/08. Meios em tubos preparados BBL para crescimento de microorganismos

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1 /08 Meios em tubos preparados BBL para crescimento de microorganismos BHI with 0,1% Agar, 10 ml Trypticase Soy Broth with 0,15% Agar, 9 ml Consulte o glossário de símbolos no fim do folheto informativo UTILIZAÇÃO PRETENDIDA A Brain Heart Infusion (BHI) with 0,1% Agar (infusão Cérebro e Coração com agar a 0,1%) e Trypticase Soy Broth (TSB) with 0,15% Agar (caldo de soja com agar a 0,15%) são meios de uso geral utilizados no cultivo de microrganismos exigentes e não-exigentes, em especial bactérias anaeróbias. RESUMO E EXPLICAÇÃO A BHI consiste num meio de infusão utilizado para o cultivo de uma vasta variedade de microorganismos, incluindo bactérias, leveduras e bolores. 1 A BHI with 0,1% Agar (infusão Cérebro e Coração com agar a 0,1%) destina-se ao cultivo de anaeróbios devido à pressão de oxigénio reduzida do meio. O TSB consiste num meio de nutrição que suporta o crescimento de uma vasta variedade de microorganismos, incluindo fungos e bactérias comuns aeróbios, anaeróbios e facultativos. 1,2 A adição de agar reforça o cultivo de determinados microorganismos, em particular os anaeróbios do canal radicular e de outras amostras clínicas. 1 PRINCÍPIOS DO PROCEDIMENTO O caldo de BHI é o meio de cultura para nutrição tamponado que contém infusões do tecido do cérebro e do coração e peptonas para fornecer proteínas e outros nutrientes necessários para suportar o crescimento de microorganismos exigentes e não exigentes. O TSB contém agentes enzimáticos de digestão de caseína e soja triturada para fornecer substâncias nitrogenadas. A dextrose é a fonte de energia e o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico. Estes meios são suplementados com agar para facilitar o cultivo de organismos anaeróbios. O agar no meio retarda a absorção de oxigénio, reduzindo as correntes de convecção no meio. REAGENTES BHI with 0,1% Agar Fórmula Aproximada* por Litro de Água Purificada Hidrolisado pancreático de gelatina... 14,5 g Cérebro e Coração, Infusão de (sólidos)... 6,0 g Hidrolisado péptico de tecido animal... 6,0 g Dextrose... 3,0 g Cloreto de sódio... 5,0 g Fosfato dissódico... 2,5 g Agar... 1,0 g *Ajustada e/ou suplementada conforme necessário para cumprir os critérios do desempenho.

2 Trypticase Soy Broth with 0,15% Agar Fórmula Aproximada* por Litro de Água Purificada Hidrolisado pancreático de caseína... 17,0 g Hidrolisado papaínico de farinha de soja... 3,0 g Dextrose... 2,5 g Cloreto de sódio... 5,0 g Fosfato dissódico... 2,5 g Agar... 1,5 g *Ajustada e/ou suplementada conforme necessário para cumprir os critérios do desempenho. Advertências e Precauções Para diagnóstico in vitro Os tubos que têm as tampas fechadas devem ser abertos com cuidado para evitar lesões provocadas pela quebra do vidro. Cumprir as precauções estabelecidas contra riscos microbiológicos em todos os procedimentos. Após a utilização e antes de serem eliminados, esterilizar em autoclave os tubos preparados, os recipientes das amostras e outros materiais contaminados. Instruções de armazenamento: Após a recepção, armazenar os tubos no escuro a uma temperatura entre 2 e 25 C. Evitar congelar e aquecer excessivamente. Abrir apenas quando estiver pronto a utilizar. Minimizar a exposição à luz. Os meios que se encontram dentro de tubos que forem armazenados conforme indicado no rótulo, até pouco antes de serem utilizados, podem ser inoculados até ao fim do prazo de validade e incubados durante o período de incubação recomendado. Aguardar que o meio aqueça à temperatura ambiente antes de inocular. Deterioração do produto: Não utilizar os tubos que apresentem sinais de contaminação microbiana, descoloração, secura ou outros sinais de deterioração. COLHEITA E PREPARAÇÃO DE AMOSTRAS Os meios de BHI e TSB não são adequados para serem utilizados directamente com amostras clínicas ou outras fontes que contenham flora microbiana mista, excepto como meio de backup adicionado a meios de isolamento primário. Consultar os textos apropriados para obter mais informações. 3-5 PROCEDIMENTO Material fornecido: BHI with 0,1% Agar ou Trypticase Soy Broth with 0,15% Agar Materiais necessários mas não fornecidos: Meio de cultura auxiliar, reagentes, organismos de controlo da qualidade e equipamento de laboratório auxiliar conforme necessário para este procedimento. Procedimento do teste: Cumprir as técnicas assépticas. Os meios líquidos para uma incubação anaeróbia deverão ser reduzidos antes da inoculação, colocando os tubos, com as tampas soltas, em condições de anaerobiose durante 18 a 24 h. Uma forma eficaz e fácil de obter as condições adequadas de anaerobiose é através da utilização dos sistemas anaeróbios GasPak ou GasPak EZ. 6 Os organismos que se pretende cultivar deverão, em primeiro lugar, ser isolados numa cultura pura num meio apropriado em placas ou tubos inclinados. Utilizando uma ansa ou agulha de inoculação esterilizadas, transferir a cultura fresca da placa ou tubo inclinado para o meio dentro de um tubo para obter a concentração pretendida de organismos viáveis. As amostras conhecidas ou suspeitas de conterem anaeróbios obrigatórios deverão ser inoculadas junto da parte inferior do tubo.

3 Os meios que se encontram dentro de tubos que se destinem ao isolamento e cultivo de organismos anaeróbios deverão ser incubados em condições de anaerobiose durante no máximo 7 dias. Controlo de qualidade pelo utilizador: 1. Examinar os meios quanto a sinais de deterioração, conforme descrito em Deterioração do produto. 2. Verificar o desempenho inoculando uma amostra representativa dos tubos com culturas puras de organismos de controlo estáveis que produziram reacções conhecidas e apropriadas. Recomendam-se as seguintes estirpes de teste: ESTIRPE DE TESTE Bacteroides fragilis ATCC Streptococcus pyogenes ATCC RESULTADO ESPERADO Crescimento Crescimento Os requisitos do controlo de qualidade devem ser efectuados de acordo com os regulamentos ou requisitos de acreditação locais e/ou nacionais aplicáveis e com os procedimentos padrão de controlo de qualidade do laboratório. É recomendado que o utilizador consulte as normas NCCLS e CLIA relativamente às práticas de controlo de qualidade apropriadas. RESULTADOS O crescimento em tubos é indicado pela presença de turvação em comparação com um controlo não inoculado. Se se observar o crescimento, as culturas deverão ser examinadas por coloração Gram e deverão ser novamente submetidas a cultivo nos meios apropriados, tais como placas de Agar de sangue e/ou Agar de chocolate II, placas de Agar EMB A ou Agar de MacConkey II, etc. Se se suspeitar da presença de organismos anaeróbios, as repicagens deverão ser incubadas em condições de anaerobiose, à semelhança do que acontece num sistema anaeróbio GasPak ou GasPak EZ. LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO A presença de agar nestes meios produz uma ligeira turvação que poderá ser confundida com crescimento. Deverá examinar-se um esfregaço com a coloração Gram e deverá ser preparada uma repicagem para determinar a presença de crescimento microbiano. Para ser identificado, o organismo tem que estar numa cultura pura. Poderão ser realizados testes bioquímicos e outros testes de identificação para se obter uma identificação completa. Consultar os textos apropriados para mais informações. 3,7-9 CARACTERÍSTICAS DO DESEMPENHO BHI with 0,1% Agar Antes da entrega, todos os lotes de Brain Heart Infusion with 0,1% Agar (infusão Cérebro e Coração com agar a 0,1%) são testados quanto às suas características de desempenho. As amostras representativas do lote são testadas com suspensões de células de Bacteroides fragilis ATCC e Streptococcus pyogenes ATCC 19615, diluídas em soro fisiológico normal para produzir 1 x 10 3 a 1 x 10 4 CFUs. Os tubos são incubados com as tampas soltas em condições de anaerobiose a uma temperatura entre 35 e 37 C durante 7 dias num frasco BBL GasPak. Observou-se um crescimento razoável a elevado com ambos os organismos. APRESENTAÇÃO N. Cat. Descrição BBL BHI Agar with 0,1% Agar, 10 ml, Caixa de 100 tubos tamanho D BBL Trypticase Soy Broth with 0,15% Agar, 9 ml, Caixa de 100 tubos tamanho K

4 BIBLIOGRAFIA 1. MacFaddin, J.F Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria, vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 2. Fredette, V., A. Auger, and A. Forget Anaerobic flora of chronic nasal sinusitis in adults. Can. Med. Assoc. J. 84: Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld Bailey & Scott's diagnostic microbiology, 10th ed. Mosby, Inc., St. Louis. 4. Miller, J.M., and H.T. Holmes Specimen collection, transport, and storage, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5. Isenberg, H.D., F.D. Schoenknecht, and A. von Graevenitz Cumitech 9, Collection and processing of bacteriological specimens. Coordinating ed., S.J. Rubin. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. Seip, W.F., and G.L. Evans Atmospheric analysis and redox potentials of culture media in the GasPak system. J. Clin. Microbiol. 11: Murray, P.R., E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Engelkirk, P.G., J. Duben-Engelkirk, and V.R. Dowell, Jr Principles and practice of clinical anaerobic bacteriology. Star Publishing Co., Belmont, Calif. 9. Summanen, P., E.J. Baron, D.M. Citron, C.A. Strong, H.M. Wexler, and S.M. Finegold Wadsworth anaerobic bacteriology manual, 5th ed. Star Publishing Co., Belmont, Calif. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BBL, GasPak and Trypticase are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD

5 _ÉÅíçåI=aáÅâáåëçå=~åÇ=`çãé~åó T=içîÉíçå=`áêÅäÉ pé~êâëi=j~êóä~åç=onnro=rp^ UMMJSPUJUSSP _bkbu=iáãáíéç _~ó=h=n~lçi=pü~ååçå=fåçìëíêá~ä=bëí~íé pü~ååçåi=`çìåíó=`ä~êéi=fêéä~åç qéäw=prpjsnjqtjovjom c~ñw=prpjsnjqtjorjqs