BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin

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1 PA INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO MEIOS EM PLACAS PRONTOS A USAR PA Rev.: Dec 2013 BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin UTILIZAÇÃO PREVISTA O BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin e o BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin são meios selectivos utilizados para o isolamento de Haemophilus influenzae proveniente de amostras clínicas. PRINCÍPIO E EXPLICAÇÃO DO PROCEDIMENTO Método microbiológico Embora as espécies de Haemophilus sejam uma parte normal da flora existente nas vias respiratórias superiores do homem, certos serótipos de H. influenzae, como o b e o f (e muito mais raramente, também o c), são uma causa importante de meningite, sépsis, epiglotite e muitas outras infecções graves. Até ser implementada a vacinação em muitos países, o H. influenzae constituía uma das três principais causas a nível mundial de meningite bacteriana. 1 Em meios normais com ágar de sangue de ovino, o H. influenzae e certas outras espécies de Haemophilus não podem desenvolver-se, uma vez que precisam de factores X (=heme) e V (=NAD). O BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin contém hemoglobina, que fornece heme, e BD IsoVitaleX, que fornece NAD (=dinucleótido de adenina nicotinamida) e outras vitaminas. Os nutrientes gerais são fornecidos pela base de GC II Chocolate Agar. No BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin, os nutrientes gerais são fornecidos pelo ágar de infusão de cérebro coração e o sangue de equídeo fornece heme (factor X) e NAD (factor V) para suportar o desenvolvimento de H. influenzae. O desenvolvimento deste organismo pode ser potenciado colocando tiras do factor V (por exemplo, tiras do factor V BD Taxo) no meio após a sua inoculação. Adiciona-se bacitracina a ambos os meios para inibir a maior parte da flora normal, ao passo que o H. influenzae é resistente a este agente antimicrobiano. 1-4 O BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin e o BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin são utilizados para o isolamento de Haemophilus influenzae proveniente de amostras clínicas contendo flora normal. REAGENTES Fórmulas* por Litro de Água Purificada BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin Hidrolisado pancreático de caseína 7,5 g Cérebro Coração, Infusão proveniente de sólidos 8,0 g Peptona de carne seleccionada 7,5 Hidrolisado péptico de tecido animal 5,0 Amido de milho 1,0 Hidrolisado pancreático de caseína 16,0 Fosfato dipotássio de hidrogénio 4,0 Cloreto de sódio 5,0 Fosfato diidrógeno de potássio 1,0 Glucose 2,0 Cloreto de sódio 5,0 Fosfato dissódico de hidrogénio 2,5 Ágar 14,0 Ágar 13,5 Bacitracina UI Bacitracina UI Hemoglobina 10,0 Sangue de equídeo, desfibrinado 50,0 ml IsoVitaleX 10,0 ml ph 7,4 ± 0,2 ph 7,2 ± 0,2 *Ajustada e/ou suplementada para cumprir os critérios do desempenho.

2 O enriquecimento com BD IsoVitalex, incluído no BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin, contém os seguintes factores de crescimento (fórmula* por litro de água purificada): Vitamina B 12 0,01 g L-Glutamina 10,0 Adenina 1,0 Cloridrato de guanina 0,03 Ácido p-aminobenzóico 0,013 Dinucleótido de adenina nicotinamida (NAD) 0,25 Pirofosfato de tiamina 0,1 Nitrato férrico 0,02 Cloridrato de tiamina 0,003 Cloridrato de cisteína 25,9 L-Cistina 1,1 Glucose 100,0 *Ajustada e/ou suplementada conforme necessário para cumprir os critérios do desempenho. PRECAUÇÕES. Apenas para uso profissional. Não utilizar as placas que apresentem sinais de contaminação microbiana, descoloração, secura, fissuras ou outros sinais de deterioração. Consultar as INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO para informação sobre os procedimentos de manuseamento asséptico, os riscos biológicos e os procedimentos de eliminação do produto usado. ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE Após recepção das placas, conservar no escuro a uma temperatura entre 2 e 8 C, dentro do invólucro original até ao momento da utilização. Evitar congelar e aquecer excessivamente. As placas podem ser inoculadas até ao prazo de validade (ver a etiqueta da embalagem) e incubadas durante o tempo de incubação recomendado. As placas são fornecidas em pilhas de 10 placas e, quando uma destas pilhas é aberta, as respectivas placas terão de ser utilizadas no prazo máximo de uma semana, se forem conservadas em local limpo a uma temperatura entre 2 e 8 C. CONTROLO DE QUALIDADE PELO UTILIZADOR Inocular amostras representativas com as seguintes estirpes (para mais detalhes, consultar as INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO). Incubar as placas durante 24 a 48 horas numa atmosfera aeróbia enriquecida com dióxido de carbono. Estirpes BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin Haemophilus influenzae ATCC Crescimento aceitável a bom; colónias pequenas transparentes a cinzentas Crescimento satisfatório; colónias pequenas transparentes; crescimento bom a excelente em torno das tiras de factor V colocadas no meio Staphylococcus aureus Inibição parcial a completa Inibição parcial a completa ATCC Streptococcus pneumoniae Inibição parcial a completa Inibição parcial a completa ATCC 6305 Streptococcus pyogenes Inibição parcial a completa Inibição parcial a completa ATCC Streptococcus mitis Inibição parcial a completa Inibição parcial a completa DSM Não inoculadas Castanho chocolate, opaco Vermelho (cor de sangue) PA

3 PROCEDIMENTO Materiais fornecidos BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin ou BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin, ambos fornecidos com placas Stacker de 90 mm. Microbiologicamente controlados. Materiais não fornecidos Meios de cultura auxiliares, reagentes e equipamento laboratorial conforme necessário; tiras de factor V BD Taxo (apenas para BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin). Tipos de amostra Estes meios destinam-se a ser utilizados para o isolamento de Haemophilus influenzae proveniente de amostras colhidas nas vias respiratórias, por exemplo zaragatoas da garganta ou outras amostras que contêm flora normal, por exemplo zaragatoas da conjuntiva (consultar também CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO). Colheita e transporte de amostras O Haemophilus influenzae é sensível a condições ambientais adversas. Tem de ser utilizado, por isso, um meio de transporte apropriado para todas as amostras. As amostras têm de ser enviadas para o laboratório o mais rapidamente possível e não podem ter mais de 24 horas, mesmo que se utilizem meios de transporte. A temperatura ideal de transporte é de 20 a 25 C. Não refrigerar! Procedimento do teste Espalhar a amostra para cultura imediatamente após esta ser recebida no laboratório. A placa para cultura é usada principalmente para isolar culturas puras das amostras que contêm flora mista. Em alternativa, se o material estiver a ser cultivado directamente de uma zaragatoa, fazer rolar a zaragatoa sobre uma pequena área da superfície, na extremidade; em seguida, espalhar a partir desta área inoculada. Uma tira de factor V tem de ser colocada em BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin após inoculação para um crescimento melhorado. Incubar as placas durante 24 a 48 horas num ambiente húmido. Embora o H. influenzae não dependa de uma elevada concentração de CO 2, a incubação num frasco de BD GasPak equipado com um envelope gerador de dióxido de carbono BD GasPak pode potenciar o desenvolvimento do organismo. Para o isolamento de todos os agentes presentes na amostra, também se deve inocular o BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) ou o BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). Resultados BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin: Após a incubação, inspeccionar as placas para verificar a existência de colónias transparentes a cinzentas com um diâmetro inferior a 2 mm após 48 horas de incubação. Outras espécies de Haemophilus que não o H. influenzae também podem desenvolver-se neste meio. BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin: Após a incubação, inspeccionar as placas para verificar a existência de pequenas colónias transparentes após 48 horas de incubação. O desenvolvimento do H. influenzae é potenciado em torno da tira de factor V. Outras espécies de Haemophilus podem desenvolver-se sem o suplemento de factor V. O H. influenzae é não hemolítico, o H. haemolyticus é geralmente beta-hemolítico. São necessários outros testes bioquímicos ou serológicos para uma identificação definitiva dos isolados provenientes destes meios. PA

4 CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO Estes meios são utilizados para o isolamento de Haemophilus influenzae proveniente de amostras clínicas colhidas de locais do corpo que contêm flora normal. Estes meios não podem ser utilizados para o isolamento primário de espécies de Haemophilus provenientes do líquido cerebrospinal ou de amostras provenientes de outros locais estéreis primários do corpo humano. Em vez disso, utilizar meios não selectivos como, por exemplo, BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) ou BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) para estas amostras. Embora o BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin e o BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin sejam meios selectivos, podem desenvolver-se outros organismos que não o Haemophilus influenzae. Estes meios inibem a maioria das espécies bacterianas da flora oral mas não são completamente inibitórios das espécies orais de Neisseria, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens e de certos estafilococos. É necessário realizar colorações Gram e outros testes bioquímicos e serológicos para confirmar o isolamento de H. influenzae ou de outras espécies de Haemophilus. Sabe-se que certas estirpes e espécies de Haemophilus, incluindo o H. influenzae var. aegyptius (=H. aegyptius) e o H. ducreyi são inibidas pela bacitracina, pelo que não se desenvolvem nestes meios. Para obter um isolamento completo de todos os agentes patogénicos envolvidos, tem de inocular-se com a amostra um meio não selectivo como o BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) ou o BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). Uma vez que as espécies de Haemophilus são uma parte normal da flora das vias respiratórias, a sua presença nas amostras provenientes das vias respiratório superiores como, por exemplo, as zaragatoas com colheitas da garganta e os escarros, não indica necessariamente que estes organismos são a causa da infecção. É necessário realizar testes serológicos para demonstrar que o isolado pertence a grupos serológicos frequentemente envolvidos nas infecções. 1,2 BIBLIOGRAFIA 1. Kilian, M Haemophilus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 2. Mannheim, W. et al.: Pasteurellaceae. In: Mikrobiologische Diagnostik (ed. F. Burkhardt). Thieme Verlag, Stuttgart Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28: Chapin, K., and G.V. Doern Selective media for recovery of Haemophilus influenzae from species contaminated with upper respiratory tract microbial flora. J. Clin. Microbiol. 17: EMBALAGEM / APRESENTAÇÃO BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin Cat. No Meios em placas prontos a usar, 20 cpu BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin Cat. No Meios em placas prontos a usar, 20 cpu INFORMAÇÕES ADICIONAIS Para obter informações adicionais, contacte o representante local da BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com PA

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