Manual do ensaio ADVIA Centaur VHC 1 / 14. Ensaio para a detecção de anticorpos de imunoglobulina G (IgG) para o vírus da hepatite C

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1 Manual do ensaio ADVIA Centaur VHC 1 / 14 VHC (HCV) Ensaio para a detecção de anticorpos de imunoglobulina G (IgG) para o vírus da hepatite C Indica informação revisada Resumo do ensaio Conteúdo Aplicação Tipo de amostra Soro, plasma com EDTA, plasma heparinizado com lítio ou Heparina de sódio Volume da amostra 10 µl Calibrador HCV Limite do ensaio Indicador 0,0 11,0 REF Conteúdo Número de testes embalagem de reagentes primários ReadyPack com HCV ADVIA Centaur 200 fase sólida, reagente fluorescente e reagente auxiliar 1 embalagem auxiliar com reagente auxiliar HCV ADVIA Centaur Cartão de curva principal HCV ADVIA Centaur 1 frasco de calibrador baixo HCV 1 frasco de calibrador alto HCV Cartão de valor atribuído ao calibrador HCV ADVIA Centaur Para a definição dos símbolos utilizados nos rótulos dos produtos, consulte Para entender os símbolos no Anexo D. O ensaio VHC ADVIA Centaur é um imunoensaio de diagnóstico in vitro para a determinação qualitativa de anticorpos de imunoglobulina G (IgG) para o vírus da hepatite C (VHC) no soro humano ou plasma (EDTA, heparinizado com lítio ou Heparina de sódio) utilizando o sistema ADVIA Centaur. O ensaio pode ser utilizado em conjunto com outra informação serológica e clínica para ajudar no diagnóstico de indivíduos com sintomas de hepatite e de indivíduos com risco de infecção por hepatite C. Este produto não deve ser utilizado para testar ou analisar amostras agrupadas contendo espécimes de mais de um indivíduo, ou na análise de sangue ou plasma. A aquisição deste produto não transmite qualquer direito ou licença sob quaisquer patentes relevantes para a utilização do produto no teste ou análise de amostras de sangue agrupadas contendo espécimes de mais de um indivíduo ou análise de sangue ou plasma. Materiais necessários mas não fornecidos REF Descrição Conteúdo Material de controlo de qualidade do ensaio HCV ADVIA Centaur (112351) Controlo negativo de 2 x 7 ml Controlo positivo de 2 x 7 ml Cartão do valor previsto Líquido de lavagem 1 ADVIA Centaur 2 x 1500 ml/embalagem Rev. C, ahcv

2 VHC 2 / 14 Manual do ensaio ADVIA Centaur Resumo e explicação do teste O ensaio VHC ADVIA Centaur é um imunoensaio do tipo sanduíche com duplo antigénio utilizado para a detecção do anticorpo IgG para o vírus da hepatite C (VHC) no soro ou plasma humano. O VHC é endémico em todo o mundo e constitui um grave problema de saúde. O VHC é o maior agente etiológico da hepatite não-a, não-b. A presença de anticorpos para o VHC indica que um indivíduo poderá ter sido infectado com VHC ou poderá transmitir a infecção por VHC. 1,2 Pelo menos 170 milhões de indivíduos em todo o mundo estão cronicamente infectados com o VHC. A infecção por VHC é muitas vezes assintomática; no entanto, a maioria (mais de 80%) dos indivíduos expostos ao VHC tornam-se cronicamente infectados. Em 20% destes indivíduos cronicamente infectados, a doença progride para cirrose, insuficiência do fígado e possível carcinoma hepatocelular ou colangiocarcinoma. 1-4 Apesar do grande número de indivíduos cronicamente infectados com VHC, a incidência de infecções por VHC por ano nos países desenvolvidos diminuiu significativamente nas últimas décadas. Tal se deve aos melhores padrões de vida e às alargadas medidas de saúde pública na comunidade médica, tais como a análise do sangue e produtos derivados do sangue, a utilização de seringas e agulhas descartáveis e à implementação de precauções universais em todo o sistema de saúde. 2 As formas comuns de transmissão do VHC incluem a transfusão de sangue, utilização de drogas intravenosas, procedimentos de colocação de piercings ou tatuagens, exposição nosocomial, contacto sexual, contacto doméstico casual, durante as técnicas de reprodução assistida e de mãe para filho durante a gravidez, parto ou período pós-parto. 2,5 O genoma do VHC é constituído por várias regiões funcionais: o núcleo, o invólucro (incluindo regiões E1 e E2), e a região não estrutural (incluindo NS2, NS3, NS4, e NS5). Os imunoensaios para a detecção de anticorpos para o VHC utilizam uma combinação de proteínas sintéticas ou recombinantes como antigénios. 1 O ensaio VHC ADVIA Centaur utiliza dois antigénios VHC recombinantes codificados (c200 e NS5) e um peptídeo (c22) de núcleo codificado de VHC sintético. A proteína c200 deriva de ambas as sequências NS3 e NS4. Dentro das regiões NS3 e NS4 estão localizados, no mínimo, dois epítopos principais. Estes dois importantes epítopos específicos foram extensivamente estudados e revelaram ser importantes para a detecção de anticorpos em indivíduos infectados pelo VHC. O antigénio NS5 é derivado de uma parte suposta de polimerase de ARN do genoma do VHC. Um número significativo de indivíduos infectados com VHC desenvolve uma resposta imunológica ao NS5. O peptídeo c22 é uma sequência de aminoácidos derivado da região nuclear do genoma. Este peptídeo contém o principal epítopo nuclear do VHC. Uma resposta imunológica à proteína nuclear é muitas vezes um indicador precoce de uma infecção por VHC. 1 Princípio do ensaio O ensaio VHC ADVIA Centaur é um imunoensaio do tipo sanduíche com duplo antigénio. A amostra é incubada com fase sólida contendo os antigénios recombinates e de peptídeo de VHC sintético. O complexo antigénio-anticorpo formar-se-á caso o anticorpo anti-vhc esteja presente na amostra. É utilizado reagente fluorescente contendo IgG anti-humano monoclonal marcado com éster de acridínio para detectar o IgG anti-vhc na amostra. O sistema efectua automaticamente as seguintes operações: distribui 10 µl da amostra na cuvete distribui 100 µl de reagente auxiliar e incuba durante 5 minutos a 37 C ahcv Rev. C,

3 Manual do ensaio ADVIA Centaur VHC 3 / 14 distribui 100 µl de fase sólida e 50 µl de reagente auxiliar e incuba durante 18 minutos a 37 C separa a fase sólida da mistura e aspira o reagente não ligado lava a cuvete com o líquido de lavagem 1 distribui 50 µl de reagente fluorescente e incuba a mistura durante 18 minutos a 37 C lava a cuvete com o líquido de lavagem 1 distribui 300 µl de reagente ácido e de reagente básico para iniciar a reacção quimioluminescente comunica os resultados de acordo com a opção seleccionada, conforme descrito nas instruções de funcionamento ou no sistema de ajuda online Existe uma relação directa entre o nível de anticorpos anti-vhc encontrados na amostra do doente e a quantidade de unidades de luz relativa (ULRs) detectada pelo sistema. É determinado um resultado reactivo, não reactivo ou equívoco de acordo com o valor indicador estabelecido com os calibradores. Consulte Interpretação de Resultados para uma descrição do cálculo do valor de cutoff. Recolha e manuseamento da amostra Os tipos de amostra recomendados para este ensaio são o soro, o plasma com EDTA, o plasma heparinizado com lítio ou Heparina de sódio. Não utilize amostras com contaminação microbiana evidente. O desempenho do ensaio VHC ADVIA Centaur não foi determinado com sangue do cordão umbilical, amostras sanguíneas de recém-nascidos, amostras sanguíneas de cadáveres, amostras desactivadas por calor ou outros fluidos corporais para além do soro e do plasma tais como saliva, urina, líquido amniótico ou fluidos pleurais. As recomendações gerais que se seguem para o manuseamento e armazenamento de amostras de sangue são fornecidas pelo National Committee for Clinical Laboratory Standards 6 e completadas com estudos adicionais sobre o manuseamento de amostras com a utilização do ensaio VHC ADVIA Centaur: Manuseie todas as amostras como potenciais transmissores de doenças. As amostras são processadas através da centrifugação, normalmente seguida por uma separação física do soro ou plasma dos eritrócitos. A etapa de centrifugação pode ocorrer até 24 horas após a colheita. Ao testar 10 amostras nas quais a etapa de centrifugação variou até 24 horas após a colheita, não foram observadas diferenças clínicas significativas. Analise as amostras o mais rapidamente possível após a sua recolha. Armazene as amostras entre 2 a 8 C se não forem imediatamente analisadas. Armazene sempre as amostras vedadas e na posição vertical entre 2 e 8 C e até um máximo de 7 dias. Armazene os tubos de amostras primários entre 2 a 8 C até 7 dias. Mantenha sempre as amostras vedadas e na posição vertical. As amostras do tubo primário incluem soro armazenado coagulado, plasma armazenado em glóbulos vermelhos empacotados e amostras processadas e armazenadas em tubos de colheita de amostras com barreira de gel. Ao testar 10 amostras que permaneceram nestes tubos primários até 7 dias, não foram observadas diferenças clínicas significativas. Para um período de armazenamento mais longo, congele as amostras, desprovidas de eritrócitos, a uma temperatura de -20 C ou inferior. Não guarde as amostras num frigorífico com descongelamento automático. Após terem sido submetidas 10 amostras a 4 ciclos de congelamento/descongelamento, não foram observadas quaisquer diferenças clínicas significativas. Misture bem e centrifugue as amostras descongeladas antes de as utilizar Rev. C, ahcv

4 VHC 4 / 14 Manual do ensaio ADVIA Centaur Reagentes Embale e coloque as etiquetas nas amostras para envio de acordo com as normas legais nacionais e internacionais aplicáveis respeitantes ao transporte de amostras clínicas e agentes etiológicos. As amostras mantidas à temperatura ambiente durante 2 dias ou arrefecidas durante 7 dias não demonstraram diferenças qualitativas. Armazene as amostras vedadas e na posição vertical entre 2 a 8 C após a sua chegada. Se o período de envio ultrapassar os 7 dias, envie as amostras congeladas. Antes de colocar as amostras no sistema, verifique o seguinte: As amostras não contêm fibrina ou outras partículas. Remova as partículas através de centrifugação. As amostras não contêm bolhas ou espuma. Armazene os reagentes na posição vertical, a uma temperatura entre 2 e 8 C. Agite manualmente as embalagens de reagentes primários antes de os colocar no sistema. Inspeccione visualmente a parte inferior da embalagem do reagente, para se certificar de que todas as partículas estão dispersas e em suspensão. Para obter informações detalhadas sobre a preparação dos reagentes, Apêndice C Manuseamento de reagentes. Mantenha afastado da luz solar. Proteja as embalagens dos reagentes de todas as fontes de luz. As embalagens dos reagentes carregados no sistema encontram-se protegidas da luz. Armazene as embalagens de reagentes não utilizadas entre 2 e 8 C num local afastado de fontes de luz. Embalagem de reagente Reagente Volume Ingredientes Embalagem de reagentes primários ReadyPack do HCV ADVIA Centaur Embalagem de reagentes auxiliares ReadyPack do HCV ADVIA Centaur Frascos do calibrador HCV Reagente fluorescente Fase sólida Reagente auxiliar Reagente auxiliar Calibradores 10,0 ml/ embalagem de reagente 20,0 ml/ embalagem de reagente 10,0 ml/ embalagem de reagente 20,0 ml/ embalagem de reagente 2,0 ml/ frasco anticorpo monoclonal IgG anti-humano (~0,05 µg/ml) marcado com éster de acridínio tamponado com albumina de sangue bovino, azida sódica (< 0,1%), e tensioactivo complexo pré-formado de micropartículas paramagnéticas revestidas com estreptadivina e antigénio VHC c200 recombinante biotinilado e antigénio VHC c22p sintético biotinilado (~0,3 µg/ml) tamponado com tensioactivo, estabilizadores e conservantes antigénio VHC NS5 recombinante biotinilado (~0,5 µg/ml) tamponado com azida sódica (< 0,1%), e tensioactivo albumina de sangue bovino, soro de cabra, azida sódica (< 0,1%), e tensioactivo plasma humano processado negativo e positivo para o anti-vhc com conservantes Armazenamento 2 8 C 2 8 C 2 8 C 2 8 C 2 8 C Estabilidade até à data de validade no rótulo da embalagem. Para a estabilidade de utilização, consulte Estabilidade de utilização e intervalo de calibração. até à data de validade no rótulo da embalagem. Para a estabilidade de utilização, consulte Estabilidade de utilização e intervalo de calibração. até à data de validade no rótulo da embalagem. Para a estabilidade de utilização, consulte Estabilidade de utilização e intervalo de calibração. até à data de validade no rótulo da embalagem. Para a estabilidade de utilização, consulte Estabilidade de utilização e intervalo de calibração. até à data de validade do frasco ou 8 horas no equipamento ahcv Rev. C,

5 Manual do ensaio ADVIA Centaur VHC 5 / 14 Embalagem de reagente Reagente Volume Ingredientes Frascos de material de controlo de qualidade do HCV* ADVIA Centaur 1* Controlos Líquido de lavagem 1 7,0 ml/ frasco 1500 ml/ embalagem plasma humano processado negativo e positivo para o anti-vhc com conservantes Tampão fosfato salino com azida sódica (< 0,1%) e tensioactivo Armazenamento 2 8 C 2 25 C Estabilidade até à data de validade do frasco ou 8 horas no equipamento até à data de validade do frasco ou 14 dias no equipamento * Consulte Materiais necessários mas não fornecidos PRECAUÇÃO: A azida sódica pode reagir com o cobre e o chumbo existentes nas canalizações, formando azidas metálicas explosivas. Quando eliminar os reagentes, utilize água em abundância, para evitar a acumulação de azidas. Certifique-se primeiro de que a eliminação destes materiais através da rede de esgotos cumpre a legislação em vigor. R43 S24, S37 Para utilizar no diagnóstico in vitro. Colocação dos reagentes Irritante! Pode causar sensibilidade em contacto com a pele. Evitar o contacto com a pele. Usar luvas adequadas. Contém: 5-cloro-2-metil-2H-isotiazol-3-ona e 2-metil-2H-isotiazol-3-ona; calibradores, controlos PRECAUÇÃO! POTENCIAIS RISCOS BIOLÓGICOS: Alguns componentes deste produto contêm material de origem humana. Não existe qualquer método de ensaio conhecido que ofereça a segurança total de que os derivados do sangue humano não transmitam agentes infecciosos. Todos os produtos fabricados a partir de material de origem humana devem ser manuseados como potencialmente infecciosos. Manuseie este produto de acordo com as boas práticas de laboratório e com as precauções universais. 7-9 O controlo negativo foi ensaiado através de métodos aprovados pela FDA e considerados não reactivos para o vírus da hepatite B, anticorpo da hepatite C (VHC) e anticorpo do HIV-1/2. O controlo positivo, o calibrador baixo e calibrador alto foram ensaiados através de métodos aprovados pela FDA e considerados não reactivos para o vírus da hepatite B e anticorpo do HIV-1/2. O controlo positivo, calibrador baixo e calibrador alto contêm plasma humano que é reactivo ao anticorpo do VHC. As unidades foram tratadas com um procedimento de desactivação de beta-propiolactona - raios ultra-violeta 10, contudo, todos os produtos fabricados com o uso de material de origem humana devem ser manuseados como potencialmente infecciosos. Certifique-se de que o sistema contém embalagens suficientes de reagentes primários e auxiliares. Para obter informações mais detalhadas sobre a preparação do sistema, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. PRECAUÇÃO: Inspeccione visualmente a parte inferior da embalagem do reagente, para se certificar de que todas as partículas estão dispersas e em suspensão. Para obter informações detalhadas sobre a preparação dos reagentes, Apêndice C Manuseamento de reagentes. Coloque as embalagens de reagentes primários ReadyPack nos compartimentos dos reagentes primários e utilize as setas das embalagens para as colocar correctamente. O sistema mistura automaticamente as embalagens dos reagentes primários para manter uma suspensão homogénea dos reagentes. Coloque as embalagens dos reagentes auxiliares ReadyPack na entrada do reagente auxiliar. Para informações detalhadas sobre como carregar os reagentes, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. PRECAUÇÃO: Os calibradores baixo e alto fornecidos neste kit são combinados com a embalagem de reagentes primários ReadyPack. Não misture lotes de calibradores com lotes diferentes de embalagens de reagentes. PRECAUÇÃO: O reagente auxiliar fornecido neste kit é combinado com a embalagem de reagentes primários ReadyPack. Não misture lotes de reagentes auxiliares com lotes diferentes de embalagens de reagentes Rev. C, ahcv

6 VHC 6 / 14 Manual do ensaio ADVIA Centaur Estabilidade de utilização e intervalo de calibração Adicionalmente, o ensaio VHC ADVIA Centaur requer uma calibração de dois pontos: ao alterar os números de lote das embalagens dos reagentes primários quando substituir os componentes do sistema quando os resultados do controlo de qualidade se encontram repetidamente fora dos limites PRECAUÇÃO: Elimine as embalagens dos reagentes no final do intervalo de estabilidade de utilização. Não utilize os reagentes para além da data de validade. Calibração da curva principal Calibração Estabilidade de utilização Intervalo de calibração 41 dias 28 dias O ensaio VHC ADVIA Centaur requer uma calibração da curva principal ao utilizar um novo número de lote do reagente fluorescente, fase sólida e reagente auxiliar. Para cada novo lote de reagente fluorescente, fase sólida e reagente auxiliar, utilize o leitor de código de barras ou o teclado para introduzir os valores da curva principal no sistema. O cartão da curva principal contém os valores da curva principal. Para informações detalhadas sobre a introdução dos valores de calibração, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. Para a calibração do ensaio VHC ADVIA Centaur, utilize os calibradores VHC ADVIA Centaur fornecidos com cada kit. Os calibradores fornecidos com este kit são combinados com a embalagem de reagentes primários ReadyPack. Utilização das etiquetas de código de barras NOTA: As etiquetas de código de barras são específicas do número do lote. Não utilizar etiquetas de códigos de barras de um lote de calibradores com qualquer outro lote de calibradores. Utilize as etiquetas de código de barras do calibrador VHC ADVIA Centaur para identificar os recipientes das amostras do calibrador baixo e do alto ao executar o ensaio VHC ADVIA Centaur. Coloque a etiqueta de código de barras no tubo da amostra de forma a que os caracteres legíveis na parte lateral da etiqueta fiquem na posição vertical no tubo da amostra. Efectuar uma calibração Cada lote de calibradores contém um cartão de valor atribuído ao calibrador para facilitar a introdução dos valores de calibração no sistema. Introduza os valores utilizando um leitor de código de barras ou o teclado. Para informações detalhadas sobre a introdução dos valores do calibrador, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. NOTA: Este procedimento utiliza volumes do calibrador suficientes para medir cada calibrador em duplicado. 1. Introduza os calibradores na lista de trabalho. 2. Coloque etiquetas de código de barras dos calibradores em dois recipientes de amostra: uma para o baixo e outra para o alto. NOTA: Cada gota do frasco do calibrador tem aproximadamente 50 µl. 3. Misture suavemente os calibradores baixo e alto e distribua pelo menos 4 a 5 gotas nos recipientes de amostra adequados. ahcv Rev. C,

7 Manual do ensaio ADVIA Centaur VHC 7 / Coloque os recipientes de amostra num porta-amostras. 5. Coloque o porta-amostras na fila de entrada das amostras. 6. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio estão carregados. 7. Inicie a fila de entrada, se necessário. NOTA: Elimine qualquer quantidade de calibrador que permaneça nos recipientes das amostras durante mais de 8 horas. Não encha novamente os recipientes das amostras quando o conteúdo se tiver esgotado; se necessário, distribua calibradores novos. Controlo de qualidade Para o controlo de qualidade do ensaio VHC ADVIA Centaur, utilize materiais de controlo de qualidade VHC ADVIA Centaur. Consulte o cartão de valor previsto para os valores esperados sugeridos, específicos para o número de lote dos controlos positivo e negativo. Utilização das etiquetas de código de barras NOTA: As etiquetas de código de barras dos controlos são específicas do número do lote. Não utilize etiquetas de códigos de barras de um lote de controlos com qualquer outro lote de controlos. Utilize as etiquetas de código de barras dos controlos de qualidade VHC ADVIA Centaur para identificar os recipientes das amostras positivas e negativas ao executar o ensaio VHC ADVIA Centaur. Coloque a etiqueta de código de barras no tubo da amostra de forma a que os caracteres legíveis na parte lateral da etiqueta fiquem na posição vertical no tubo da amostra. Efectuar um controlo de qualidade Para informações detalhadas sobre a introdução dos valores do controlo de qualidade, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. Para monitorizar o desempenho do sistema e as tendências do gráfico, como requisito mínimo, as amostras de controlo de qualidade devem ser ensaiadas em cada turno em que as amostras foram analisadas. As amostras de controlo de qualidade também devem ser ensaiadas ao efectuar uma calibração de dois pontos. Manuseie as amostras de controlo de qualidade da mesma forma que as amostras de doentes. NOTA: Este procedimento utiliza volumes do controlo suficientes para medir cada controlo em duplicado. 1. Introduza as amostras de controlo de qualidade na lista de trabalho. 2. Coloque etiquetas de código de barras dos controlos de qualidade em dois recipientes de amostra: uma para o positivo e outra para o negativo. NOTA: Cada gota do frasco do controlo tem aproximadamente 50 µl. 3. Misture suavemente os materiais de controlo de qualidade e distribua pelo menos 4 a 5 gotas nos recipientes de amostra adequados. 4. Coloque os recipientes de amostra num porta-amostras. 5. Coloque o porta-amostras na fila de entrada das amostras. 6. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio estão carregados. 7. Inicie a fila de entrada, se necessário. NOTA: Elimine quaisquer materiais de controlo da qualidade que permaneçam nos recipientes das amostras durante mais de 8 horas. Não encha novamente os recipientes das amostras quando o conteúdo se tiver esgotado; se necessário, distribua materiais de controlo de qualidade novos Rev. C, ahcv

8 VHC 8 / 14 Manual do ensaio ADVIA Centaur Efectuar uma acção correctiva Se os resultados do controlo de qualidade não coincidirem com os valores previstos ou com os valores estabelecidos pelo laboratório, proceda do seguinte modo: considere os resultados da amostra inválidos e repita os testes dos controlos que não se encontrem dentro dos limites reveja estas instruções para se certificar de que este ensaio foi efectuado de acordo com os procedimentos recomendados pela Bayer HealthCare verifique se os materiais se encontram dentro da validade verifique se a manutenção necessária foi efectuada se necessário, contacte a Bayer HealthCare para mais assistência Volume da amostra Este ensaio requer 10 µl de amostra para uma única determinação. Este volume não inclui o volume não utilizável no recipiente da amostra ou o volume adicional necessário ao efectuar duplicados ou outros testes na mesma amostra. Para informações detalhadas sobre o volume mínimo necessário, consulte Requisitos do volume da amostra no manual de referência ADVIA Centaur. Procedimento do ensaio Para informações detalhadas sobre os procedimentos, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. PRECAUÇÃO: Não coloque mais do que um tamanho do recipiente da amostra em cada porta-amostras. O indicador do porta-amostras deve estar colocado no posicionamento correcto para o tamanho do recipiente da amostra. 1. Prepare o recipiente da amostra para cada amostra e coloque etiquetas de códigos de barras nos recipientes das amostras, conforme necessário. 2. Coloque cada recipiente da amostra num porta-amostras e certifique-se de que as etiquetas do código de barras estão visíveis. 3. Coloque os porta-amostras na fila de entrada. 4. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio estão carregados. 5. Inicie a fila de entrada, se necessário. Notas sobre procedimentos Eliminação A eliminação de material perigoso ou biologicamente contaminado deve ser efectuada de acordo com as práticas da sua instituição. Elimine todos os materiais de uma forma segura e aceitável e em conformidade com todas as normas de segurança e exigências locais. Interpretação dos resultados Para obter informações detalhadas sobre a forma como o sistema calcula os resultados, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. O sistema apresenta resultados de anti-vhc em valores indicadores e como reactivos, não reactivos ou equívocos. ahcv Rev. C,

9 Manual do ensaio ADVIA Centaur VHC 9 / 14 Limitações O algoritmo de teste que se segue tem como base as Directivas para Testes de Laboratório e Relatório de Resultados de Anticorpos para o Vírus da Hepatite C, MMWR 2003: 52(RR03) dos Centers for Disease Control. As amostras com um valor calculado inferior ao valor indicador 0,80 são consideradas não reactivas aos anticorpos IgG para o VHC. As amostras com um valor calculado superior ou igual ao valor indicador 0,80 e inferior ao valor indicador 1,00 são consideradas equívocas. Recomenda-se que a amostra seja repetida em duplicado. Se 2 de 3 resultados da amostra forem inferiores ao valor indicador 0,80, a amostra é considerada não reactiva. Se 2 de 3 resultados da amostra forem superiores ou iguais ao valor indicador 1,00, a amostra é considerada reactiva e recomenda-se um teste suplementar da amostra. Se 2 de 3 resultados da amostra forem superiores ou iguais ao valor indicador 0,80 e inferiores ao valor indicador 1,00, recomenda-se um teste suplementar da amostra. As amostras com um valor calculado superior ou igual ao valor indicador 1,00 são consideradas reactivas aos anticorpos IgG para o VHC. Recomenda-se que a amostra seja repetida em duplicado. Se 2 de 3 resultados da amostra forem inferiores ao valor indicador 0,80, a amostra é considerada não reactiva. Se 2 de 3 resultados da amostra forem superiores ou iguais ao valor indicador 1,00, a amostra é considerada reactiva e recomenda-se um teste suplementar da amostra. Se 2 de 3 resultados da amostra forem superiores ou iguais ao valor indicador 0,80 e inferiores ao valor indicador 1,00, recomenda-se um teste suplementar da amostra. O valor de cutoff para o ensaio VHC ADVIA Centaur foi verificado com base nos resultados da curva característica receptor-operador (ROC). 11 Os resultados das amostras são inválidos e têm de ser repetidos se os controlos estiverem fora dos limites. O ensaio VHC ADVIA Centaur está limitado à detecção de anticorpos IgG para o vírus da hepatite C no soro humano ou plasma (EDTA, plasma com lítio ou heparina de sódio). Um resultado de teste negativo não exclui a possibilidade de exposição ou infecção pelo VHC. Os anticorpos para o VHC poderão não ser detectados em alguns estágios da infecção e em algumas condições clínicas. As características de desempenho do ensaio não foram estabelecidas quando o ensaio VHC ADVIA Centaur é utilizado em conjunto com ensaios de outros fabricantes para os marcadores serológicos específicos do VHC. O desempenho do ensaio VHC ADVIA Centaur não foi determinado com sangue do cordão umbilical, amostras sanguíneas de recém nascidos, amostras sanguíneas de cadáveres, amostras desactivadas por calor, ou outros fluidos corporais para além do soro e do plasma, tais como saliva, urina, líquido amniótico ou fluidos pleurais. O desempenho do ensaio não foi estabelecido para populações de doentes hospedeiros imunodeprimidos ou imunodeficientes. Não utilize amostras com contaminação microbiana óbvia. Os anticorpos heterofílicos no soro humano podem reagir com as imunoglobulinas do reagente, interferindo com os imunoensaios in vitro. 12 Os doentes que estão constantemente em contacto com animais ou com produtos de soro animal podem ser susceptíveis a esta interferência e poderão surgir valores anómalos. Poderá ser necessária informação adicional para o diagnóstico Rev. C, ahcv

10 VHC 10 / 14 Manual do ensaio ADVIA Centaur Resultados esperados Numa população de amostras de 5015 dadores de sangue e 213 doentes hospitalizados, o número de amostras repetidas confirmadas reactivas (valor indicador 1,00) para o anti-vhc com o ensaio VHC ADVIA Centaur foi de 8 (0,15%). Três destas amostras foram confirmadas positivas com o teste suplementar. Da mesma forma que para todos os ensaios de diagnóstico in vitro, cada laboratório deve determinar o(s) seu(s) próprio(s) limite(s) de referência para avaliação diagnóstica dos resultados do doente. 13 Características de desempenho Especificidade e sensibilidade clínica relativas A especificidade e sensibilidade relativas foram determinadas através da comparação do desempenho do ensaio VHC ADVIA Centaur e de um ensaio anti-vhc disponível comercialmente em 2 locais de avaliação. Foram testadas 5015 amostras de dadores de sangue, 213 amostras de doentes hospitalizados e 449 amostras VHC positivas. As amostras reactivas ou equívocas foram repetidas em duplicado. As amostras reactivas ou equívocas repetidas foram confirmadas com um teste imunoblot suplementar. As amostras que apresentaram resultados equívocos não foram incluídas no cálculo da sensibilidade relativa e da especificidade relativa. Especificidade clínica Foram testados uma população de 5015 dadores de sangue e 213 doentes hospitalizados com o ensaio VHC ADVIA Centaur e um ensaio anti-vhc automático disponível comercialmente. O desempenho do ensaio VHC ADVIA Centaur é mostrado na seguinte tabela: Grupo de doentes Número Não reactivo (%) Reactivo (%) Equívoco Teste suplementar positivo Especificidade relativa Dadores de sangue (99,84%) 6 (0,12%) 2 (0,04%) 1 99,90% (5007/5012) Doentes hospitalizados (99,06%) 2 (0,93%) % (210/210) Total (99,80%) 8 (0,15%) 2 (0,038%) 4 99,90% (5217/5222) A sensibilidade relativa do ensaio VHC ADVIA Centaur foi de 99,90% (5217/5222) com um intervalo de confiança 95% (IC) de 99,78 a 99,97%. Sensibilidade clínica Uma população de 449 amostras de doentes com VHC, confirmada como positiva no teste suplementar, foi testada com o ensaio VHC ADVIA Centaur e um ensaio anti-vhc comercialmente disponível. Destas amostras positivas, 449 foram reactivas utilizando o ensaio VHC ADVIA Centaur. A sensibilidade relativa inicial foi de 100%. Ensaio anti-vhc de referência Ensaio VHC ADVIA Centaur Reactivo Não reactivo Total Reactivo (Indicador 1,00) Equívoco (ìndicador 0,80 < 1,00) Não reactivo (Indicador < 0,80) Total A sensibilidade relativa do ensaio VHC ADVIA Centaur foi de 100% (449/449) com um intervalo de confiança 95% (IC) de 99,18 a 100%. ahcv Rev. C,

11 Manual do ensaio ADVIA Centaur VHC 11 / 14 Reactividade cruzada O ensaio VHC ADVIA Centaur foi avaliado para a reactividade cruzada com outros anticorpos virais e amostras de situação de doença. O estado de VHC reactivo de cada amostra foi verificado com o ensaio de referência anti-vhc. Os seguintes resultados foram obtidos através da utilização do ensaio VHC ADVIA Centaur: Número de resultados anti-vhc reactivos Categoria clínica Número testado Ensaio ADVIA Centaur Ensaio de referência Infecção por hepatite A (VHA) Infecção por hepatite B (VHB) Doença do fígado não-viral IgG contra o Vírus Epstein-Barr (EBV) IgM contra o Vírus Epstein-Barr (EBV) IgG contra o Vírus Herpes Simplex (HSV) IgM contra o Vírus Herpes Simplex (HSV) IgG contra a Sífilis Vírus da imunodeficiência humana (HIV1/2) Varicela Zoster (VZV) IgG Citomegalovírus (CMV) IgG Citomegalovírus (CMV) IgM Rubéola IgG Toxoplasma IgG Hepatite alcoólica Multiparidade Frasco da vacina anti-gripe Artrite reumatóide (RF) Anticorpo anti-nuclear (ANA) Lúpus eritematoso sistémico (SLE) Fibromialgia Escleroderma Total de amostras testadas O ensaio VHC ADVIA Centaur foi avaliado quanto à interferência de acordo com o documento EP7-P da NCCLS. 14 Nenhuma das substâncias interferentes nos níveis testados produziram uma alteração na interpretação clínica do ensaio. Amostras de soro que são... Demonstram 10% de alterações dos resultados até... hemolisado 500 mg/dl de hemoglobina lipémico 1000 mg/dl de intralípidos ictérico 60 mg/dl de bilirrubina conjugada ictérico 40 mg/dl de bilirrubina não conjugada proteinémico 12,0 g/dl de proteína proteinémico 3,5 g/dl de proteína Rev. C, ahcv

12 VHC 12 / 14 Manual do ensaio ADVIA Centaur Painéis de seroconversão Os painéis de seroconversão para doentes com VHC comercialmente disponíveis foram testados com o ensaio VHC ADVIA Centaur para determinar a sensibilidade de seroconversão do ensaio. O desempenho do ensaio VHC ADVIA Centaur nos painéis de seroconversão coincidiram substancialmente com o desempenho do ensaio de referência. Foram obtidos os seguintes resultados: Identificação do painel * A diferença nos números de colheita é relativa ao ensaio de referência. Por exemplo, um +1 significa que o ensaio de referência necessitou de 1 colheita adicional antes da reactividade ser determinada em comparação com o ponto no qual o ensaio VHC ADVIA Centaur foi confirmado como reactivo. Precisão Resultado reactivo anti-vhc da data da colheita inicial Ensaio de referência (Dias) Ensaio ADVIA Centaur (Dias) PHV PHV SC SC SC B Ensaio de referência vs Ensaio ADVIA Centaur Diferença nos números da colheita* (Colheitas) A precisão foi avaliada de acordo com o protocolo EP5-A do National Committee for Clinical Laboratory Standards. 15 De acordo com este protocolo, o ensaio foi efectuado 2 vezes por dia durante 20 dias (n = 80 por amostra) utilizando 1 lote de reagentes. O instrumento foi calibrado no primeiro teste do primeiro dia. Os resultados do ensaio foram calculados utilizando a calibração de dois pontos. Foram obtidos os seguintes resultados: Média Intervalo de concentrações Entre testes Total Amostra Indicador SD CV(%) SD CV(%) SD CV(%) Controlo negativo 0,05 0,00 4,1 0,00 4,4 0,01 NA* Controlo positivo 5,43 0,11 2,1 0,14 2,5 0,36 6,6 K2 EDTA 0,07 0,00 4,2 0,01 7,3 0,01 NA K2 EDTA 1,42 0,04 2,5 0,07 4,8 0,10 6,9 K2 EDTA 3,82 0,09 2,4 0,18 4,7 0,24 6,2 K2 EDTA 5,10 0,16 3,2 0,25 4,8 0,31 6,0 K2 EDTA 8,69 0,17 2,0 0,40 4,6 0,43 5,0 ahcv Rev. C,

13 Manual do ensaio ADVIA Centaur VHC 13 / 14 Padronização * NA = Não aplicável. A padronização do ensaio VHC ADVIA Centaur baseia-se no acordo clínico relativo aos ensaios anti-vhc disponíveis no mercado. Os valores atribuídos para os calibradores e controlos são determináveis para esta padronização. Assistência técnica Referências Média Intervalo de concentrações Entre testes Total Amostra Indicador SD CV(%) SD CV(%) SD CV(%) Heparina de lítio 0,08 0,00 3,4 0,00 4,9 0,01 NA Heparina de lítio 1,19 0,04 3,3 0,03 2,7 0,09 7,9 Heparina de lítio 3,89 0,09 2,4 0,09 2,4 0,28 7,3 Heparina de lítio 5,68 0,11 1,9 0,13 2,2 0,38 6,7 Heparina de lítio 8,60 0,15 1,7 0,13 1,5 0,52 6,0 Heparina de sódio 0,23 0,01 4,5 0,03 11,0 0,03 NA Heparina de sódio 1,51 0,07 4,6 0,07 4,6 0,10 6,6 Heparina de sódio 4,04 0,14 3,4 0,16 4,0 0,23 5,7 Heparina de sódio 5,55 0,26 4,7 0,24 4,4 0,36 6,5 Heparina de sódio 8,57 0,21 2,5 0,15 1,8 0,62 7,2 Soro 1 0,12 0,01 9,4 0,00 3,3 0,05 NA Soro 2 1,08 0,03 3,2 0,04 3,7 0,09 8,3 Soro 3 3,83 0,09 2,2 0,10 2,7 0,27 7,0 Soro 4 5,58 0,13 2,3 0,12 2,1 0,37 6,6 Soro 5 7,96 0,11 1,4 0,17 2,1 0,49 6,1 Para serviços de atendimento ao cliente, contacte o seu distribuidor ou fornecedor de assistência técnica. 1. Urdea MS, Wuestehube LJ, et al. Hepatitis C: diagnosis and monitoring. Clinical Chemistry 1997, 43: Zanetti AR, Romano L, Bianchi S. Primary prevention of hepatitis C virus infection. Vaccine 2003 Jan, 21(7-8): El-Serag HB. Hepatocellular carcinoma: an epidemiologic view. J Clin Gastroenterol 2002 Nov-Dec, 35(5-2):S Kunio O, Nakanuma Y, Miyazaki M. Cholangiocarcinoma: recent progress. Part1: epidemiology and etiology. Journal of Gastroenterol and Hepatology 2002, 17: Alter MJ. Prevention of hepatitis C. Hepatology 2002 Nov, 36(5-1):S National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for handling and processing of blood specimens; second edition; approved guideline. NCCLS Document H18-A2; Wayne (PA):NCCLS;1999 Oct. 40p. 7. Centers for Disease Control. Update: Universal precautions for prevention of transmission of human immunodeficiency virus, hepatitis B virus and other bloodborne pathogens in healthcare settings. MMWR 1988;37:377 82, National Committee for Clinical Laboratory Standards. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections-second edition; approved guideline. NCCLS Document M29-A2. Wayne (PA):NCCLS; 2001 Dec. 105p. 9. Federal Occupational Safety and Health Administration, Bloodborne Pathogens Standard, 29 CFR Yoshizawa H, Itoh Y, et al. Beta-propiolactone for the inactivation of non-a/non-b type 1 hepatitis virus capable of inducing cytoplasmic tubular ultrastructures in chipanzees. Vox Sang. 1984, 46: National Committee for Clinical Laboratory Standards. Assessment of the clinical accuracy of laboratory tests using Receiver Operator Characteristics (ROC) plots; approved guideline. NCCLS Document GP-10A. Wayne (PA):NCCLS; Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988;34: Rev. C, ahcv

14 VHC 14 / 14 Manual do ensaio ADVIA Centaur 13. National Committee for Clinical Laboratory Standards. How to define, determine, and utilize reference intervals in the clinical laboratory; approved guideline. NCCLS Document C28-A. Wayne (PA):NCCLS; National Committee for Clinical Laboratory Standards. Interference Testing in Clinical Chemistry; proposed guideline. NCCLS document EP7-P. Wayne (PA):NCCLS; National Committee for Clinical Laboratory Standards. Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices second edition; approved guideline. NCCLS Document EP5-A. Wayne (PA):NCCLS;1999. ADVIA Centaur e ReadyPack são marcas registadas da Bayer HealthCare LLC Bayer HealthCare LLC. Todos os direitos reservados. US Pats 4,745,181; 4,918,192; 5,110,932; 5,656,426; 5,609,822; 5,788,928 Fabricado para Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. pela Bayer Healthcare LLC, Tarrytown NY ahcv Rev. C,