DISCOS PARA ANTIBIOGRAMA CARTUCHO DE 50 DISCOS ESTUDO DE SENSIBILIDADE A AGENTES ANTIMICROBIANOS.

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1 DISCOS PARA ANTIBIOGRAMA CARTUCHO DE 50 DISCOS ESTUDO DE SENSIBILIDADE A AGENTES ANTIMICROBIANOS. 1- INTERESSE CLÍNICO A utilização destes discos consiste em avaliar in vitro, de forma semi-quantitativa, a sensibilidade aos agentes antimicrobianos de bactérias de crescimento rápido e de algumas espécies difíceis, por método de difusão em meio de gelose. Este método segue um procedimento estandardizado, publicado pela WHO e adoptado como norma consensual pelo CLSI/NCCLS e o CA-SFM (submetido a actualizações periódicas). Para recomendações relativas à realização do antibiograma e sua interpretação é favor consultar os documentos do CLSI/NCCLS, CA-SFM, BSAC mais recentes. 2- PRINCÍPIO Os discos de papel, impregnados com uma concentração determinada de agente antimicrobiano, são depositados à superfície de um meio adequado (A) previamente inoculado com um inoculado calibrado (A) de uma cultura pura da bactéria a testar. Após incubação (A), as caixas de Pétri são examinadas e as zonas de inibição que rodeiam os discos são medidas e comparadas com os valores críticos (A) dos diferentes agentes antimicrobianos testados, a fim de se determinar a classificação clínica (resistente, intermédio, sensível). O diâmetro da zona de inibição é proporcional à sensibilidade da bactéria testada. (A) segundo as recomendações em vigor (CLSI/NCCLS, CA-SFM, BSAC ). 3- APRESENTAÇÃO Os dispositivos em causa são discos de 6,5 mm fabricados a partir de papel absorvente de qualidade superior, impregnados de agentes antimicrobianos a concentrações específicas. Os discos estão claramente identificados por meio de uma sigla de 1 a 3 letras, impressa de cada lado do disco (quadro 1). Os discos Bio-Rad apresentam-se em cartucho de 50 discos, acondicionados em embalagens estanques contendo um dessecante. Quadro 1 : Discos para antibiograma CONTEÚDO DO Nº REF. DO SÍMBOLO EMBALAGEM DISCO PRODUTO Amikacin 30 µg AN Amoxicillin 25 µg AMX Amoxicillin + Clavulanic Acid µg AMC Ampicillin 10 µg AM Ampicillin + Sulbactam µg SAM Azithromycin 15 µg AZM Aztreonam 30 µg ATM Bacitracin 130 µg / 10 UI B Carbenicilin 100 µg CB Cefaclor 30 µg CEC Cefalexin 30 µg CN Cefamandole 30 µg MA Cefazolin 30 µg CZ Cefepime 30 µg FEP Cefixime 5 µg 10 µg CFM 5 CFM Cefoperazone 75 µg 30 µg CFP 75 CFP Cefoperazone + Sulbactam µg SCF Cefotaxime 30 µg CTX Cefotetan 30 µg CTT Cefoxitin 30 µg FOX Cefpirome 30 µg CPO Cefpodoxime 10 µg CPD Cefprozil 30 µg CPR Cefsulodin 30 µg CFS Ceftazidime 30 µg CAZ Ceftibuten 30 µg CTB Ceftriaxone 30 µg CRO Cefuroxime 30 µg CXM Cefalotin 30 µg CF

2 CONTEÚDO DO Nº REF. DO SÍMBOLO EMBALAGEM DISCO PRODUTO Chloramphenicol 30 µg C Ciprofloxacin 5 µg CIP Clarithromycin 15 µg CLR Clindamycin 2 µg CM Colistin 10 µg 50 µg CS 10 CS Doripenem 10 µg DORI Doxycycline 30 µg DO Ertapenem 10 µg ETP Erythromycine 15 µg E Flumequine 30 µg UB Fosfomycin 50 µg 200 µg FOS 50 FOS Fusidic Acid 10 µg FA Gentamicin 10 µg 15 µg / 10 UI GM GM Gentamicin (high load) 120 µg 500 µg GEN 120 GEN Imipenem 10 µg IPM Isepamicin 30 µg ISP Kanamycin 30 µg K Kanamycin (high load) 1mg KAN Levofloxacin 5 µg LVX Lincomycin 15 µg L Linezolid 30 µg LZD Mecillinam 10 µg MEC Meropenem 10 µg MEM Metronidazole 4 µg MTR Mezlocillin 75 µg MZ Minocycline 30 µg MNO Moxalactam 30 µg MOX Moxifloxacin 5 µg MXF Mupirocin 5 µg MUP Nalidixic Acid 30 µg NA Neomycin 30 UI N Netilmicin 30 µg NET Nitrofurantoin 300 µg FT Nitroxolin 20 µg NI Norfloxacin 10 µg 5 µg NOR 10 NOR Ofloxacin 5 µg OFX Oxacillin 1 µg 5 µg OX1 OX Oxolinic Acid 10 µg OA Pefloxacin 5 µg PEF Penicillin 6 µg / 10 IU P Pipemidic Acid 20 µg PI Piperacillin 100 µg 75 µg PIP 100 PIP Piperacillin + Tazobactam µg µg TZP 110 TZP Polymixin 50 µg / 300 UI PB Pristinamycin 15 µg PT Quinupristin-Dalfopristin 15 µg QD 15 4 x 50 δίσκοι Rifampicin 5 µg 30 µg RA 5 RA Sparfloxacin 5 µg SPX Spectinomycin 100 µg SPT Spiramycin 100 µg SP Streptomycin 10 µg S Streptomycin (high load) 300 µg 500 µg STR 300 STR Sulfonamides 300 µg 200 µg SSS 300 SSS Teicoplanin 30 µg TEC Telithromycin 15 µg TEL

3 CONTEÚDO DO Nº REF. DO SÍMBOLO EMBALAGEM DISCO PRODUTO Tetracycline 30 µg TE Ticarcillin 75 µg TIC Ticarcillin + Clavulanic Acid µg TCC Tigecycline 15 µg TGC Tobramycin 10 µg TM Trimethoprim + Sulfamethoxazole 1, ,75 µg SXT Trimethoprim 5 µg TMP Vancomycin 30 µg VA *As doses dos discos CLSI/NCCLS estão indicadas a cheio 4- CONSERVAÇÃO A indicação do prazo de validade aplica-se unicamente aos discos contidos em cartuchos intactos, conservados em conformidade com as instruções do fabricante. O prazo de validade e o número de lote estão indicados em cada um dos recipientes (cartucho e embalagem exterior). Os cartuchos de discos devem ser conservados na respectiva embalagem, a uma temperatura entre + 2 e + 8 C, em local seco. Aguardar que as embalagens equilibrem à temperatura ambiente (18-30 C) antes de os abrir; os cartuchos não utilizados deverão ser guardados de novo à temperatura de + 2 e + 8 C, uma vez terminada a colocação dos discos. Não utilizar os discos após o termo do prazo de validade. Não utilizar qualquer cartucho mantido à temperatura ambiente (18-30 C) por mais de 8 horas, sem controlar previamente o respectivo nível de desempenho aceitável (5). Se os cartuchos forem conservados no distribuidor após colocação, este deve ser conservado a C, a seco com dessecantes no interior. A estabilidade dos discos depois dos kits abertos e colocados no distribuidor (preservados de acordo com as recomendações e com excicantes) foi validada em condições de rotina durante 6 semanas, excepto para os discos de antibiótico assinalados pela sigla, para os quais a estabilidade está indicada em semana no interior desta sigla. 5- MATERIAL NECESSÁRIO MAS NÃO FORNECIDO Distribuidor de discos: 6-7 discos ref. nº discos ref. nº meio de cultura (segundo as recomendações em vigor (CLSI/NCCLS, CA-SFM, BSAC ) reagentes estirpes bacterianas para controlo da qualidade controlo de opacidade equivalente à norma Mac Farland 0.5 material de laboratório necessário para realização de antibiogramas pelo método de difusão em meio de gelose. 6- PRECAUÇÕES DE UTILIZAÇÃO Seguir as instruções de utilização das recomendações em vigor (CLSI/NCCLS, CA-SFM, BSAC ). Observar permanentemente as técnicas e precauções em vigor em matéria de protecção contra riscos microbiológicos. Após utilização, esterilizar as culturas e todo o material contaminado. 7- MODO DE FUNCIONAMENTO Amostras: os discos não devem ser utilizados para teste directo em amostras biológicas. Consultar as recomendações em vigor (CLSI/NCCLS, CA-SFM, BSAC ) que especificam a forma de preparação do inoculado a partir de uma cultura pura e recente. Consultar as instruções recomendadas pelo CLSI/NCCLS, CA-SFM, BSAC para todas as etapas conducentes à realização do antibiograma e à obtenção de resultados: um método padrão é proposto pelo CLSI/NCCLS, CA-SFM, BSAC para a preparação do inoculado, a inoculação das caixas de Pétri, a escolha e disposição dos discos a testar, a temperatura e o período de incubação. Recomenda-se igualmente o cumprimento das boas práticas de laboratório. 8- INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS Medir com precisão os diâmetros das zonas de inibição observadas e tomar como referência os diâmetros críticos fornecidos pelas instâncias em vigor (CLSI/NCCLS, CA-SFM, BSAC ). Para um determinado microorganismo é fornecida uma classificação clínica (resistência intermédia, sensível ou não sensível) em função do diâmetro observado e dos diâmetros críticos do antibiótico testado. Estes critérios de classificação clínica segundo os diâmetros críticos são actualizados periodicamente pelo (CLSI/NCCLS, CA-SFM, BSAC ). 3

4 9- DESEMPENHOS/CONTROLO DA QUALIDADE Os desempenhos dos discos antibióticos são controlados de forma sistemática por meio das estirpes seguintes: - Escherichia coli ATCC Staphylococcus aureus ATCC Pseudomonas aeruginosa ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC Neisseria gonorrhoeae ATCC Haemophilus influenzae ATCC Enterococcus faecalis ATCC Clostridium perfringens ATCC Enterococcus faecalis ATCC Clostridium sporogenes ATCC O quadro 2 apresenta, em resumo, os limites aceitáveis dos diâmetros de inibição obtidos por difusão em meio de gelose, para as estirpes de referência a seguir citadas: Dose dos discos Norma Limites aceitáveis dos diâmetros de inibição (mm) E. coli S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae ATCC ATCC ATCC ATCC Amikacin 30 µg CLSI Amoxicillin 25 µg Interna Amoxicillin + Clavulanic Acid 20/10 µg CLSI Ampicillin 10 µg CLSI Ampicillin + Sulbactam 10/10 µg CLSI Azithromycin 15 µg CLSI Aztreonam 30 µg CLSI Bacitracin 10 UI Interna Carbenicilin 100 µg CLSI Cefaclor 30 µg CLSI Cefalexin 30 µg Interna Cefamandole 30 µg CLSI Cefazolin 30 µg CLSI Cefepime 30 µg CLSI Cefixime 10 µg Interna Cefixime 5 µg CLSI Cefoperazone 30 µg Interna Cefoperazone 75 µg CLSI Cefoperazone + Sulbactam 75/30 µg Interna Cefotaxime 30 µg CLSI Cefotetan 30 µg CLSI Cefoxitin 30 µg CLSI Cefpirome 30 µg Interna Cefpodoxime 10 µg CLSI Cefprozil 30 µg CLSI Cefsulodin 30 µg Interna Ceftazidime 30 µg CLSI Ceftibuten 30 µg CLSI Ceftriaxone 30 µg CLSI Cefuroxime 30 µg CLSI Chloramphenicol 30 µg CLSI Ciprofloxacin 5 µg CLSI Clarithromycin 15 µg CLSI Clindamycin 2 µg CLSI Colistin 10 µg CLSI Colistin 50 µg CA-SFM Doripenem 10 µg CLSI Doxycycline 30 µg CLSI Ertapenem 10 µg CLSI Erythromycine 15 µg CLSI Flumequine 30 µg Interna Fosfomycin 50 µg CA-SFM Fosfomycin 200 µg CLSI Fusidic acid 10 µg CA-SFM H. influenzae ATCC

5 Limites aceitáveis dos diâmetros de inibição (mm) Dose dos Norma E. coli S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae H. influenzae discos ATCC ATCC ATCC ATCC ATCC Gentamicin 10 µg CLSI Gentamicin 10 UI CA-SFM Imipenem 10 µg CLSI Isepamicin 30 µg Interna Kanamycin 30 µg CLSI Levofloxacin 5 µg CLSI Lincomycin 15 µg CA-SFM Linezolid 30 µg CLSI Mecillinam 10 µg CLSI Meropenem 10 µg CLSI Mezlocillin 75 µg CLSI Minocycline 30 µg CLSI Moxalactam 30 µg CLSI Moxifloxacin 5 µg CLSI Mupirocin 5 µg Interna Nalidixic Acid 30 µg CLSI Neomycin 30 UI Interna Netilmicin 30 µg CLSI Nitrofurantoin 300 µg CLSI Nitroxolin 20 µg Interna Norfloxacin 5 µg Interna Norfloxacin 10 µg CLSI Ofloxacin 5 µg Interna Oxacillin 5 µg CA-SFM Oxacillin 1 µg CLSI Oxolinic Acid 10 µg Interna Pefloxacin 5 µg CA-SFM Penicillin 6 µg CLSI Pipemidic Acid 20 µg Interna Piperacillin 100 µg CLSI Piperacillin 75 µg Interna Piperacillin + Tazobactam 75/10 µg Interna Piperacillin + Tazobactam 100/10 µg CLSI Polymixin 300 UI CLSI Pristinamycin 15 µg CA-SFM Quinupristin-Dalfopristin 15 µg CLSI Rifampicin 5 µg CLSI Rifampicin 30 µg CA-SFM Sparfloxacin 5 µg CLSI Spectinomycin 100 µg Interna Spiramycin 100 µg Interna Streptomycin 10 µg CLSI Sulfonamides 300 µg CLSI Sulfonamides 200 µg Interna Teicoplanin 30 µg CLSI Telithromycin 15 µg CLSI Tetracycline 30 µg CLSI Ticarcillin 75 µg CLSI Ticarcillin + Clavulanic Acid 75/10 µg CLSI Tigecycline 15 µg CLSI Tobramycin 10 µg CLSI Trimethoprim 5 µg CLSI Trimethoprim + 1,25/23,75 Sulfamethoxazole µg CLSI Vancomycin 30 µg CLSI

6 Para o controlo de qualidade (norma Internaas) : Gentamicin 120 µg : E. faecalis ATCC (16-23 mm) Streptomycin 300 µg : E. faecalis ATCC (14-20 mm) Gentamicin 500 µg : S. aureus ATCC (30-34 mm) ; E. faecalis ATCC ( mm) Kanamycin 1 mg : S. aureus ATCC ( 14 mm) ; E. faecalis ATCC ( 10 mm). Streptomycin 500 µg : S. aureus ATCC (24-28 mm) ; E. faecalis ATCC (14-25 mm). Metronidazole 4µg : Clostridium perfringens ATCC 13124, Clostridium sporogenes ATCC mm Cefoperazone + Sulbactam 75 / 30 µg : E. coli ATCC (24-30 mm) Haemophilus influenzae ATCC é recomendado como estirpe de controlo de qualidade adicional, útil para verificar as propriedades nutricionais do meio HTM. Apesar da falta de critérios interpretativos fiáveis para a S. pneumoniae com certas ß-lactaminas, Streptococcus pneumoniae ATCC é a estirpe designada para o controlo de qualidade de todos os testes do antibiograma para Streptococcus spp. Neisseria gonorrhoeae ATCC é recomendado para testar os discos de espectinomicina com um diâmetro aceitável de 23 a 29 mm (CLSI/NCCLS). A deterioração da dose dos discos de 1 µg oxacilina é melhor estabelecida com Staphylococcus aureus ATCC com um diâmetro de 18 a 24 mm. 10- CONTROLO DE QUALIDADE DO FABRICANTE Todos os produtos fabricados e comercializados pela empresa Bio-Rad são submetidos a um sistema de garantia da qualidade, desde a recepção das matérias primas até à comercialização do produto final. Cada lote de produto final é objecto de um controlo da qualidade, sendo comercializado apenas quando em total conformidade com os critérios de aceitação. A documentação relativa à produção e controlo de cada lote é arquivada pelo fabricante. 11- LIMITES DE UTILIZAÇÃO As classificações clínicas (resistente, intermédio, sensível e não sensível) podem variar apenas de um milímetro, o que corresponde a uma margem de erro comum em laboratório. Outros agentes anti-microbianos para além dos citados no quadro 2 poderão ser igualmente utilizados. Os testes de sensibilidade a estes agentes devem ser interpretados com base na presença ou ausência de uma zona de inibição nítida e devem ser considerados unicamente como qualitativos, esperando que as zonas de interpretação tenham sido estabelecidas. Todos os diâmetros das zonas devem ser recolhidos. A interpretação final, tal como acontece com qualquer interpretação biológica, não pode ser traçada a partir do resultado de um único teste, mas antes de um conjunto de dados clínicos e de resultados bioquímicos, citológicos e imunológicos. Os desempenhos do teste dependem não só da actividade dos discos, como também de factores tais como a utilização de um inoculado, de estirpes de controlo apropriadas, de meios de cultura adaptados, previamente testados, e de uma temperatura de armazenamento adequada. 12- REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. World Heath Organization Expert Committee on Biological Standardization Technical report series 822. W.H.O., Geneva. 2. National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved standard M2-A7. Performance standards for antimicrobial susceptibilitity tests, 7th ed. NCCLS, Wayne, Pa. 3. National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS document M100-S12. Performance standards for antimicrobial susceptibilitity testind, 12th informational, Wayne, Pa. 4. Comité de l antibiogramme French Society of Microbiolgoy. 5. V. Loncle-Provot, E. Keller, M.O. Gourdin, M.L. Garrigues, Etude de la stabilité des disques antibiotiques dans les conditions d'utilisation en routine, 18th interdisciplinary meeting on anti-infectious chemotherapy, Paris, dec.3/ WHO : World Health Organization CLSI/NCCLS : Clinical and Laboratory Standards Institute / National Committee for Clinical Laboratory Standards CA-SFM : Comité de l Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie BSAC : British Society for Antimicrobial Chemotherapy Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) Fax : +33 (0) /2009 6