BD Iso-Res Agar BD Iso-Res Agar (150 mm)

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1 PA INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO MEIOS EM PLACAS PRONTOS A USAR PA Rev.: April 2013 BD Iso-Res Agar BD Iso-Res Agar (150 mm) UTILIZAÇÃO PREVISTA O BD Iso-Res Agar é um meio semi-definido para o teste de sensibilidade de isolados clínicos com o método de difusão de disco (Kirby-Bauer). PRINCÍPIO E EXPLICAÇÃO DO PROCEDIMENTO Método microbiológico Embora tenha sido recomendada, em muitas normas, a utilização de Mueller Hinton II Agar para os testes de sensibilidade, foram colocadas várias questões contra a sua utilização como, por exemplo, uma reprodutibilidade insuficiente entre os vários lotes e problemas com os testes às tetraciclinas e ao trimetoprim. 1-3 O Iso-Res Agar (também descrito como um Meio Iso-Sensitest) foi especificamente desenvolvido para eliminar estes problemas. 4-6 Os ingredientes foram cuidadosamente seleccionados para dar origem a zonas de inibição nítidas e reprodutíveis. Este meio contém apenas baixos níveis de timina ou timidina, pelo que os testes das sulfonamidas e do trimetoprim não são influenciados por estes antagonistas. Deste modo, o BD Iso-Res Agar é uma excelente alternativa ao Mueller Hinton II Agar para testes de sensibilidade com difusão de disco. As dimensões das zonas de inibição descritas na Norma NCCLS M2-A7 são válidas para o meio de Mueller Hinton Agar, pelo que podem diferir das determinadas para o BD Iso-Res Agar. 8 Este meio é recomendado pelo sistema holandês WRG. 9 A caseína e as peptonas especialmente seleccionadas fornecem os nutrientes básicos, ao passo que muitos dos compostos definidos do meio fornecem nutrientes, vitaminas e vestígios de minerais. REAGENTES BD Iso-Res Agar Fórmula* por Litro de Água Purificada Caseína hidrolisada 11,0 g Menadiona (Vitamina K3) 0,001 Peptona 3,0 Cianocobalamina (Vitamina B12) 0,001 Glucose 2,0 L-Cisteína 0,02 Cloreto de sódio 3,0 L-Triptofano 0,02 Amido 1,0 Piridoxina (Vitamina B6) 0,003 Fosfato dissódico de hidrogénio 2,0 Pantotenato 0,003 Acetato de sódio 1,0 Nicotinamida 0,003 Glicerofosfato de magnésio 0,2 Biotina 0,0003 Gluconato de cálcio 0,1 Tiamina 0,00004 Cobalto-II-Sulfato 0,001 Adenina 0,01 Cobre-II-Sulfato 0,001 Guanina 0,01 Sulfato de zinco 0,001 Xantina 0,01 Sulfato ferroso 0,001 Uracil 0,01 Manganésio-II-Cloreto 0,002 Ágar 8,0 ph 7,4 ± 0,2 *Ajustada e/ou suplementada conforme necessário para cumprir os critérios do desempenho. PRECAUÇÕES. Apenas para uso profissional. Não utilizar as placas que apresentem sinais de contaminação microbiana, descoloração, secura, fissuras ou outros sinais de deterioração.

2 Consultar as INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO para informação sobre os procedimentos de manuseamento asséptico, os riscos biológicos e os procedimentos de eliminação do produto usado. ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE Após recepção das placas, conservar no escuro a uma temperatura entre 2 e 8 C, dentro do invólucro original até ao momento da utilização. Evitar congelar e aquecer excessivamente. As placas podem ser inoculadas até ao prazo de validade (ver a etiqueta da embalagem) e incubadas durante o tempo de incubação recomendado. As placas são fornecidas em pilhas de 10 placas e, quando uma destas pilhas é aberta, as respectivas placas terão de ser utilizadas no prazo máximo de uma semana, se forem conservadas em local limpo a uma temperatura entre 2 e 8 C. CONTROLO DE QUALIDADE PELO UTILIZADOR Para pormenores de inoculação e leitura dos resultados, consultar as secções Procedimento do teste e Resultados. As placas de BD Iso-Res Agar e os discos de antimicrobiano utilizados por rotina devem ser testados pelo menos duas vezes por semana para ver se estão a funcionar correctamente, utilizando para tal as estirpes de teste mencionadas na secção CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO. Aspecto do meio não inoculado: incolores a âmbar claro. PROCEDIMENTO Materiais fornecidos BD Iso-Res Agar (placas Stacker de 90 mm) ou BD Iso-Res Agar (placas de 150 mm). Microbiologicamente controlados. Materiais não fornecidos 1. Meio líquido para inóculo em tubos como, por exemplo, Meio líquido de soja BD Trypticase (Meio líquido de soja-caseína digerida) ou Meio líquido de Mueller Hinton II (ajustado para catiões), para preparação de um inóculo padrão, e um meio líquido estéril ou solução salina para diluição do inóculo. 2. Padrão de sulfato de bário para comparação (0,5 ml de 0,048 M BaCl 2 [1,175% p/v BaCl 2. 2H 2O] a 99,5 ml de 0,18 M [0,36 N] H 2 SO 4 [1% v/v]). 3. Um dispositivo de fotometria para ajustamento da turvação da suspensão do inóculo a um padrão 0,5 da escala de McFarland. 4. Como alternativa aos materiais acima indicados (1-3), pode utilizar-se o Sistema de Inoculação BD Prompt (dispositivo volumétrico de preparação de inóculos). 6,18 5. Discos de papel impregnados com quantidades especificadas de agentes antimicrobianos 6, tais como os discos do teste de sensibilidade BD Sensi-Disc. 6. Dispositivo de distribuição, tal como o Dispensador com 6, 8 ou 12 lugares BD Sensi-Disc. Um dispensador adequado também se encontra disponível para as placas Mueller Hinton II Agar Square. 7. Régua ou outro dispositivo para medir as dimensões das zonas em milímetros. 8. Meios de cultura auxiliares, reagentes e equipamento laboratorial, conforme necessário. Tipos de amostra Este produto é utilizado apenas para testes de sensibilidade de culturas puras e não se destina a utilização directa em amostras clínicas (consultar também CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO). Procedimento do teste Suspender a estirpe de teste em Meio líquido de soja Trypticase ou solução salina e ajusta a turvação de acordo com o padrão 0,5 de McFarland. Decorridos 15 min após o ajustamento da turvação do inóculo, mergulhar uma zaragatoa estéril no inóculo diluído correctamente e rodar várias vezes, com firmeza, contra a parte superior da parede interna do tubo, para remover o líquido em excesso. Em alternativa, pode utilizar-se o Sistema de inóculo BD Prompt. PA

3 Inocular toda a superfície do ágar da placa três vezes, rodando a placa 60 entre cada série de riscos, para obter uma inoculação uniforme. Aplicar os discos de antimicrobiano utilizando um dispensador de discos de antimicrobiano, tendo cuidados de assepsia. Depositar os discos de forma a que o intervalo entre o seu centro seja de, pelo menos, 24 mm. Depois de os discos serem colocados no ágar, é necessário pressioná-los com uma agulha ou pinça estéreis para estabelecer contacto total com a superfície do meio. Esta etapa não é necessária se os discos tiverem sido colocados com o Dispensador Auto-Impactador de 6, 8 ou 12 Lugares BD Sensi-Disc. Num período de 15 minutos após a aplicação dos discos, inverter as placas e incubar a uma temperatura entre 35 e 37 C numa atmosfera aeróbia durante 24 horas. Resultados Após a incubação, medir o diâmetro das zonas com inibição total (conforme observado a olho nu), incluindo o diâmetro do disco, arredondando ao milímetro, utilizando um compasso deslizante, uma régua ou um modelo preparado para este efeito. O dispositivo de medição é colocado no fundo da placa invertida sobre um plano de fundo preto, não reflector, e iluminado por cima. O valor final deve corresponder à área que não exibe qualquer crescimento visível detectável a olho nu. Ignorar o crescimento ténue de pequenas colónias, que só pode ser detectado com dificuldade no limite da zona de inibição evidente. Os resultados são classificados como resistente, intermédio ou sensível. Convém referir que as dimensões das zonas nem sempre são comparáveis às que se podem observar com o Mueller Hinton II Agar (consultar Limitações do Procedimento). CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO Este meio foi avaliado internamente. Os limites das dimensões das zonas baseiam-se em resultados obtidos a partir de, pelo menos, 3 lotes diferentes de BD Iso-Res Agar: Estirpes BD Sensi-Disc Limite previsto (mm) Escherichia coli ATCC Ampicilina AM Entero- Mezlocilina MZ Mezlocilina MZ Cefalotina CF Eritromicina E Cefotaxima CTX ATCC 29212ATCC SXT Estirpes BD Sensi-Disc Limite previsto (mm) Ampicilina AM coccus faecalis Imipenem IPM Gentamicina GM E. faecalis Ampicilina AM Amicacina AN ATCC Mezlocilina MZ Ofloxacina OFX Eritromicina E Ciprofloxacina CIP SXT SXT Staphylococcus Penicilina G P Pseudo- Ticarcilina TIC Oxacilina OX monas Azlocilina AZ aureus Cefalotina CF aeruginosa Aztreonam ATM ATCC Cefotaxima CTX ATCC Amicacina AN Tetraciclina TE Gentamicina GM Gentamicina GM Ceftazidima CAZ Eritromicina E Lincomicina L Ofloxacina OFX SXT O método da difusão de disco só deve ser utilizado com estirpes bacterianas como Enterobacteriaceae, estafilococos, enterococos ou outras que produzam colónias bem desenvolvidas num período de incubação de 18 a 24 horas em meios de cultura sem sangue e que se desenvolvem de forma aeróbia. Para mais pormenores, consultar a norma NCCLS. 7 PA

4 O testes e os métodos descritos mais acima só devem ser utilizados com culturas puras de bactérias. O método que aqui se descreve para a preparação do inóculo e para a inoculação é o que se descreve na norma NCCLS. 7 Foram desenvolvidas outras normas nacionais para os testes de sensibilidade antimicrobiana de acordo com o procedimento de Bauer-Kirby. Nessas normas, as densidades do inóculo e o método de inoculação podem diferir da Norma NCCLS. Embora não existam normas comuns europeias para os testes de sensibilidade, deve consultar-se as normas locais se as Directivas NCCLS não se aplicarem. As dimensões das zonas nos testes de sensibilidade obtidas com este meio não estão necessariamente de acordo com as obtidas com o meio Mueller Hinton II Agar na Norma NCCLS M2-A6. 7,8 Recomenda-se, portanto, comparar as dimensões das zonas obtidas com os dois meios utilizando discos de antimicrobiano testados por rotina utilizando BD Iso-Res Agar. Uma concentração de inóculo inadequada poderá produzir resultados incorrectos. As zonas de inibição poderão ser muito pequenas se o inóculo for muito concentrado e poderão ser muito grandes e difíceis de medir se o inóculo for pouco concentrado. O armazenamento incorrecto dos discos de antimicrobiano pode conduzir à perda de potência ou a um resultado de falsa resistência. Poder-se-ão encontrar bactérias que requerem timina ou timidina. É possível que estes microrganismos não se desenvolvam de modo satisfatório neste meio uma vez que o mesmo contém baixos níveis de timina ou timidina. A sensibilidade in vitro de um microrganismo a um agente antimicrobiano específico não significa, necessariamente, que esse agente seja eficaz in vivo. BIBLIOGRAFIA 1. Ericsson, H.M, and J.C. Sherris Acta Pathol. Microbiol. Scand. Suppl. 217: Garrod, L.P., and P.M. Waterworth J. Clin. Pathol. 24: Reller, L.B., et al J. Infect. Dis. 130: Reynolds, A.V., et al Brit. Med. J. II: Stewart, S.M., et al J. Clin. Pathol. 28: Bell, S.M Pathology 7, Suppl.: National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved standard: M2-A7. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests, 7 th ed. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Wayne, Pa. 8. Jorgensen, J.H., and J.D. Turnidge Susceptibility test methods: dilution and disk diffusion methods. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. USA. 9. Werkgroep Richtlijnen Gevoeligheidsbepalingen Standaardisatie van Gevoeligheidsbepalingen. Bilthoven, The Netherlands. EMBALAGEM / APRESENTAÇÃO BD Iso-Res Agar Cat. No Meios em placas prontos a usar, 20 placas Cat. No Meios em placas prontos a usar, 120 placas BD Iso-Res Agar (150 mm) Cat. No Meios em placas prontos a usar, 20 placas INFORMAÇÕES ADICIONAIS Para obter informações adicionais, contacte o representante local da BD. PA

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