Sistemas de Recipiente Produtor de Gás GasPak EZ

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1 Sistemas de Recipiente Produtor de Gás GasPak EZ / /09 Português UTILIZAÇÃO PREVISTA Os Sistemas de Recipiente Produtor de Gás GasPak EZ são sistemas multi-usos que produzem atmosferas adequadas para sustentar o isolamento primário e a cultura de bactérias anaeróbicas, microaerofílicas ou capnofílicas através da utilização de saquetas produtoras de gás no interior de recipientes de incubação multi-usos. RESUMO E EXPLICAÇÃO Em 1965, Brewer e Allgeier introduziram um invólucro descartável produtor de hidrogénio, que foi mais tarde modificado de forma a incluir a produção de dióxido de carbono e um catalisador interno. 1,2 Os Sistemas de Recipiente Produtor de Gás GasPak EZ facultam bio-desempenho e fiabilidade sem a necessidade de um catalisador nem de um procedimento de activação. As Saquetas Produtoras de Gás GasPak EZ contêm todos os ingredientes necessários à criação de uma atmosfera específica para incubação de amostras. A saqueta e as amostras são colocadas no Recipiente de Incubação de plástico transparente e empilhável GasPak EZ. O recipiente é selado e incubado. O GasPak EZ Incubating Container padrão, Nº de Cat , suporta placas de Petri BBL Stacker. O GasPak EZ Incubating Container grande, Nº de Cat , suporta placas de Petri BBL Stacker ou uma combinação de placas de Petri e de meios de cultura em tubo. O BBL GasPak 100 System, Nº de Cat , suporta 12 placas de Petri BBL Stacker ou uma combinação de placas de Petri e de meios de cultura em tubo. O BBL GasPak 150 Large Anaerobic System, Nº de Cat , suporta 36 placas de Petri BBL Stacker ou uma combinação de placas de Petri e de meios de cultura em tubo. PRINCÍPIOS DO PROCEDIMENTO A Saqueta Produtora de Gás GasPak EZ consiste de uma saqueta de reagente contendo carbonato inorgânico, carvão activado, ácido ascórbico e água. Quando a saqueta é retirada do invólucro exterior, a saqueta activa-se por exposição ao ar. A saqueta de reagente activado e as amostras são colocadas no Recipiente de Incubação GasPak EZ e o recipiente é selado. A saqueta reduz rapidamente a concentração de oxigénio no interior do recipiente. Ao mesmo tempo, o carbonato inorgânico produz dióxido de carbono. Para cultura de bactérias anaeróbicas, as saquetas do GasPak EZ Anaerobe Container System produzem uma atmosfera anaeróbica no prazo de 2,5 h, com uma concentração de dióxido de carbono igual ou superior a 15% no prazo de 24 h. Para cultura de bactérias microaerofílicas, as saquetas do GasPak EZ Anaerobe Container System produzem uma atmosfera microaerofílica no prazo de 2 h, com uma concentração aproximada de 6 16% de oxigénio e de 2 10% de dióxido de carbono no prazo de 24 h. Para cultura organismos que exigem dióxido de carbono, as saquetas do GasPak EZ CO 2 Container System produzem uma atmosfera no prazo de 24 h, com uma concentração de dióxido de carbono igual ou superior a 2,5%. REAGENTES Advertências e Precauções: Para diagnóstico in vitro. Cumpra as precauções estabelecidas contra perigos microbiológicos em todos os procedimentos. Antes de descartar, esterilize em autoclave os recipientes de amostras e outro material contaminado. Após a utilização, a saqueta pode permanecer quente. Descarte a saqueta depois da reacção estar concluída (depois de ter arrefecido). NÃO utilize a saqueta se a folha de alumínio exterior se apresentar aberta ou de algum modo danificada. Evite a luz solar directa e temperaturas excessivas. NÃO empilhe as saquetas quando utilizar mais do que uma. NÃO abra a recipiente enquanto a incubação não estiver concluída. As saquetas do GasPak EZ Container System destinam-se a ser utilizadas em Recipientes de Incubação GasPak EZ e BBL GasPak 100 System ou BBL GasPak 150 Large Anaerobic System. A sua utilização em outros sistemas pode produzir resultados enganadores. Os GasPak EZ Incubation Containers são concebidos para saquetas do GasPak EZ Container System. Não utilize com outras saquetas ou invólucros produtores de gás (por ex. invólucros BBL GasPak/GasPak Plus). Instruções de Armazenamento: Após recepção, conserve as saquetas entre 2 25 C num ambiente seco. As saquetas do GasPak EZ Container System são prontas a utilizar. O prazo de validade refere-se a saquetas não abertas, intactas e armazenadas adequadamente. Abra apenas quando estiver pronto a utilizar. Deterioração do Produto: Não utilize saquetas de reagente caso a embalagem exterior se apresente aberta ou danificada. Não utilize recipientes que apresentem rachas, lascas, juntas danificadas ou outras irregularidades. Ingredientes Activos: Ácido ascórbico, carvão activado e água Advertência: O carvão activado é irritante para os olhos, o sistema respiratório e a pele.

2 PROCEDIMENTO Materiais Fornecidos: GasPak EZ Container System. Cada sistema requer a utilização de um recipiente e de saqueta(s) (Ver Disponibilidade ). Recipiente Nº de Saquetas GasPak EZ Standard Incubation Container (Nº de Cat ) 2 GasPak EZ Large Incubation Container (Nº de Cat ) 3 BBL GasPak 100 System (Nº de Cat ) 1 BBL GasPak 150 Large Anaerobic System (Nº de Cat ) 3 Materiais Necessários mas Não Fornecidos: GasPak EZ Incubation Container Rack (Ver Disponibilidade ), BBL GasPak tube holder, meios auxiliares de cultura, reagentes, indicadores anaeróbicos, organismos de controlo da qualidade e equipamento de laboratório necessário para este procedimento. Procedimento do Teste: 1. Coloque as placas desejadas no suporte no interior do GasPak EZ Incubation Container. (Se utilizar tubos no frasco BBL GasPak, utilize o BBL GasPak tube holder, Nº de Cat ) 2. Utilize o quadro acima para determinar o número de saqueta(s) necessária(s) por recipiente. Retire a(s) saqueta(s) do GasPak EZ Container System da caixa. Remova a embalagem exterior de alumínio. 3. Coloque as saquetas activadas no GasPak EZ Incubation Container ou no frasco BBL GasPak com as placas. A(s) saquetas devem ser colocadas paralelamente às placas, entre o suporte da placa e o exterior do recipiente. Se utilizar a saqueta GasPak EZ Anaerobe para incubação, adicione agora um indicador anaeróbico (N. de cat ) ao recipiente ou frasco. Se utilizar o GasPak EZ com indicador, não necessidade de adicionar qualquer indicador de O 2. O indicador de O 2 estará branco quando a saqueta for removida da embalagem de alumínio e torna-se gradualmente azul à medida que a saqueta é exposta a uma atmosfera oxigenada; regressará à cor branca quando o ambiente for reduzido. 4. Feche o GasPak EZ Container encaixando a tampa no fundo do recipiente. Feche completamente os quatro fechos. Se utilizar o frasco BBL GasPak, consulte o folheto informativo do frasco. 5. Incube o GasPak EZ Container System à temperatura apropriada para o organismo em cultura, mas não excedendo 45 ºC. Os GasPak EZ Incubation Containers podem ser empilhados para poupar espaço na incubadora. 6. Após a incubação, abra o recipiente, retire as placas e elimine as saquetas do GasPak EZ Container System de forma apropriada. Recomendações sobre Manutenção: O cuidado correcto do GasPak EZ Incubation Container consiste no seguinte: 1. Evite o contacto com abrasivos. 2. Evite o contacto com solventes e detergentes. 3. Enxagúe e seque minuciosamente após a limpeza com um detergente suave. 4. Nunca autoclave o recipiente nem a tampa. Controlo de Qualidade pelo Utilizador: Cada Sistema de Recipiente Produtor de Gás GasPak EZ deve ser testado periodicamente para verificação da sua capacidade para fornecer as condições adequadas ao crescimento das bactérias apropriadas. Sistema Organismo de CQ GasPak EZ Anaerobe Container System Bacteroides fragilis ATCC GasPak EZ Campy Container System Campylobacter jejuni ATCC GasPak EZ CO 2 Container System Neisseria gonorrhoeae ATCC Os requisitos do controlo de qualidade devem ser efectuados de acordo com os regulamentos ou requisitos de acreditação locais e/ou nacionais e com os procedimentos padrão de controlo de qualidade do seu laboratório. É recomendado que o utilizador consulte as orientações do CLSI (anteriormente NCCLS) e os regulamentos da CLIA pertinentes sobre as práticas de controlo de qualidade apropriadas. RESULTADOS As condições anaeróbicas são atingidas no prazo de 2,5 h, com uma concentração de dióxido de carbono igual ou superior a 15% no prazo de 24 h a 35 C. Deve formar-se uma condensação visível no prazo de 30 minutos depois da activação. As placas de agar contendo sangue tornam-se reduzidas no prazo de 2 4 h a 35 C. O indicador anaeróbio integrado deverá apresentar-se reduzido (branco) dentro de 9 h a 35 C. As condições microaerofílicas são atingidas no prazo de 2 h, com uma concentração aproximada de oxigénio de 6 16% e uma concentração de dióxido de carbono de 2 10% a 35 C no prazo de 24 h. As condições enriquecidas em dióxido de carbono são atingidas no prazo de 24 h, com uma concentração de dióxido de carbono igual ou superior a 2,5% a 35 C. CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO GasPak EZ Anaerobic Container System (260678) Antes da comercialização, amostras representativas de cada lote de saquetas do GasPak EZ Anaerobic Container System são testadas relativamente às suas características de desempenho. Cada saqueta de amostra do GasPak EZ Anaerobic Container System é activada e colocada no recipiente de incubação juntamente com um indicador anaeróbico. O recipiente é fechado de acordo com as instruções do rótulo e observado durante necessário até se formar condensação visível. Em seguida o recipiente é incubado a 35 ± 2 C. Ao fim de aproximadamente 2,5 h, é introduzida uma agulha de 3,8 cm e calibre 22 no recipiente de incubação e é retirada uma amostra de gás, a qual é colocada num cromatógrafo de gás e analisada relativamente ao montante de 2

3 oxigénio presente no recipiente de incubação. A percentagem de oxigénio de cada recipiente é inferior ou igual a 1% e a percentagem média de todas as amostras testadas relativamente ao oxigénio é inferior a 0,7%. Ao fim de aproximadamente 24 h de incubação a 35 ± 2 C, é colhida outra amostra do recipiente e analisada relativamente ao montante de dióxido de carbono. A percentagem de dióxido de carbono de cada recipiente é superior ou igual a 15%. Os indicadores anaeróbios ficarão brancos (reduzidos) dentro de 9 h. O tempo médio para aparecer condensação visível no interior dos recipientes de incubação são 20 minutos após a activação. GasPak EZ Anaerobic System with Indicator (260001) Antes da comercialização, amostras representativas de cada lote de saquetas do GasPak EZ Anaerobic System with Indicator são testadas relativamente às suas características de desempenho. Cada saqueta de amostra com indicador do GasPak EZ Anaerobic System with Indicator é activada e colocada no recipiente de incubação. O recipiente é fechado de acordo com as instruções do rótulo e observado durante necessário até se formar condensação visível. Em seguida o recipiente é incubado a 35 ± 2 C. Ao fim de aproximadamente 2,5 h, é introduzida uma agulha de calibre 22 3,8 cm ligada a uma seringa de 3 ml no recipiente de incubação e é retirada uma amostra de gás, colocada no cromatógrafo de gás e analisada relativamente ao montante de oxigénio presente no recipiente de incubação. A percentagem de oxigénio de cada recipiente é inferior ou igual a 1% e a percentagem média de todas as amostras testadas relativamente ao oxigénio é inferior a 0,7%. Ao fim de aproximadamente 24 h a 35 ± 2 C, é colhida outra amostra do recipiente e analisada relativamente ao montante de dióxido de carbono. A percentagem de dióxido de carbono de cada recipiente é superior ou igual a 15%. A redução da pastilha de indicador anaeróbico acoplada à saqueta deve ocorrer no prazo de 24 h de incubação a 35 ± 2 C. O tempo médio para aparecer condensação visível no interior dos frascos são 20 minutos após a activação. GasPak EZ Campy Container System (260680) Antes da comercialização, amostras representativas de cada lote de GasPak EZ Campy Anaerobic Container System são testadas relativamente às suas características de desempenho. Cada saqueta de amostra do GasPak EZ Campy Container System é activada e colocada no recipiente de incubação. O recipiente é fechado de acordo com as instruções do rótulo e observado durante necessário até se formar condensação visível. Em seguida o recipiente é incubado a 35 ± 2 C. Ao fim de aproximadamente 2 h, é introduzida uma agulha de 3,8 cm e calibre 22 no recipiente de incubação e é retirada uma amostra de gás, a qual é colocada num cromatógrafo de gás e analisada relativamente ao montante de oxigénio presente no recipiente de incubação. A percentagem de oxigénio de cada recipiente é de 6 a 16%. Ao fim de aproximadamente 24 h de incubação a 35 ± 2 C, é colhida outra amostra do recipiente e analisada relativamente ao montante de dióxido de carbono. A percentagem de dióxido de carbono de cada recipiente é de 2 a 10%. O tempo médio para aparecer condensação visível no interior dos recipientes de incubação são 20 minutos após a activação. GasPak EZ CO 2 Container System (260679) Antes da comercialização, amostras representativas de cada lote de GasPak EZ CO 2 Container System são testadas relativamente às suas características de desempenho. Cada saqueta de amostra do GasPak EZ CO 2 Container System é activada e colocada no recipiente de incubação juntamente com 2 placas de Petri cheias. O recipiente é selado de acordo com as instruções do rótulo e incubado a 35 ± 2 C. Ao fim de aproximadamente 24 h, é introduzida uma agulha de 3,8 cm e calibre 22 no recipiente de incubação e é retirada uma amostra de gás, a qual é colocada num cromatógrafo de gás e analisada relativamente ao montante de dióxido de carbono presente no recipiente de incubação. A percentagem de dióxido de carbono de cada recipiente é superior ou igual a 3%. DISPONIBILIDADE Nº de Cat. Descrição GasPak EZ Standard Incubation Container (15-18 placas) GasPak EZ Large Incubation Container (30-33 placas) GasPak EZ Anaerobe Container System Sachets (20 saquetas por caixa) GasPak EZ Anaerobe Container System Sachets with Indicator (20 saquetas por caixa) GasPak EZ Campy Container System Sachets (20 saquetas por caixa) GasPak EZ CO 2 Container System Sachets (20 saquetas por caixa) GasPak EZ Standard Incubation Container Rack (15 18 placas) GasPak EZ Large Incubation Container Rack (30 33 placas) BBL GasPak Tube Holder BBL GasPak Dry Anaerobic Indicator Strips (embal. de 100) BBL GasPak 100 System BBL GasPak 150 Large Anaerobic System BIBLIOGRAFIA 1. Brewer, J.H. and D.L. Allgeier Disposable hydrogen generator. Science 147: Brewer, J.H. and D.L. Allgeier Safe self-contained carbon dioxide-hydrogen anaerobic system. Appl. Microbiol. 16:

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5 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon County Clare, Ireland Tel: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BBL, BD, BD Logo, GasPak and Stacker are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.