pré-transplante ou em fluidos orgânicos diferentes do soro e do plasma, como seja a urina, saliva ou o líquido amniótico. Entre um painel de 142 amostras positivas dentro do intervalo de medição, não foi observado qualquer efeito "high-dose hook" (não foi observado um aumento dos sinais após a diluição). O ensaio não é afectado pela icterícia (bilirrubina < 1129 µmol/l ou < 66 mg/dl), hemólise (Hb < mmol/l ou < g/dl), lipemia (Intralipid < 2000 mg/dl) e biotina (< 246 nmol/l ou < 60 ng/ml). Critério: Recuperação média de amostras positivas dentro de ± 20 % do valor sérico. As amostras não devem ser colhidas em pacientes em tratamento com doses elevadas de biotina (i.e. > 5 mg/dia) até no mínimo 8 horas após a última administração de biotina. Não foi observada interferência do factor reumatóide até 1500 UI/mL. Foram efectuados testes in vitro com 18 fármacos frequentemente utilizados e, além destes, com ganciclovir e valganciclovir. Não se encontrou qualquer interferência com o ensaio. Em casos isolados, podem ocorrer interferências devido a títulos extremamente elevados de anticorpos para a estreptavidina e para o ruténio. Estes efeitos são minimizados por um desenho de teste adequado. Quando o objectivo é o diagnóstico, os resultados devem ser sempre interpretados em conjunto com a história clínica do paciente, o exame clínico e outros resultados. Limite de Detecção não serão assinalados pelo analisador e os valores superiores ao intervalo de medição como > 500 U/mL. Limite do Branco (LdB) e Limite de Detecção (LdD) Limite do branco = 0.15 U/mL Limite de detecção= 0.25 U/mL O Limite do Branco e o Limite de Detecção foram determinados em conformidade com os requisitos do protocolo EP17-A do CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). O Limite do Branco é o valor do percentil 95 obtido a partir de n 60 medições de amostras isentas de analito em várias séries independentes. O Limite do Branco corresponde à concentração abaixo da qual ficam as amostras isentas de analito, com uma probabilidade de 95 %. O Limite de Detecção foi determinado com base no Limite do Branco e no desvio padrão de amostras com uma concentração baixa. O Limite de Detecção corresponde à concentração de analito mais baixa que pode ser detectada (valor acima do Limite do Branco) com uma probabilidade de 95 %). Medição tratada com DilCMVAv: Devido à diluição a 1:2, o intervalo de medição é U/mL. Os valores inferiores ao Limite do Branco são indicados como < 0.30 U/mL. Os valores acima do Limite do Branco e abaixo do Limite de Detecção não serão assinalados pelo analisador e os valores superiores ao intervalo de medição são reportados como > 1000 U/mL Diluição As amostras com concentrações de IgG anti-cmv acima do intervalo de medição têm de ser pré-diluídas com o diluente Diluent Universal antes da realização do teste com o ensaio Elecsys CMV IgG Avidity. A pré-diluição recomendada é de 1:20 (manualmente). A concentração da amostra pré-diluída tem de ser 15 U/mL. Esta pré-diluição manual não deve ser considerada no cálculo da avidez (Avi%), uma vez que a amostra pré-diluída manualmente é utilizada em ambas as medições (medição de referência e medição tratada com DilCMVAv). Nota: A heterogeneidade dos anticorpos anti-cmv pode dar origem a um comportamento de diluição não linear. Dados específicos sobre o desempenho São apresentados a seguir dados representativos do desempenho nos analisadores. Os resultados podem diferir de laboratório para laboratório. Precisão A precisão foi determinada com reagentes Elecsys, amostras e controlos humanos, de acordo com um protocolo modificado (EP5-A2) do CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute): 2 execuções por dia em duplicação, cada durante 21 dias (n = 84); repetibilidade n = 21. Foram obtidos os seguintes resultados: Analisadores Elecsys 2010 e cobas e 411 Repetibilidade b Precisão intermédia Amostra Média DP CV Média DP CV Avi% Avi% % Avi% Avi% % SH c SH SH PC d CMV IgG Avidity PC CMV IgG Avidity b) Repetibilidade = precisão intra-ensaio c) SH = Soro humano d) PC = PreciControl Limites e intervalos Intervalo de medição Medição de referência: U/mL (definido pelo Limite de Detecção e pelo máximo da curva principal). Os valores inferiores ao Limite do Branco são indicados como < 0.15 U/mL. Os valores acima do Limite do Branco e abaixo do Analisadores Elecsys e cobas e 4 / , V 3 Português

5 V3 CMV IgG Avidity Analisadores MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 e cobas e 602 Repetibilidade Precisão intermédia Amostra Média DP CV Média DP CV Avi% Avi% % Avi% Avi% % SH SH SH PC CMV IgG Avidity PC CMV IgG Avidity Especificidade analítica 439 amostras que podem desenvolver reactividade cruzada foram testadas com o ensaio Elecsys CMV IgG (que é equivalente à medição de referência do ensaio Elecsys CMV IgG Avidity) e uma comparação do ensaio CMV IgG, que inclui as seguintes amostras: contendo anticorpos contra o HBV**, HAV, HCV*, HIV, HTLV, EBV**, HSV*, VZV**, Parvo B19***, Rubella, Treponema pallidum**, Toxoplasma gondii** contendo auto-anticorpos*** (ANA, anticorpos anti-tecido, RF) Foi encontrada uma concordância geral de 96.6 % (422/437) nestas amostras com a medição de referência Elecsys CMV IgG Avidity e o teste de comparação. 110 amostras foram consideradas concordantemente negativas e 312 amostras foram consideradas positivas. 2 amostras deram resultados indeterminados quer com o ensaio Elecsys CMV IgG, quer com o teste de comparação. * HSV, HCV: Foram encontradas 2 amostras discordantes em cada grupo. ** HBV, EBV, VZV, Treponema pallidum, Toxoplasma gondii: Foi encontrada 1 amostra discordante em cada grupo. *** Parvo B19, auto-anticorpos: Foram encontradas 3 amostras discordantes em cada grupo. Sensibilidade Sensibilidade (concordância dos resultados de avidez baixa com infecções primárias): A sensibilidade do ensaio de avidez de IgG anti-cmv é definida como a percentagem de amostras de infecções primárias por CMV (caracterizadas por laboratórios de referência) detectadas que contêm anticorpos com baixa avidez IgG anti-cmv. Na globalidade, foram investigadas 183 amostras únicas e sequenciais colhidas por laboratórios de referência e caracterizadas (com base em testes de diagnóstico e, se disponíveis, indicações clínicas) como sendo de infecções primárias por CMV. 31 amostras apresentaram um resultado na zona cinzenta e foram excluídas do cálculo. Tipo de amostra Diagnóstico Grávidas Total Sensibilidade (%) 96.1 (74/77) 93.4 (99/106) 94.5 (173/183) inferior de 95 % (%) superior de 95 % (%) Sensibilidade relativa (concordância dos resultados de avidez baixa com dois ensaios comerciais de avidez de IgG anti-cmv): Foram investigadas com dois ensaios comerciais de avidez de IgG anti-cmv amostras únicas provenientes de amostras de dadores de sangue seleccionadas aleatoriamente com seroconversão de IgG anti-cmv da dádiva anterior para a dádiva actual e caracterizadas como contendo anticorpos com avidez baixa de IgG anti-cmv. Em 22 das 24 amostras foram detectados anticorpos com baixa avidez de IgG anti-cmv. 1 amostra apresentou um resultado na zona cinzenta. Especificidade Especificidade (concordância dos resultados de avidez alta com infecções tardias): A especificidade do ensaio de avidez de IgG anti-cmv é definida como a percentagem de amostras de infecções tardias por CMV (caracterizadas por laboratórios de referência) detectadas que contêm anticorpos com avidez alta de IgG anti-cmv. Foram investigadas ao todo 95 amostras únicas colhidas por um laboratório de referência e caracterizadas (com base em testes de diagnóstico) como sendo de infecções tardias por CMV. 12 amostras apresentaram um resultado na zona cinzenta e foram excluídas do cálculo. Tipo de amostra Diagnóstico Grávidas Total Especificidade (%) 90.9 (40/44) 100 (51/51) 95.8 (91/95) inferior de 95 % (%) superior de 95 % (%) Especificidade relativa (concordância dos resultados de avidez alta em amostras reactivas para IgG anti-cmv, não reactivas para IgM anti-cmv, que indicam a ausência de uma infecção primária): Foram investigadas ao todo 365 amostras de análises de dadores de sangue e de rastreios de gravidez (calculadas em amostras reactivas para IgG anti-cmv, não reactivas para IgM anti-cmv, com resultados de avidez alta concordantes em dois métodos de comparação indicadores da ausência de uma infecção primária). 20 amostras apresentaram um resultado na zona cinzenta e foram excluídas do cálculo. Tipo de amostra Dadores de sangue Grávidas Total Especificidade relativa (%) 98.5 (130/132) 100 (233/233) 99.5 (363/365) inferior de 95 % (%) superior de 95 % (%) Distribuição da avidez A capacidade de fazer uma distinção entre infecção aguda e tardia por CMV é demonstrada com 422 amostras únicas e sequenciais colhidas por laboratórios de referência e classificadas numa das seguintes categorias: Categoria A: < 90 dias após o início presumido da infecção ou data da primeira colheita (amostras únicas e sequenciais de doentes que inicialmente sofriam de uma infecção primária por CMV); n = 225 amostras Categoria B: dias após o início presumido da infecção ou data da primeira colheita (amostras únicas e sequenciais de doentes que inicialmente sofriam de uma infecção primária por CMV); n = 66 amostras Categoria C: > 180 dias após o início presumido da infecção ou data da primeira colheita (amostras únicas e sequenciais de doentes que inicialmente sofriam de uma infecção primária por CMV); n = 131 amostras A distribuição exacta de resultados de avidez baixa, na zona cinzenta e de avidez alta é apresentada no diagrama seguinte: Bibliografia 1. Boppana SB, Pass RF, Britt WS, et al. Symptomatic congenital cytomegalovirus infection: neonatal morbidity and mortality. Pediatr Infect Dis J 1992;11: Alford CA, Stagno S, Pass RF, et al. Congenital and perinatal cytomegalovirus infections. Rev Infect Dis 1990;12: Peckham CS. Cytomegalovirus infection: congenital and neonatal disease. Scand J Infect Dis Suppl 1991;80: , V 3 Português 5 / 6 Analisadores Elecsys e cobas e

6 CMV IgG Avidity 4. Fowler KB, Stagno S, Pass RF, et al. The outcome of congenital cytomegalovirus infection in relation to maternal antibody status. N Eng J Med 1992;326: Pass RF, Fowler KB, Boppana SB, et al. Congenital cytomegalovirus infection following first trimester maternal infection: symptoms at birth and outcome. J Clin Virol 2006;35: Revello MG, Gerna G. Maternal, fetal and neonatal diagnosis of congenital human cytomegalovirus infection. Expert Opin Med Diagn 2008;2(5): Grangeot-Keros L, Mayaux MJ, Lebon P, et al. Value of cytomegalovirus (CMV) IgG avidity index for the diagnosis of primary infection in pregnant women. J Infect Dis 1997;175: Macé M, Sissoeff L, Rudent A, et al. A serological testing algorithm for the diagnosis of primary CMV infection in pregnant women. Prenat Diagn 2004;24: Lazzarotto T, Guerra B, Lanari M, et al. New advances in the diagnosis of congenital cytomegalovirus infection. J Clin Virol 2008;41: Occupational Safety and Health Standards: bloodborne pathogens. (29 CFR Part ). Fed. Register. 11. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work. Para mais informações, consulte o manual do operador adequado ao analisador, as folhas de aplicação respectivas, a informação do produto e as Folhas de Métodos de todos os componentes necessários. Neste Folheto Informativo é sempre utilizado um ponto como separador de casas decimais para marcar a separação entre o número inteiro e as partes fraccionadas de um número decimal. Não são utilizados separadores de milhares. As alterações ou os acréscimos significativos estão assinalados por uma barra de alteração na margem. As alterações dos parâmetros de teste do código de barras do reagente que já foram introduzidas devem ser editadas manualmente. 2012, Roche Diagnostics 0123 Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim Analisadores Elecsys e cobas e 6 / , V 3 Português