DISCOS PARA ANTIBIOGRAMA CARTUCHO DE 50 DISCOS Estudo de sensibilidade a agentes antimicrobianos.

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1 DISCOS PARA ANTIBIOGRAMA CARTUCHO DE 50 DISCOS Estudo de sensibilidade a agentes antimicrobianos. 2014/06 1- INTERESSE CLÍNICO A utilização destes consiste em avaliar in vitro, de forma semi-quantitativa, a sensibilidade aos agentes antimicrobianos de bactérias de crescimento rápido e de algumas espécies difíceis, por método de difusão em meio de gelose. Este método segue um procedimento estandardizado, publicado pela WHO (1) e adoptado como norma consensual pelo CLSI (2, 3) CA-SFM (4) e o EUCAST (5) (submetido a actualizações periódicas). Para recomendações relativas à realização do antibiograma e sua interpretação é favor consultar os documentos do CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) mais recentes. 2- PRINCÍPIO Os de papel, impregnados com uma concentração determinada de agente antimicrobiano, são depositados à superfície de um meio adequado (A) previamente inoculado com um inócuo calibrado (A) de uma cultura pura da bactéria a testar. Após incubação (A), as placas de Pétri são examinadas e as zonas de inibição que rodeiam os são medidas e comparadas com os valores críticos (A) dos diferentes agentes antimicrobianos testados, a fim de se determinar a classificação clínica (resistente, intermédio, sensível). O diâmetro da zona de inibição é proporcional à sensibilidade da bactéria testada. (A) segundo as recomendações em vigor CLSI (2, 3) CA-SFM (4) EUCAST (5). 3- APRESENTAÇÃO Os dispositivos em causa são de 6,5 mm fabricados a partir de papel absorvente de qualidade superior, impregnados de agentes antimicrobianos a concentrações específicas. Os estão claramente identificados por meio de uma sigla de 1 a 3 letras, impressa de cada lado do disco (quadro 1). Os Bio-Rad apresentam-se em cartucho de 50, acondicionados em embalagens seladas contendo um excicante. Quadro 1 : Discos para antibiograma CONTEÚDO DO Nº REF. DO SÍMBOLO EMBALAGEM DISCO PRODUTO Amikacin AKN Amoxicillin 25 µg AMX Amoxicillin + Clavulanic Acid 2/1 µg 20/10 µg AUG3 AMC Ampicillin 2 µg 10 µg API2 AMP Ampicillin + Sulbactam 10/10 µg SAM Azithromycin 15 µg AZM Aztreonam ATM Bacitracin 10 IU (1) BCT Carbenicillin 100 µg CRB Cefaclor CEC Cefalexin CXN Cefamandole FAM

2 CONTEÚDO DO Nº REF. DO SÍMBOLO EMBALAGEM DISCO PRODUTO Cefazolin CZN Cefepime FEP Cefixime 5 µg 10 µg FIX5 CFM Cefoperazone 75 µg CFP75 CPZ Cefoperazone + Sulbactam 75/ SCF Cefotaxime 5 µg COX5 CTX Cefotetan CTT Cefoxitin FOX Cefpirome CPO Cefpodoxime 10 µg CPD Cefprozil CPR Cefsulodin CFS Ceftaroline 5 µg CPN Ceftazidime 10 µg CZD10 CAZ Ceftibuten CTB Ceftriaxone CRO Cefuroxime CXM Cephalothin CEF Chloramphenicol CHL Ciprofloxacin 5 µg CIP Clarithromycin 15 µg CLR Clindamycin 2 µg CMN Colistin 10 µg 50 µg COL10 CST Doripenem 10 µg DOR Doxycycline DOX Ertapenem 10 µg ETP Erythromycine 15 µg ERY Flumequine UBN Fosfomycin 50 µg 200 µg FSF50 FOS Fusidic Acid 10 µg FAD Gentamicin 10 µg 10 IU (15 µg) GMN10 GMI15 GME Gentamicin (high load) 120 µg 500 µg HLG120 GEN Imipenem 10 µg IPM Isepamicin ISP Kanamycin KMN Kanamycin (high load) 1 mg KAN Levofloxacin 5 µg LVX Lincomycin 15 µg LCN Linezolid 10 µg LIN Linezolid LZD Mecillinam 10 µg MEC Meropenem 10 µg MEM Metronidazole 4 µg MTR Mezlocillin 75 µg MZN Minocycline MNO Moxalactam MOX Moxifloxacin 5 µg MXF Mupirocin 5 µg MUP µg PUM Nalidixic Acid NAL Neomycin 30 IU NEO Netilmicin 10 µg NTM10 NET Nitrofurantoin 100 µg NFE Nitrofurantoin 300 µg FTN Nitroxolin 20 µg NIT Norfloxacin 10 µg NXN

3 CONTEÚDO DO Nº REF. DO SÍMBOLO EMBALAGEM DISCO PRODUTO 5 µg NOR Ofloxacin 5 µg OFX Oleandomycin 15 µg OLE Oxacillin 1 µg 5 µg OXC1 OXA Oxolinic Acid 10 µg OAD Pefloxacin 5 µg PEF Penicillin 1 IU 6 µg (10 IU) PNG1 PEN Pipemidic Acid 20 µg PIM Piperacillin 75 µg 100 µg PIL30 PIP75 PIR Piperacillin + Tazobactam 30/6 µg 75/10 µg 100/10 µg PTZ36 PPT85 TZP Polymixin 300 IU (50 µg) PXB Pristinamycin 15 µg PTN Quinupristin-Dalfopristin 15 µg QDF Rifampicin 5 µg RIF5 RAM Sparfloxacin 5 µg SPX Spectinomycin 100 µg SPT Spiramycin 100 µg SPN Streptomycin 10 µg SMN Streptomycin (high load) 300 µg 500 µg HLS300 STR Sulphonamides 300 µg 200 µg SSS300 SUL Teicoplanin TEC Telithromycin 15 µg TEL Temocillin TEM Tetracycline TET Ticarcillin 75 µg TIC Ticarcillin + Clavulanic Acid 75/10 µg TCC Tigecycline 15 µg TGC Tobramycin 10 µg TMN10 TOB Trimethoprim + Sulfamethoxazole 1.25/23.75 µg SXT Trimethoprim 5 µg TMP Vancomycin 5 µg VNC5 VAN CONSERVAÇÃO A indicação do prazo de validade aplica-se unicamente aos contidos em cartuchos intactos, conservados em conformidade com as instruções do fabricante. O prazo de validade e o número de lote estão indicados em cada um dos recipientes (cartucho e embalagem exterior). Os cartuchos de devem ser conservados na respectiva embalagem, a uma temperatura entre + 2 e + 8 C, em local seco. Aguardar até que as embalagens atinjam a temperatura ambiente (18-30 C) antes de os abrir; os cartuchos não utilizados deverão ser guardados de novo à temperatura de + 2 e + 8 C, uma vez terminada a colocação dos. Não utilizar os após o termo do prazo de validade. Não utilizar qualquer cartucho mantido à temperatura ambiente (18-30 C) por mais de 8 horas, sem controlar previamente o respectivo nível de desempenho aceitável (6). Se os cartuchos forem conservados no distribuidor após colocação, este deve ser conservado a C, a seco com excicantes no interior. A estabilidade dos depois dos kits abertos e colocados no distribuidor (preservados de acordo com as recomendações e com excicantes) foi validada em condições de rotina durante 6 semanas, excepto para os de antibiótico assinalados pela sigla, para os quais a estabilidade está indicada em semanas no interior desta sigla. 5- MATERIAL NECESSÁRIO MAS NÃO FORNECIDO Distribuidor de : 6-7 ref. nº ref. nº meio de cultura (segundo as recomendações em vigor (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ) 3

4 reagentes estirpes bacterianas para controlo da qualidade controlo de opacidade equivalente à norma Mac Farland 0.5 material de laboratório necessário para realização de antibiogramas pelo método de difusão em meio de gelose. 6- PRECAUÇÕES DE UTILIZAÇÃO Seguir as instruções de utilização das recomendações em vigor (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ) Observar permanentemente as técnicas e precauções em vigor em matéria de protecção contra riscos microbiológicos. Após utilização, esterilizar as culturas e todo o material contaminado. 7- MODO DE FUNCIONAMENTO Amostras: os não devem ser utilizados para teste directo em amostras biológicas. Consultar as recomendações em vigor (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ) que especificam a forma de preparação do inoculado a partir de uma cultura pura e recente. Consultar as instruções recomendadas pelo CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) para todas as etapas conducentes à realização do antibiograma e à obtenção de resultados: um método padrão é proposto pelo CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) para a preparação do inócuo, a inoculação das caixas de Pétri, a escolha e disposição dos a testar, a temperatura e o período de incubação. Recomenda-se igualmente o cumprimento das boas práticas de laboratório. 8- INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS Medir com precisão os diâmetros das zonas de inibição observadas e tomar como referência os diâmetros críticos fornecidos pelas entidades reguladoras em vigor (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ) Para um determinado microorganismo é fornecida uma classificação clínica (resistência intermédia, sensível ou não sensível) em função do diâmetro observado e dos diâmetros críticos do antibiótico testado. Estes critérios de classificação clínica segundo os diâmetros críticos são actualizados periodicamente pelo (CLSI (2,3), CA- SFM (4), EUCAST (5) ) 9- DESEMPENHOS/CONTROLO DA QUALIDADE Os desempenhos dos antibióticos são controlados de forma sistemática por meio das estirpes seguintes: - Escherichia coli ATCC Staphylococcus aureus ATCC Pseudomonas aeruginosa ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC Neisseria gonorrhoeae ATCC Haemophilus influenzae ATCC Enterococcus faecalis ATCC Clostridium perfringens ATCC Enterococcus faecalis ATCC Clostridium sporogenes ATCC O quadro 2 apresenta, em resumo, os limites aceitáveis dos diâmetros de inibição obtidos por difusão em meio de gelose, para as estirpes de referência a seguir citadas: Norma Limites aceitáveis dos diâmetros de inibição (mm) E. coli ATCC S. aureus ATCC P. aeruginosa ATCC S. pneumoniae ATCC Amikacin CLSI Amoxicillin 25 µg Interna Amoxicillin + Clavulanic Acid 20/10 µg CLSI Ampicillin 10 µg CLSI Ampicillin + Sulbactam 10/10 µg CLSI Azithromycin 15 µg CLSI Aztreonam CLSI Bacitracin 10 UI Interna Carbenicilin 100 µg CLSI Cefaclor CLSI Cefalexin Interna Cefamandole CLSI Cefazolin CLSI Cefepime CLSI Cefixime 10 µg Interna Cefixime 5 µg CLSI Cefoperazone Interna Cefoperazone 75 µg CLSI Cefoperazone + 75/ Interna H. influenzae ATCC

5 Sulbactam Norma E. coli ATCC Limites aceitáveis dos diâmetros de inibição (mm) S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae ATCC ATCC ATCC Cefotaxime CLSI Cefotetan CLSI Cefoxitin CLSI Cefpirome Interna Cefpodoxime 10 µg CLSI Cefprozil CLSI Cefsulodin Interna Ceftazidime CLSI Ceftibuten CLSI Ceftriaxone CLSI Cefuroxime CLSI Cephalothin CLSI Chloramphenicol CLSI Ciprofloxacin 5 µg CLSI Clarithromycin 15 µg CLSI Clindamycin 2 µg CLSI Colistin 10 µg CLSI Colistin 50 µg CA-SFM Doxycycline CLSI Ertapenem 10 µg CLSI Erythromycine 15 µg CLSI Flumequine Interna Fosfomycin 50 µg CA-SFM Fosfomycin 200 µg CLSI Fusidic acid 10 µg CA-SFM Gentamicin 10 µg CLSI Gentamicin 10 UI CA-SFM Imipenem 10 µg CLSI Isepamicin Interna Kanamycin CLSI Levofloxacin 5 µg CLSI Lincomycin 15 µg CA-SFM Linezolid CLSI Mecillinam 10 µg CLSI Meropenem 10 µg CLSI Mezlocillin 75 µg CLSI Minocycline CLSI Moxalactam CLSI Moxifloxacin 5 µg CLSI Mupirocin 5 µg Interna Mupirocin 200 µg CLSI Nalidixic Acid CLSI Neomycin 30 UI Interna Netilmicin CLSI Nitrofurantoin 300 µg CLSI Nitroxolin 20 µg Interna Norfloxacin 5 µg Interna Norfloxacin 10 µg CLSI Ofloxacin 5 µg Interna Oleandomycin 15 µg Interna Oxacillin 5 µg CA-SFM Oxacillin 1 µg CLSI Oxolinic Acid 10 µg Interna Pefloxacin 5 µg CA-SFM H. influenzae ATCC

6 Limites aceitáveis dos diâmetros de inibição (mm) Norma E. coli S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae H. influenzae ATCC ATCC ATCC ATCC ATCC Penicillin 6 µg CLSI Pipemidic Acid 20 µg Interna Piperacillin 100 µg CLSI Piperacillin 75 µg Interna Piperacillin + Tazobactam 75/10 µg Interna Piperacillin + Tazobactam 100/10 µg CLSI Polymixin 300 UI CLSI Pristinamycin 15 µg CA-SFM Quinupristin-Dalfopristin 15 µg CLSI Rifampicin 5 µg CLSI Rifampicin CA-SFM Sparfloxacin 5 µg CLSI Spectinomycin 100 µg Interna Spiramycin 100 µg Interna Streptomycin 10 µg CLSI Sulfonamides 300 µg CLSI Sulfonamides 200 µg Interna Teicoplanin CLSI Telithromycin 15 µg CLSI Temocillin Interna Tetracycline CLSI Ticarcillin 75 µg CLSI Ticarcillin + Clavulanic Acid 75/10 µg CLSI Tigecycline 15 µg CLSI Tobramycin 10 µg CLSI Trimethoprim 5 µg CLSI Trimethoprim + 1,25/23,75 Sulfamethoxazole µg CLSI Vancomycin CLSI Para o controlo de qualidade (normas Internas, CLSI) : Gentamicin 120 µg : E. faecalis ATCC (16-23 mm) Streptomycin 300 µg : E. faecalis ATCC (14-20 mm) Gentamicin 500 µg : S. aureus ATCC (30-34 mm) ; E. faecalis ATCC (18-28 mm) Kanamycin 1 mg : S. aureus ATCC ( 14 mm) ; E. faecalis ATCC (> 14 mm). Streptomycin 500 µg : S. aureus ATCC (24-28 mm) ; E. faecalis ATCC (14-25 mm). Metronidazole 4µg : Clostridium perfringens ATCC 13124, Clostridium sporogenes ATCC mm Cefoperazone + Sulbactam 75 / : E. coli ATCC (24-30 mm) Mupirocin 200 µg : S. aureus ATCC BAA-1708 (6 mm) Temocillin : E. coli ATCC (22-28 mm) Haemophilus influenzae ATCC é recomendado como estirpe de controlo de qualidade adicional, útil para verificar as propriedades nutricionais do meio HTM. Apesar da falta de critérios interpretativos fiáveis para a S. pneumoniae com certas ß-lactaminas, Streptococcus pneumoniae ATCC é a estirpe designada para o controlo de qualidade de todos os testes do antibiograma para Streptococcus spp. Neisseria gonorrhoeae ATCC é recomendado para testar os de espectinomicina com um diâmetro aceitável de 23 a 29 mm (CLSI/NCCLS). A deterioração da concentração dos de 1 µg oxacilina é melhor estabelecida com Staphylococcus aureus ATCC com um diâmetro de 18 a 24 mm. Seguindo as orientações ( guidelines) da EUCAST ( versão V3.1, 2013 ), as características dos de antibióticos são sistematicamente controlados usando as seguintes estirpes : - Escherichia coli ATCC Staphylococcus aureus ATCC Pseudomonas aeruginosa ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC Enterococcus faecalis ATCC Haemophilus influenzae NCTC

7 O quadro 3 apresenta, em resumo, os limites aceitáveis dos diâmetros de inibição obtidos por difusão em meio de gelose, para as estirpes de referência a seguir citadas: E. coli ATCC S. aureus ATCC Limites aceitáveis dos diâmetros de inibição (mm) P. aeruginosa ATCC S. pneumoniae ATCC H. influenzae NCTC 8468 E. faecalis ATCC Amoxicillin + Clavulanic Acid 2/1 µg Ampicillin 2 µg Cefotaxime 5 µg Ceftaroline 5 µg Ceftazidime 10 µg Doripenem 10 µg Gentamicin Linezolid 10 µg Netilmicin 10 µg Nitrofurantoin 100 µg Penicillin 1 IU Piperacillin Piperacillin + Tazobactam 30/6 µg Tobramycin Vancomycin 5 µg CONTROLO DE QUALIDADE DO FABRICANTE Todos os produtos fabricados e comercializados pela empresa Bio-Rad são submetidos a um sistema de garantia da qualidade, desde a recepção das matérias primas até à comercialização do produto final. Cada lote de produto final é objecto de um controlo da qualidade, sendo comercializado apenas quando em total conformidade com os critérios de aceitação. A documentação relativa à produção e controlo de cada lote é arquivada pelo fabricante. 11- LIMITES DE UTILIZAÇÃO As classificações clínicas (resistente, intermédio, sensível e não sensível) podem variar apenas de um milímetro, o que corresponde a uma margem de erro comum em laboratório. Outros agentes anti-microbianos para além dos citados no quadro 2 poderão ser igualmente utilizados. Os testes de sensibilidade a estes agentes devem ser interpretados com base na presença ou ausência de uma zona de inibição nítida e devem ser considerados unicamente como qualitativos, esperando que as zonas de interpretação tenham sido estabelecidas. Todos os diâmetros das zonas devem ser recolhidos. A interpretação final, tal como acontece com qualquer interpretação biológica, não pode ser definida a partir do resultado de um único teste, mas antes de um conjunto de dados clínicos e de resultados bioquímicos, citológicos e imunológicos. Os desempenhos do teste dependem não só da actividade dos, como também de alguns factores tais como a utilização de um inócuo, de estirpes de controlo apropriadas, de meios de cultura adaptados, previamente testados, e de uma temperatura de armazenamento adequada. 12- REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. World Heath Organization Expert Committee on Biological Standardization Technical report series 822. W.H.O., Geneva. 2. CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute Approved standard M2-A11. Performance standards for antimicrobial susceptibility tests, 10th ed. CLSI, Wayne, Pa. 3. CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI document M100-S23. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing, 21th informational supplement, Wayne, Pa. 4. CA-SFM: Comité de l antibiogramme French Society of Microbiology. 5. EUCAST: European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. EUCAST QC Tables V V. Loncle-Provot, E. Keller, M.O. Gourdin, M.L. Garrigues. Etude de la stabilité des Discos antibiotiques dans les conditions d'utilisation en routine, 18th inter disciplinary meeting on anti-infectious chemotherapy, Paris, Dec.3/ Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) Fax : +33 (0) /06 7