INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO MEIOS EM PLACAS PRONTOS A USAR PA Rev.: April 2013

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1 PA INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO MEIOS EM PLACAS PRONTOS A USAR PA Rev.: April 2013 Glucose Agar Gentamicin and Penicillin and Streptomycin UTILIZAÇÃO PREVISTA O Glucose Agar é utilizado para o isolamento e cultura de fungos (leveduras, bolores e dermatófitas) provenientes de amostras clínicas. O, o Gentamicin and e o BD Sabouraud Penicillin and Streptomycin são meios selectivos para o isolamento de fungos provenientes de amostras clínicas. PRINCÍPIO E EXPLICAÇÃO DO PROCEDIMENTO Método microbiológico O Sabouraud Glucose Agar é um meio de uso geral inicialmente concebido para a cultura de dermatófitas. 1,2 Actualmente, é utilizado para o isolamento e cultura de todos os fungos. 3-5 As peptonas existentes no Sabouraud Glucose Agar são fontes de factores de crescimento de nitrogénio. A glucose proporciona uma fonte de energia para o desenvolvimento de microrganismos. A elevada concentração de glucose proporciona uma vantagem para o desenvolvimento dos fungos (estáveis por osmose) ao passo que a maioria das bactérias não tolera a elevada concentração de açúcar. Além disso, o baixo nível de ph é ideal para os fungos, mas não para muitas bactérias. 3 Sabouraud Glucose Agar é apenas ligeiramente selectivo contra as bactérias. O, o Gentamicin and e o Penicillin and Streptomycin são meios selectivos baseados no Sabouraud Glucose Agar. Foram acrescentados agentes selectivos para inibir as bactérias. O cloranfenicol é um antibiótico de largo espectro que inibe uma grande variedade de bactérias gram-negativas e gram-positivas mas poderá ter um efeito inibidor sobre vários fungos patogénicos. 4 Foi demonstrado que os agentes antimicrobianos, como a penicilina, a gentamicina e a estreptomicina ou uma combinação dos mesmos, são eficazes na inibição de bactérias sem afectar o desenvolvimento dos fungos. 2-5 Estes meios são utilizados para o isolamento de fungos provenientes de amostras clínicas ou material que se suspeite conter contaminantes bacterianos. O Sabouraud Glucose Agar é um dos meios utilizados nos Testes de limites microbianos da USP e EP. 6,12 REAGENTES Fórmulas: consultar a Tabela 1 PRECAUÇÕES. Apenas para uso profissional. Não utilizar as placas que apresentem sinais de contaminação microbiana, descoloração, secura, fissuras ou outros sinais de deterioração. Consultar as INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO para informação sobre os procedimentos de manuseamento asséptico, os riscos biológicos e os procedimentos de eliminação do produto usado. ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE Após recepção das placas, conservar no escuro a uma temperatura entre 2 e 8 C, dentro do invólucro original até ao momento da utilização. Evitar congelar e aquecer excessivamente. As

2 placas podem ser inoculadas até ao prazo de validade (ver a etiqueta da embalagem) e incubadas durante o tempo de incubação recomendado. As placas são fornecidas em pilhas de 10 placas e, quando uma destas pilhas é aberta, as respectivas placas terão de ser utilizadas no prazo máximo de uma semana, se forem conservadas em local limpo a uma temperatura entre 2 e 8 C. Tabela 1: REAGENTES Fórmulas* por Litro de Água Purificada Nome do Produto Glucose Agar Penicillin and Streptomycin Gentamicin and Agar with Ingredientes Hidrolisado 5,0 g 5,0 g 5,0 g 5,0 g pancreático de caseína Hidrolisado péptico 5,0 5,0 5,0 5,0 de tecido animal Glucose 40,0 40,0 40,0 40,0 Ágar 15,0 15,0 15,0 15,0 Penicilina G UI - - Estreptomicina - 0,06 g - - Gentamicina - - 0,04 - Cloranfenicol - - 0,4 0,4 ph ph 5,6 ± 0,2 5,6 ± 0,2 5,6 ± 0,2 5,6 ± 0,2 *Ajustada e/ou suplementada conforme necessário para cumprir os critérios do desempenho. CONTROLO DE QUALIDADE PELO UTILIZADOR Inocular amostras representativas com as seguintes estirpes (para mais detalhes, consultar as INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO). Consultar a nota de rodapé relativa a incubação. Nome do Produto Glucose Agar Penicillin and Gentamicin and Estirpes de teste Streptomycin **Candida albicans ATCC **Saccharomyces cerevisiae DSM 1333 ** Aspergillus brasiliensis ATCC16404 **Penicillium roquefortii ATCC 9295 ***Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 *Staphylococcus Sem inibição aureus ATCC Inibição completa *Escherichia coli Sem inibição ATCC Inibição completa Não inoculadas Âmbar claro Incubação: *48 h C / **</= 5 days, C, em condições aeróbias PA

3 PROCEDIMENTO Materiais fornecidos Glucose Agar,, Gentamicin and, ou Penicillin and Streptomycin, tudo fornecido em placas Stacker de 90 mm. Microbiologicamente controlados. Materiais não fornecidos Meios de cultura auxiliares, reagentes e equipamento laboratorial, conforme necessário. Tipos de amostra Os produtos descritos neste documento são meios de isolamento para fungos e podem ser usados (alternativamente ou como uma combinação destes meios) para todas as amostras clínicas (consultar também CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO). Os meios também são utilizados em muitas áreas da microbiologia industrial e na monitorização da higiene. Procedimento do teste Espalhar a amostra para cultura imediatamente após esta ser recebida no laboratório. A placa para cultura é usada principalmente para isolar culturas puras das amostras que contêm flora mista. Em alternativa, se o material estiver a ser cultivado directamente de uma zaragatoa, fazer rolar a zaragatoa sobre uma pequena área da superfície, na extremidade; em seguida, espalhar a partir desta área inoculada. Se a amostra for composta por raspas de pele, cabelo ou unhas, colocar o material no centro da superfície do meio. Se for possível, as partículas maiores devem ser ligeiramente prensadas sobra a superfície por meio de pinças estéreis de modo a fazer contacto com o meio. Para a detecção de dermatófitas, incluir também BD Dermatophyte Agar ou BD Mycosel Agar. Se o, o Gentamicin and e o Penicillin and Streptomycin forem utilizados, incluir também uma placa de Glucose Agar. Por último, também deve ser inoculado um meio não selectivo, como é o caso do BD Columbia 5% Sheep Blood, para fornecer uma indicação dos elementos patogénicos bacterianos presentes na amostra. Se for utilizado para a detecção de leveduras (por exemplo, Candida species) em amostras clínicas, incubar durante 48 horas a uma temperatura entre 30 e 35 C. Se houver suspeita de fungos filamentosos, incluindo dermatófitas, incubar durante um máximo de uma semana a uma temperatura de 25 a 30 C. As dermatófitas requerem, ocasionalmente, 3 semanas ou mais para produzir crescimento. Se for utilizado para monitorização da higiene, incubar durante um máximo de 7 dias a uma temperatura entre 20 e 25 C. Se a incubação durar mais de 3 dias, proporcionar condições adequadas de humidade. As placas podem ser seladas com fita adesiva plástica de modo a evitar que ocorra dessecação. Para mais detalhes sobre a temperatura de crescimento e a incubação, consultar a bibliografia. 5,7-10 Resultados Após uma incubação suficiente, as placas podem apresentar colónias isoladas nas áreas estriadas bem como crescimento confluente nas áreas de grande inoculação. Examinar as placas para verificar a existência de colónias fúngicas que apresentem morfologia e cor típicas. Para confirmar os resultados, devem realizar-se testes bioquímicos bem como procedimentos microscópicos e serológicos. 6-9 Uma vez que existe um grande número de fungos patogénicos, não se incluem aqui 2,3, 5-9 pormenores sobre o seu aspecto. Consultar a bibliografia. PA

4 CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO Os meios apresentados neste documento são meios padrão para o isolamento e cultura de fungos provenientes de todos os tipos de amostras clínicas e não clínicas Devido a uma grande variação nas temperaturas de desenvolvimento dos fungos, poderá ser necessário inocular várias placas do mesmo meio e incubá-las a temperatura diferentes. 5, 7-10 Consultar a secção Procedimento do Teste bem como a bibliografia apropriada. Uma vez que o Glucose Agar é apenas ligeiramente selectivo, as bactérias desenvolver-se-ão no meio, especialmente após um período de incubação alargado. No caso de se suspeitar de contaminação bacteriana das amostras, materiais ou áreas em investigação, tem de se utilizar meios com uma elevada selectividade como, por exemplo,, o Gentamicin and ou o Penicillin and Streptomycin para a cultura do espécime ou da amostra. Nocardia e Actinomyces são bactérias filamentosas (e não fungos!) pelo que não se desenvolvem em todos os meios Sabouraud que contêm inibidores bacterianos. BIBLIOGRAFIA 1. Sabouraud, R Contribution a l'etude de la trichophytie humaine. Etude clinique, microscopique et bacterioloqique sur la pluralité des trichophytons de l'homme. Ann. Dermatol. Syphil. 3: Haley, L.D., J. Trandel, and M.B. Coyle Cumitech 11, Practical methods for culture and identification of fungi in the clinical microbiology laboratory. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Ajello, L., L.K. Georg, W. Kaplan, and L. Kaufman CDC laboratory manual for medical mycology. PHS Publication No. 994, U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. MacFaddin, J.F Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria. vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 5. Sutton, D.A Specimen Collection, transport, and processing: mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc The U.S. Pharmacopeia 32/The national formulary U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md. USA 7. Larone, D.H Medically important fungi: a guide to identification. 4 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Summerbell, R.C Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton, and agents of superficial mycoses. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Kwon-Chung, K.J., and J.E. Bennett Medical mycology. Lea & Febiger, Philadelphia. 10. Pfaller, M.A., and R.A. Fromtling (section ed.) Mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Brun, S., et al Evaluation of five commercial Sabouraud gentamicin-chloramphenicol agar media. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 20: Council of Europe, European Pharmacopoeia, 6.1. European Pharmacopoeia Secretariat. Strasbourg/France. EMBALAGEM / APRESENTAÇÃO Glucose Agar Cat. No Cat. No Meios em placas prontos a usar, 120 placas Cat. No PA

5 Gentamicin and Cat. No Cat. No Meios em placas prontos a usar, 120 placas Penicillin and Streptomycin Cat. No INFORMAÇÕES ADICIONAIS Para obter informações adicionais, contacte o representante local da BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA