Manual do Ensaio ADVIA Centaur Anti-HBs 1 / 14. Ensaio de detecção de anticorpos contra o antigénio de superfície da hepatite B

Transcrição

1 Manual do Ensaio ADVIA Centaur Anti-HBs 1 / 14 Anti-HBs (ahbs) Ensaio de detecção de anticorpos contra o antigénio de superfície da hepatite B Indica informação revista Resumo do ensaio Conteúdo Aplicação Tipo de amostra Soro, plasma-edta, plasma heparinizado Volume da amostra 100 µl Calibrador ahbs Sensibilidade e limite do ensaio mui/ml REF Conteúdo Número de testes embalagem ReadyPack de reagentes primários, com Reagente Lite 200 para ahbs, Fase Sólida e Reagente Auxiliar ADVIA Centaur Cartão da Curva Principal de ahbs ADVIA Centaur 1 frasco de Calibrador Baixo de ahbs 1 frasco de Calibrador Alto de ahbs Cartão de Valores Atribuídos ao Calibrador de ahbs ADVIA Centaur Para a definição dos símbolos utilizados nos rótulos dos produtos, consulte a secção Para entender os símbolos, no Apêndice D. O ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur é um imunoensaio para diagnóstico in vitro, para a determinação qualitativa e quantitativa de anticorpos totais contra o antigénio de superfície da hepatite B em soro humano ou plasma (EDTA ou heparinizado), utilizando o Sistema ADVIA Centaur. Os resultados do ensaio podem ser utilizados para ajudar a determinar a susceptibilidade à infecção pelo vírus da hepatite B (VHB) de indivíduos na fase de pré ou pósvacinação com VHB ou de indivíduos cujo estado de vacinação é desconhecido. Os resultados do ensaio podem ser usados com outros marcadores serológicos do VHB para diagnóstico laboratorial da hepatite B associada à infecção pelo VHB. Um resultado de teste que evidencie reactividade permite o diagnóstico diferencial em indivíduos que apresentem sinais e sintomas de hepatite nos quais a etiologia é desconhecida. Materiais necessários mas não fornecidos REF Descrição Conteúdo Material de controlo de qualidade do ensaio ahbs ADVIA Centaur 2 x 10,0 ml de Controlo Negativo 2 x 10,0 ml de Controlo Positivo Cartão de Valores Esperados (112351) Líquido de lavagem 1 ADVIA Centaur 2 x 1500 ml/embalagem Rev. D, ahbs

2 Anti-HBs 2 / 14 Manual do Ensaio ADVIA Centaur Resumo e explicação do teste O ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur é um imunoensaio quimioluminométrico directo de micropartículas para captura de anticorpos, utilizado para medir a quantidade de anticorpos contra o antigénio de superfície da hepatite B em soro e plasma humanos. O vírus da hepatite B (VHB) é endémico em todo o mundo e é a principal causa de doenças hepáticas. O VHB transmite-se através do contacto directo com o sangue ou líquidos corporais. As principais formas de transmissão incluem transfusões de sangue, troca de agulhas, contacto directo com ferimentos, contacto sexual e exposição perinatal durante o parto. 1,2 O período de incubação médio da infecção pelo VHB é de 6 a 8 semanas (intervalo entre 1 a 6 meses). Os sintomas clínicos comuns incluem mal-estar, febre, gastroenterite e icterícia. A infecção pelo VHB pode causar hepatite ictérica típica, hepatite anictérica subclínica, hepatite fulminante ou hepatite crónica ou persistente. Nos adultos, 90 a 95% dos doentes com infecção pelo VHB recuperam completamente da doença aguda e ficam livres do vírus. Aproximadamente 5 a 10% dos doentes com VHB tornam-se portadores crónicos. Cerca de 90% dos recém-nascidos infectados pelo VHB desenvolvem hepatite B crónica. Calcula-se que mais de 300 milhões de pessoas em todo o mundo sejam portadoras crónicas do vírus. A infecção pelo VHB, especialmente em casos de infecção crónica, está claramente associada ao desenvolvimento do carcinoma hepatocelular. 1,2,3 A presença de anticorpos contra o antigénio de superfície da hepatite B (anti-hbs) é usada para determinar o estado imunológico em relação ao VHB ou a evolução da doença em indivíduos infectados pelo VHB. Um aumento nos níveis de anticorpos anti-hbs, associado à perda de antigénio de superfície da hepatite B (HBsAg) circulante detectável, indica convalescença nas infecções por hepatite B. Além disso, é possível medir os níveis de anticorpos anti-hbs para determinar se a vacinação é necessária ou, após um programa de vacinação, para determinar se foi desenvolvida imunização protectora. 4,5 Princípio do ensaio O ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur é um imunoensaio em "sanduíche" que utiliza tecnologia de quimioluminometria directa. Os subtipos do HBsAg (ad e ay) estão ligados por ligações covalentes a partículas magnéticas de látex na Fase Sólida. No Reagente Lite, os subtipos do HBsAg (ad e ay) estão marcados com éster de acridínio. A partir do poço auxiliar, são adicionadas partículas não magnéticas de látex. A amostra é incubada simultaneamente com o Reagente Lite, a Fase sólida e o Reagente Auxiliar. Se houver anticorpos anti-hbs presentes na amostra, formar-se-ão complexos de antigénio-anticorpo. O sistema efectua automaticamente os seguintes passos: distribui 100 µl de amostra numa cuvete distribui 50 µl de Reagente Auxiliar e incuba durante 2,75 minutos a 37 C distribui 100 µl de Fase Sólida e 50 µl de Reagente Lite e incuba a mistura durante 6,75 minutos a 37 C separa a Fase Sólida da mistura e aspira o reagente não ligado lava a cuvete com o líquido de lavagem 1 distribui 300 µl de Reagente Ácido e o mesmo volume de Reagente Básico para iniciar a reacção quimioluminescente apresenta os resultados de acordo com a opção seleccionada, conforme descrito nas instruções de funcionamento do sistema ou no sistema de ajuda "on-line" ahbs Rev. D,

3 Manual do Ensaio ADVIA Centaur Anti-HBs 3 / 14 Existe uma relação directa entre o nível de actividade anti-hbs presente na amostra do doente e a quantidade de unidades relativas de luz (RLUs) detectadas pelo sistema. Consulte a secção Interpretação dos resultados, para obter uma descrição do cálculo do "cutoff". Recolha e manuseamento da amostra Soro, plasma-edta ou plasma heparinizado são os tipos de amostras recomendados para este ensaio. Não utilize amostras com sinais evidentes de contaminação microbiana. O desempenho do ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur não foi determinado com sangue do cordão umbilical, amostras sanguíneas de recém-nascidos, amostras sanguíneas de cadáveres, amostras inactivadas termicamente ou outros líquidos corporais que não soro e plasma, tais como saliva, urina, líquido amniótico ou líquidos pleurais. As seguintes recomendações gerais sobre manuseamento e armazenamento de amostras de sangue são fornecidas pela NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards), 6 e complementadas por novos estudos sobre o manuseamento de amostras utilizando o ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur: Manuseie todas as amostras como potenciais transmissores de doenças. As amostras são processadas por centrifugação, à qual se segue, normalmente, a separação física do soro ou plasma dos eritrócitos. A centrifugação pode ser realizada até 24 horas após a colheita. Não se observaram diferenças clínicas significativas num teste de 10 amostras cuja centrifugação foi efectuada em períodos variáveis até 24 horas após a colheita. Analise as amostras o mais rapidamente possível após a colheita. Se não forem imediatamente analisadas, as amostras devem ser armazenadas a uma temperatura entre 2 e 8 C. Armazene sempre as amostras tapadas e na vertical, a uma temperatura entre 2 e 8 C durante um máximo de 7 dias. Armazene os tubos de amostras primários entre 2 e 8 C, até um máximo de 7 dias. Mantenha sempre as amostras tapadas e na vertical. As amostras dos tubos primários incluem soro armazenado sob a forma de coágulo, plasma armazenado em concentrado de eritrócitos e amostras processadas e armazenadas em tubos de colheita de sangue com barreira de gel. Não se observaram diferenças clínicas significativas em testes realizados com 10 amostras que permaneceram nestes tubos primários até um máximo de 7 dias. Para um período de armazenamento mais longo, congele as amostras, isentas de eritrócitos, a uma temperatura igual ou inferior a -20 C. Não guarde as amostras em congeladores do tipo "frost-free". Não foram observadas diferenças clínicas significativas em 10 amostras submetidas a 4 ciclos de congelamento/descongelamento. Misture convenientemente as amostras descongeladas e centrifugue-as antes de as utilizar. Embale e rotule as amostras para transporte, de acordo com os regulamentos nacionais e internacionais aplicáveis ao transporte de amostras clínicas e agentes etiológicos. As amostras mantidas à temperatura ambiente até 7 dias ou mantidas sob refrigeração até 7 dias não demonstraram diferenças qualitativas. Armazene as amostras tapadas e na vertical entre 2 e 8 C, após a sua chegada. Se o período de transporte ultrapassar os 7 dias, envie as amostras congeladas. Antes de colocar as amostras no sistema, certifique-se de que: As amostras não contêm fibrina ou outras partículas. Remova as partículas por centrifugação. As amostras não contêm bolhas ou espuma Rev. D, ahbs

4 Anti-HBs 4 / 14 Manual do Ensaio ADVIA Centaur Reagentes Armazene os reagentes na posição vertical, a uma temperatura entre 2 e 8 C. Agite manualmente todas as embalagens de reagentes primários antes de as colocar no sistema. Inspeccione visualmente a parte inferior da embalagem do reagente para se certificar de que todas as partículas estão dispersas e em suspensão. Para obter informações detalhadas sobre a preparação dos reagentes, consulte o Apêndice C, Manuseamento de reagentes. Embalagem de reagente Reagente Volume Ingredientes Embalagem ReadyPack de reagentes primários para ahbs ADVIA Centaur Reagente Lite Fase Sólida Reagente auxiliar 10,0 ml/ embalagem de reagentes 20,0 ml/ embalagem de reagentes 10,0 ml/ embalagem de reagentes Armazenamento antigénio de superfície da 2 8 C hepatite B humano inactivado (ad e ay) (~2 µg/ml), marcado com éster de acridínio em solução-tampão de proteína com albumina sérica bovina, agente tensioactivo e conservantes antigénio de superfície da 2 8 C hepatite B (ad e ay) humano inactivado (~2 µg/ml) ligado por ligações covalentes a partículas magnéticas de látex em solução-tampão de proteína com albumina sérica bovina, agente tensioactivo e conservantes partículas não magnéticas de látex em tampão Tris com agente tensioactivo e conservantes 2 8 C Estabilidade até ao fim do prazo de validade indicado no rótulo da embalagem. Para obter informações sobre a estabilidade de utilização, consulte a secção Estabilidade de utilização e intervalo de calibração. até ao fim do prazo de validade indicado no rótulo da embalagem. Para obter informações sobre a estabilidade de utilização, consulte a secção Estabilidade de utilização e intervalo de calibração. até ao fim do prazo de validade indicado no rótulo da embalagem. Para obter informações sobre a estabilidade de utilização, consulte a secção Estabilidade de utilização e intervalo de calibração. Frascos de calibradores de ahbs Calibradores 2,0 ml/ frasco plasma humano processado, positivo relativamente à presença de anticorpos contra o HBsAg, com conservantes 2 8 C até ao fim do prazo de validade indicado no frasco ou até 8 horas de utilização até ao fim do prazo de validade indicado no frasco ou até 8 horas de utilização até ao fim do prazo de validade indicado no frasco ou até 14 dias de utilização Frascos de material de controlo de qualidade para ahbs* ADVIA Centaur 1* Controlos 10,0 ml/ frasco plasma humano processado, negativo relativamente à presença de anticorpos contra o HBsAg, com conservantes 2 8 C Líquido de lavagem ml/ embalagem solução salina tamponada com fosfato, com azida sódica (< 0,1%) e um agente tensioactivo 2 25 C * Consulte a secção Materiais necessários mas não fornecidos ahbs Rev. D,

5 Manual do Ensaio ADVIA Centaur Anti-HBs 5 / 14 NOTA: A azida sódica pode reagir com o cobre e o chumbo existentes nas canalizações, formando azidas metálicas explosivas. Quando eliminar os reagentes, utilize água em abundância, para evitar a acumulação de azidas. Certifique-se primeiro de que a eliminação destes materiais através da rede de esgotos cumpre a legislação em vigor. PRECAUÇÃO: Este dispositivo contém material de origem humana ou animal e deve ser manuseado como potencial transportador e transmissor de doenças. Para utilizar no diagnóstico in vitro. Carregar os reagentes PRECAUÇÃO! POTENCIAIS RISCOS BIOLÓGICOS: Alguns componentes deste produto contêm material de origem humana. Nenhum método de teste conhecido oferece total garantia de que os derivados do sangue humano não transmitam agentes infecciosos. Todos os produtos fabricados a partir de material de origem humana devem ser manuseados como potencialmente infecciosos. Manuseie este produto de acordo com as boas práticas de laboratório estabelecidas e com as precauções universais. 7-9 Os controlos e calibradores foram testados através de métodos aprovados pela FDA e considerados não reactivos para o antigénio de superfície da hepatite B (HBsAg), o anticorpo contra a hepatite C (VHC) e o anticorpo contra o VIH-1/2. O HBsAg de origem humana utilizado na elaboração deste produto foi obtido a partir de unidades testadas através de métodos aprovados pela FDA e considerado não reactivo para os anticorpos contra o VHC e o VIH-1/2. As unidades foram inactivadas e o HBsAg foi purificado. Porém, todos os produtos fabricados com materiais de origem humana devem ser manuseados como sendo potencialmente infecciosos. Certifique-se de que o sistema contém embalagens de reagentes primários em número suficiente. Para obter informações pormenorizadas sobre a preparação do sistema, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda "on-line". PRECAUÇÃO: Agite manualmente todas as embalagens de reagentes primários, antes de as colocar no sistema. Inspeccione visualmente a parte inferior da embalagem do reagente, para se certificar de que todas as partículas estão dispersas e em suspensão. Para obter informações pormenorizadas sobre a preparação dos reagentes, consulte o Apêndice C, Manuseamento de reagentes. Coloque as embalagens ReadyPack de reagentes primários nos compartimentos dos respectivos reagentes e utilize as setas das embalagens para as colocar correctamente. O sistema mistura automaticamente as embalagens de reagentes primários, para manter uma suspensão homogénea dos reagentes. Para informações pormenorizadas sobre como colocar os reagentes, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda "on-line". PRECAUÇÃO: Os Calibradores Baixo e Alto fornecidos neste conjunto correspondem à embalagem ReadyPack de reagentes primários. Não misture lotes de calibradores com lotes diferentes de embalagens de reagentes. Estabilidade de utilização e intervalo de calibração Estabilidade de utilização Intervalo de calibração 41 dias 28 dias Adicionalmente, o ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur requer uma calibração de dois pontos: quando houver alteração dos números de lote das embalagens de reagentes primários quando substituir os componentes do sistema quando os resultados do controlo de qualidade se encontrarem repetidamente fora do intervalo PRECAUÇÃO: Elimine as embalagens de reagentes quando o intervalo de estabilidade de utilização expirar. Não utilize os reagentes após o fim do prazo de validade Rev. D, ahbs

6 Anti-HBs 6 / 14 Manual do Ensaio ADVIA Centaur Calibração da curva principal Calibração O ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur requer uma calibração da Curva Principal quando for utilizado um novo número de lote do Reagente Lite, da Fase Sólida e do Reagente Auxiliar. Para cada novo número de lote de Reagente Lite, de Fase Sólida e de Reagente Auxiliar, utilize o leitor de códigos de barras ou o teclado para introduzir no sistema os valores da Curva Principal. O cartão da curva principal contém os valores da curva principal. Para informações pormenorizadas sobre a introdução dos valores de calibração, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda "on-line". Para a calibração do ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur, utilize os calibradores de Anti-HBs ADVIA Centaur fornecidos em cada conjunto. Os calibradores fornecidos neste conjunto correspondem à embalagem ReadyPack de reagentes primários. Utilização das etiquetas de código de barras NOTA: As etiquetas de códigos de barras dos calibradores são específicas para cada número de lote. Não utilize etiquetas de códigos de barras de um lote de calibradores com um lote de calibradores diferente. Utilize as etiquetas de códigos de barras do calibrador de Anti-HBs ADVIA Centaur para identificar os tubos das amostras do Calibrador Baixo e do Calibrador Alto durante a execução do ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur. Coloque a etiqueta de código de barras no tubo da amostra de forma a que os caracteres legíveis na parte lateral da etiqueta fiquem na vertical no tubo da amostra. Efectuar uma calibração Cada lote de calibradores contém um Cartão de Valores Atribuídos ao Calibrador, para facilitar a introdução dos valores de calibração no sistema. Introduza os valores utilizando um leitor de códigos de barras ou o teclado. Para informações pormenorizadas sobre a introdução dos valores do calibrador, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda "on-line". NOTA: Este procedimento utiliza volumes de calibrador suficientes para medir cada calibrador em triplicado. 1. Introduza os calibradores na lista de trabalho. 2. Coloque etiquetas de códigos de barras dos calibradores em dois tubos de amostras: uma para o calibrador baixo e outra para o calibrador alto. NOTA: O volume de cada gota do frasco do calibrador é de cerca de 35 a 40 µl. 3. Misture suavemente os Calibradores Baixo e Alto e distribua, pelo menos, 12 a 14 gotas nos tubos de amostras adequados. 4. Carregue os tubos de amostras num rack. 5. Coloque o rack na fila de entrada das amostras. 6. Certifique-se de que os reagentes para o ensaio estão carregados. 7. Inicie a fila de entrada, se necessário. NOTA: Elimine qualquer quantidade de calibrador que permaneça nos tubos de amostras mais de 8 horas. Não encha novamente os tubos de amostras quando o conteúdo se tiver esgotado; se necessário, distribua calibradores frescos. ahbs Rev. D,

7 Manual do Ensaio ADVIA Centaur Anti-HBs 7 / 14 Controlo de qualidade Para o controlo de qualidade do ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur, utilize materiais de controlo de qualidade Anti-HBs ADVIA Centaur. Consulte o Cartão de Valores Esperados, para ver os valores esperados sugeridos especificamente para o número de lote dos controlos positivo e negativo. Utilização das etiquetas de código de barras NOTA: As etiquetas de códigos de barras dos controlos são específicas do número de lote. Não utilize etiquetas de códigos de barras de um lote de controlos com um lote de controlos diferente. Utilize as etiquetas de códigos de barras do controlo de qualidade do ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur para identificar os tubos das amostras positivas e negativas durante a execução do ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur. Coloque a etiqueta de código de barras no tubo da amostra de forma a que os caracteres legíveis na parte lateral da etiqueta fiquem na vertical no tubo da amostra. Efectuar um controlo de qualidade Para informações pormenorizadas sobre a introdução dos valores do controlo de qualidade, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda "on-line". Para monitorizar o desempenho do sistema e as tendências do gráfico, e como requisito mínimo, as amostras de controlo de qualidade devem ser ensaiadas em cada turno em que as amostras forem analisadas. As amostras de controlo de qualidade também devem ser ensaiadas ao efectuar uma calibração de dois pontos. Manuseie todas as amostras de controlo de qualidade da mesma forma que as amostras de doentes. NOTA: Este procedimento utiliza volumes do controlo suficientes para medir cada controlo em duplicado. 1. Introduza as amostras de controlo de qualidade na lista de trabalho. 2. Coloque etiquetas de códigos de barras dos controlos de qualidade em dois tubos de amostra: uma para o positivo e outra para o negativo. NOTA: O volume de cada gota do frasco do controlo é de cerca de 35 a 40 µl. 3. Misture suavemente os materiais de controlo de qualidade e distribua pelo menos 8 a 10 gotas nos tubos de amostra adequados. 4. Carregue os tubos de amostra num rack. 5. Coloque o rack na fila de entrada das amostras. 6. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio foram carregados. 7. Inicie a fila de entrada, se necessário. NOTA: Elimine quaisquer materiais de controlo de qualidade que permaneçam nos tubos das amostras durante mais de 8 horas. Não encha novamente os tubos das amostras quando o conteúdo se tiver esgotado; se necessário, distribua materiais de controlo de qualidade frescos. Efectuar uma acção correctiva Se os resultados do controlo de qualidade não coincidirem com os valores esperados ou com os valores estabelecidos pelo laboratório, proceda do seguinte modo: considere os resultados das amostras inválidos e repita os testes se os controlos estiverem fora dos intervalos reveja estas instruções para se certificar de que este ensaio foi efectuado de acordo com os procedimentos recomendados pela Bayer HealthCare Rev. D, ahbs

8 Anti-HBs 8 / 14 Manual do Ensaio ADVIA Centaur verifique se os materiais não ultrapassaram o prazo de validade verifique se a manutenção necessária foi efectuada se necessário, contacte a Bayer HealthCare para mais assistência Volume da amostra Este ensaio requer 100 µl de amostra para uma única determinação. Este volume não inclui o volume não utilizável no recipiente da amostra ou o volume adicional necessário para efectuar duplicados ou outros testes na mesma amostra. Para informações pormenorizadas sobre como determinar o volume mínimo necessário, consulte a secção Requisitos do volume da amostra, no Manual de Referência ADVIA Centaur. Procedimento do ensaio Para informações pormenorizadas sobre os procedimentos, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda "on-line". PRECAUÇÃO: Não carregue mais de um tamanho de recipiente da amostra em cada rack. O indicador do rack deve estar colocado na posição correcta correspondente ao tamanho do recipiente da amostra. 1. Prepare o recipiente da amostra para cada amostra e coloque etiquetas de códigos de barras nos recipientes das amostras, conforme necessário. 2. Carregue cada recipiente da amostra num rack e certifique-se de que as etiquetas de códigos de barras ficam bem visíveis. 3. Coloque os racks na fila de entrada. 4. Verifique se os reagentes do ensaio foram carregados. 5. Inicie a fila de entrada, se necessário. Notas sobre procedimentos Efeito "Gancho" de dose elevada No ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur, as amostras de doentes com níveis de anticorpos contra o HBsAg até mui/ml não demonstraram um decréscimo de RLU (efeito de "gancho" ou de inflexão da curva para concentrações elevadas). Eliminação A eliminação de materiais perigosos ou biologicamente contaminados deve ser efectuada de acordo com as práticas da sua instituição. Elimine todos os materiais de forma segura e aceitável, em conformidade com a legislação em vigor. Interpretação dos resultados Para obter informações pormenorizadas sobre a forma como o sistema calcula os resultados, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda "on-line". O sistema comunica os resultados do anticorpo anti-hbs em miu/ml e como reactivos (positivos) ou não reactivos (negativos) ou se o teste precisa de ser efectuado de novo. Não reactivas: Amostras com um valor inicial inferior a 7,5 miu/ml são consideradas não reactivas (negativas) para anticorpos ao HBsAg. Reactivas: Amostras com um valor inicial superior ou igual a 12,5 miu/ml são consideradas reactivas (positivas) para anticorpos ao HBsAg. ahbs Rev. D,

9 Manual do Ensaio ADVIA Centaur Anti-HBs 9 / 14 Limitações Zona de novo teste: Amostras com um valor inicial superior ou igual a 7,5 miu/ml e inferior a 12,5 miu/ml serão sinalizadas como precisando de ser testadas de novo. Estas amostras devem ser testadas de novo em duplicado. Após o novo teste, se pelo menos dois (2) resultados forem superiores ou iguais a 10,0 miu/ml, a amostra é considerada reactiva. Se pelo menos dois (2) resultados forem inferiores 10,0 miu/ml, a amostra é considerada não reactiva. Os resultados das amostras serão considerados inválidos e terão de ser repetidos se os controlos estiverem fora dos intervalos. As amostras com valores calculados iguais ou superiores a 10,0 mui/ml são consideradas reactivas (positivas) de acordo com as directrizes da NCCLS e com base no padrão internacional da OMS para soro anti-hbs como um indicador do estado de imunização e um "cutoff" para detectar a maioria dos indivíduos seropositivos. O "cutoff" para o ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur foi verificado com base na correlação com o padrão da OMS (1 ª Preparação Internacional de Referência ) e com os dados obtidos a partir de resultados de estudos clínicos. O ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur limita-se à detecção de anticorpos contra o HBsAg em soro ou plasma (plasma-edta ou plasma heparinizado) humanos. As características de desempenho do ensaio não foram estabelecidas para casos em que o ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur é utilizado em conjunto com ensaios de outros fabricantes para marcadores serológicos específicos do VHB. As características de desempenho do ensaio não foram estabelecidas para a utilização do ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur como um meio auxiliar na determinação da susceptibilidade à infecção pelo VHB antes ou após a vacinação de lactentes, crianças ou adolescentes. Esse teste não permite distinguir entre a resposta imunológica induzida pela vacina e a resposta imunológica induzida pela infecção pelo VHB. Para determinar se a resposta anti-hbs se deve à vacina ou à infecção pelo VHB, deve ser realizado o teste de anti-hbc integral. O desempenho do ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur não foi determinado com sangue do cordão umbilical, amostras sanguíneas de recém-nascidos, amostras sanguíneas de cadáveres, amostras inactivadas termicamente ou outros líquidos corporais que não soro e plasma, tais como saliva, urina, líquido amniótico ou líquidos pleurais. O desempenho do ensaio não foi estabelecido para populações de doentes imunocomprometidos ou imunossuprimidos. Não utilize amostras com sinais evidentes de contaminação microbiana. Resultados esperados Numa população de 500 amostras não reactivas, 499 foram não reactivas (< 10 miu/ml) utilizando o ensaio ADVIA Centaur Anti-HBs. Numa população de 203 indivíduos reactivos ao anti-hbs ( 10,0 miu/ml utilizando um ensaio de referência), 99% foram reactivos utilizando o ensaio ADVIA Centaur Anti-HBs. Tal como em todos os ensaios de diagnóstico in vitro, cada laboratório deverá determinar o(s) seu(s) próprio(s) intervalo(s) de referência para avaliação diagnóstica dos resultados dos doentes Rev. D, ahbs

10 Anti-HBs 10 / 14 Manual do Ensaio ADVIA Centaur Características de desempenho Sensibilidade e especificidade relativas O desempenho do ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur foi avaliado testando um total de 703 amostras em 2 locais. As amostras incluíram 101 amostras de indivíduos vacinados, 102 amostras de indivíduos infectados por via natural e 500 amostras provenientes de dadores de sangue e de doentes hospitalizados. Os resultados do ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur foram comparados com os resultados obtidos com um ensaio automatizado de EIA para anticorpos anti-hbs. As amostras discordantes foram novamente testadas em duplicado. As amostras que continuaram a apresentar resultados discordantes foram testadas usando um segundo ensaio de EIA para anti-hbs comercialmente disponível, a fim de se obter um resultado consensual. Das 203 amostras inicialmente reactivas utilizando um ensaio anti-hbs EIA disponível no mercado, 2 precisaram de ser testadas de novo, 198 foram reactivas e 3 foram não reactivas utilizando o ensaio ADVIA Centaur Anti-HBs. A sensibilidade relativa inicial foi de 98,5%. Das 500 amostras inicialmente não reactivas utilizando um ensaio anti-hbs EIA disponível no mercado, 3 precisaram de ser testadas de novo, 2 foram reactivas e 495 foram não reactivas utilizando o ensaio ADVIA Centaur Anti-HBs. A especificidade relativa inicial foi de 99,6%. Sensibilidade relativa e Especificidade relativa iniciais Ensaio Anti-HBs de referência Ensaio ADVIA Centaur Anti-HBs Reactivo ( 10 miu/ml) Não reactivo (< 10 miu/ml) Total Reactivo ( 12,5 miu/ml) Zona de teste de repetição (7,5 12,4 miu/ml) Não reactivo (< 7,5 miu/ml) Total Sensibilidade relativa inicial = 98,5% (198/201); Intervalo de confiança de 95% = 95,70 99,69% Especificidade relativa inicial = 99,6% (495/497); Intervalo de confiança de 95% = 98,56 99,95 % Total dos resultados do novo teste = 0,7% (5/703) As amostras com resultados discordantes foram testadas com um segundo ensaio anti-hbs disponível no mercado. A concordância dos métodos de consenso (concordância entre 2 dos 3 ensaios utilizados) determinou a resolução do resultado da amostra. As amostras cujos resultados ficaram dentro da Zona de teste de repetição (7,5 12,4 miu/ml) foram testadas de novo e interpretadas conforme descrito em Interpretação dos resultados. Após a resolução, os valores da sensibilidade e especificidade relativas eram de 99,0% e 99,6% respectivamente, conforme mostrado na tabela seguinte: Sensibilidade relativa e Especificidade relativa (resolvidas) de consenso Ensaio ADVIA Centaur Anti-HBs Resultados de consenso do ensaio Anti-HBs Reactivo ( 10 miu/ml) Não reactivo (< 10 miu/ml) Total Reactivo ( 10,0 miu/ml) Não reactivo (< 10,0 miu/ml) Total Sensibilidade relativa resolvida = 99,0% (200/202); Intervalo de confiança de 95% = 96,47 99,88% Especificidade relativa resolvida = 99,6% (499/501); 95% CI = 98,60 100,00% ahbs Rev. D,

11 Manual do Ensaio ADVIA Centaur Anti-HBs 11 / 14 Reactividade cruzada O ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur foi avaliado relativamente à existência de reactividade cruzada com anticorpos virais e amostras obtidas em estados de doença. O estado de ausência de reactividade com anticorpos anti-hbs de cada amostra foi verificado utilizando um teste de referência de anti-hbs comercialmente disponível. Obtiveram-se os seguintes resultados através da utilização do ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur. Resultados do ADVIA Centaur Anti-HBs Categoria clínica Número testado Não reactivo Reactivo Infecção por Hepatite A (VHA) Infecção por Hepatite C (VHC) Doença do fígado não-viral Artrite reumatóide Doença auto-imune (Lúpus sistémico e ANA) Citomegalovírus (CMV) Vírus Epstein-Barr (EBV) Vírus Herpes Simplex (HSV) Vírus Varicela Zoster (VZV) Infecção por Parvovírus B Rubéola Toxoplasmose Vírus da imunodeficiência humana (HIV-1 & HIV-2) Sífilis Total de amostras testadas Amostras de soro... Demonstraram 15% de alterações dos resultados até... hemolisadas 500 mg/dl de hemoglobina lipémicas 1000 mg/dl de triglicéridos ictéricas 60 mg/dl de bilirrubina conjugada ictéricas 40 mg/dl de bilirrubina não conjugada com proteinemia (elevada) 12 g/dl de proteínas totais com proteinemia (baixa) 3 g/dl de proteínas totais hiper IgG 6 g/dl de imunoglobulina G O teste de interferência foi determinado de acordo com o Documento EP7-P da NCCLS. 11 Paineis de seroconversão Para demonstrar a capacidade do ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur para detectar e monitorizar a resposta imunológica à infecção natural, testaram-se 4 painéis de seroconversão nos centros clínicos do estudo, a fim de determinar a sensibilidade do teste à seroconversão. O desempenho do ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur nos painéis de seroconversão coincidiu estreitamente com o desempenho do ensaio de referência. Obtiveram-se os seguintes resultados: Número do dador do primeiro resultado 10 mui/ml Ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur Ensaio de referência Identificação do painel Tipo Número mui/ml Número mui/ml BBI PHM935B Infecção 31 30,4 > 32 fim do painel PGC 22663D Infecção 34 23, ,0 BCP 6281 Infecção , ,6 PD RP-016 Infecção 11 11, , Rev. D, ahbs

12 Anti-HBs 12 / 14 Manual do Ensaio ADVIA Centaur Precisão Normalização A precisão foi determinada utilizando o estudo da NCCLS sobre precisão ao longo de um período de 20 dias (EP5-A). 12 De acordo com este protocolo, o ensaio foi realizado 2 vezes por dia para 20 "timepoints" ao longo de um período de 35 dias (n = 40 por amostra). Em cada ensaio, as amostras foram testadas em duplicado, utilizando 1 lote de reagente. O instrumento foi calibrado no primeiro ensaio do Dia 1 e recalibrado no intervalo de calibração recomendado. Os resultados do ensaio foram calculados utilizando a calibração de dois pontos armazenada. Obtiveram-se os seguintes resultados: Elemento do painel * NA = Não aplicável Média Durante o processamento Processamento-aprocessamento Total Tipo de amostra (mui/ml) SD CV(%) SD CV(%) SD CV(%) Controlo negativo 0,82 0,03 NA* 0,60 NA 0,90 NA Controlo positivo 113,77 1,98 1,7 2,95 2,6 3,73 3,3 L 7 Soro 7,14 1,05 14,7 0,00 0,0 1,13 15,8 EDTA 7,68 1,25 16,3 0,00 0,0 1,36 17,7 Heparina-lítio 6,61 1,01 15,3 0,29 4,4 1,21 18,3 Heparina sódica 7,54 0,70 9,3 0,81 10,8 1,17 15,5 L 12 Soro 11,87 0,69 5,8 0,57 4,8 0,92 7,7 EDTA 11,85 0,89 7,5 0,78 6,6 1,18 10,0 Heparina-lítio 11,40 1,11 9,7 0,00 0,0 1,18 10,4 Heparina sódica 11,29 0,73 6,5 0,50 4,4 0,92 8,2 L 15 Soro 13,99 1,35 9,6 1,01 7,2 1,69 12,0 EDTA 14,94 0,81 5,4 0,93 6,2 1,24 8,3 Heparina-lítio 15,26 0,69 4,5 0,73 4,8 1,13 7,4 Heparina sódica 15,12 1,08 7,1 0,15 1,0 1,21 8,0 L 100 Soro 100,57 3,20 3,2 4,76 4,7 6,02 6,0 EDTA 92,39 2,72 2,9 3,75 4,1 4,64 5,0 Heparina-lítio 96,83 2,61 2,7 5,10 5,3 5,73 5,9 Heparina sódica 93,12 3,05 3,3 2,03 2,2 4,40 4,7 L 200 Soro 199,17 6,66 3,3 5,50 2,8 9,65 4,8 EDTA 198,67 6,44 3,2 5,48 2,8 8,72 4,4 Heparina-lítio 194,13 5,07 2,6 4,68 2,4 7,28 3,7 Heparina sódica 195,43 6,27 3,2 12,05 6,2 13,66 7,0 O ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur foi normalizado de acordo com a primeira Preparação Internacional de Referência (1977) da Organização Mundial da Saúde (OMS). Os padrões da OMS foram diluídos em série num banco de plasma negativo. Cada diluição foi testada em triplicado no ensaio de Anti-HBs ADVIA Centaur. É seguidamente apresentada uma correlação representativa, juntamente com o declive, a ordenada na origem, o coeficiente de correlação e intervalos de confiança de 95%. ahbs Rev. D,

13 Manual do Ensaio ADVIA Centaur Anti-HBs 13 / 14 Correlação entre os padrões de Anti-HBs ADVIA Centaur e a 1 ª Preparação Internacional de Referência da OMS Assistência técnica Referências Para serviços de atendimento ao cliente, contacte o seu distribuidor ou fornecedor de assistência técnica. 1. Gitlin N. Hepatitis B: diagnosis, prevention, and treatment. Clinical Chemistry 1997;43:8(B): Mahoney, FJ. Update on Diagnosis, Management, and Prevention of Hepatitis B Virus Infection. Clinical Microbiology Reviews 1999;12(2): Juszczyk, J. Clinical course and consequences of hepatitis B infection. Vaccine 2000;18:S23-S Vivek R. Treatment of hepatitis B. Clin Cornerstone 2001;3(6): Centers for Disease Control. Protection Against Viral Hepatitis Recommendations of the Immunization Practices Advisory Committee. MMWR 1990;39(RR-2): National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for handling and processing of blood specimens; second edition; approved guideline. NCCLS Document H18-A2; Wayne (PA):NCCLS;1999 Oct. 40p. 7. Centers for Disease Control. Update: Universal precautions for prevention of transmission of human immunodeficiency virus, hepatitis B virus and other bloodborne pathogens in healthcare settings. MMWR 1988;37:377-82, National Committee for Clinical Laboratory Standards. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections-second edition; approved guideline. NCCLS Document M29-A2. Wayne (PA):NCCLS; 2001 Dec. 105p. 9. Federal Occupational Safety and Health Administration, Bloodborne Pathogens Standard, 29 CFR National Committee for Clinical Laboratory Standards. How to define, determine, and utilize reference intervals in the clinical laboratory; approved guideline. NCCLS Document C28-A. Wayne (PA):NCCLS; National Committee for Clinical Laboratory Standards. Interference Testing in Clinical Chemistry; proposed guideline. NCCLS document EP7-P. Wayne (PA):NCCLS; National Committee for Clinical Laboratory Standards. Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices second edition; approved guideline. NCCLS Document EP5-A. Wayne (PA):NCCLS;1999. A denominação Bayer, a Cruz Bayer, ADVIA Centaur, e ReadyPack são marcas comerciais da Bayer Bayer HealthCare LLC. Todos os direitos reservados. US Pats 4,745,181; 4,918,192; 5,110,932; 5,609,822; 5,656,426; 5,788, Rev. D, ahbs

14 Anti-HBs 14 / 14 Manual do Ensaio ADVIA Centaur ahbs Rev. D,