Spermov SPERMOVA (11) 1(1): 14-25 ESTRATEGIAS DEL USO EFICIENTE DE SEMEN SEXADO EN BOVINOS P.S. Bruselli, M.F. Sá Filho, J.N.S. Sles, G.A. Crepldi, A.H. Souz, C.M. Mrtins, R. V. Sl, K.A.L. Neves Deprtmento de Reprodução Animl, FMVZ-USP, CEP 558-, São Pulo, SP, Brsil. E-mil: brusell@usp.br ou mnoels@usp.br Durnte nos, os pesquisdores vêm buscndo mnipulr o sexo d prole ntes d concepção (Grner e Seidel, 8). Ess determinção do sexo em bovinocultur de corte e de leite pode ser um dos ftores determinntes pr melhorr o desempenho produtivo e econômico d tividde. Por exemplo, em fzends produtors de leite, o bezerro mcho tem pouco ou nenhum vlor zootécnico. Porém, em fzends de corte comerciis, o bezerro mcho é o sexo de interesse devido mior potencil de produção. Levndo em considerção esss prticulriddes, muits pesquiss vêem sendo desenvolvids com o objetivo de se predizer e/ou mnipulr proporção do sexo dos bezerros. Um biotecnologi já disponível em escl comercil é utilizção do sêmen sexdo. A seprção dos espermtozóides Y dos espermtozóides X é possível devido às diferençs no conteúdo do DNA desss céluls espermátics (espermtozóide X possui cerc de 4% mis mteril genético que espermtozóide Y), sendo relizd por citômetri de fluxo. Ess biotécnic ssoci emissão de rios lser, colorção diferencil dos espermtozóides viáveis e não viáveis e s forçs hidrodinâmics que direcionm o espermtozóide no momento d leitur durnte o processo de seprção dos espermtozóides X e Y. Além disso, existem diferençs entre s rçs de bovinos qunto quntidde DNA presente no cromossomo Y. (Figur 1, Grner, 6). Esss diferençs devem ser levds em considerção qundo do emprego dess tecnologi. Recentes vnços n form d ponteir do citômetro de fluxo, no posicionmento ds céluls espermátics no momento d pssgem pelo lser, ssim como modificções n pressão e no tipo de colorção ds céluls, melhorrm significtivmente o processo de seprção dos gmets X e Y (Revisdo em Grner, 6). 4.5 Diferenç n quntidde de DNA de espermtozóides X-Y (%) 4. 3.5 3. Jersey Angus Hereford Holstein Brhmn Rç dptdo de: Grner et l., 6 Figur 1. Diferenç n quntidde de mteril genético (DNA) entre o cromossomo X e Y conforme rç de bovinos A velocidde de seprção dos espermtozóides X e Y é reltivmente lent proximdmente 3.. céluls por minuto. Dest form, pr mior eficiênci do processo, dose de sêmen normlmente utilizd é de proximdmente de 2x1 6 sptz/plhet. Existem reltos n litertur que relcionm certos comprometimentos n fertilidde com o menor número de espermtozóides por dose nos grupos insemindos com sêmen sexdo (1,5-2.x1 6 sptz/dose) em comprção com quntidde de espermtozóides utilizdo com sêmen convencionl (~1x1 6 sptz/dose). Porém, trblhos recentes indicm mesm tx de concepção qundo insemindos com sêmen sexdo ou convencionl (Borchersen e Pecock, 9). Apesr dos resultdos presentdos d litertur com vcs serem inconsistentes, miori ds pesquiss relizds com novilhs indic que tx de concepção pós observção de cio e IA com sêmen sexdo é de cerc de 7 9% d tx tingid pós o uso de sêmen convencionl (revisdo em: Seidel et l., 1999), dependendo ds condições de mnejo ds fzends. Seidel et l. (1999) reltrm, em um combinção de vários experimentos, que s txs de concepção de novilhs holndess inseminds com sêmen sexdo vrirm de % 68% e com sêmen convencionl de 67% 82%. Porém, Seidel e Schenk
P.S. Bruselli et l. // SPERMOVA (11) 1(1): 14-25 (8) observrm pesr d tx de prenhez ser menor no sêmen sexdo, vrição dess tx foi mior no sêmen convencionl (43 62%) do que no sêmen sexdo (31 42%). Assim, ess revisão tem como objetivo presentr informções de pesquiss que vlirm utilizção de sêmen sexdo em fêmes Bos turus e Bos indicus inseminds pós detecção de cio ou tempo fixo (sem detecção de cio) ou pós trtmentos superovultórios. IA com sêmen sexdo pós detecção de cio Atulmente, tx de concepção pós o uso de sêmen sexdo determin cerc 8% d tx de concepção em inseminções com sêmen convencionl (DeJrnette et l., 8), sendo encontrdo em outro estudo, 7% em novilhs e 83% em vcs (Normn et l., 1). Apesr dos menores índices de prenhez, utilizção do sêmen sexdo foi efetiv em umentr quntidde de bezerrs fêmes nscids (sexdo = 9%; convencionl = 49%). Além disso, o uso de sêmen sexdo tem reduzido o número de prtos distócitos e ntimortos tnto em vcs qunto em novilhs, principlmente ness ultim ctegori devido mior incidênci de nscimentos de fêmes (Normn et l., 1). A reduzid quntidde de espermtozóides por dose de sêmen sexdo poderi ser outro ftor envolvido com redução nos índices de fertilidde. Um primeiro estudo, Bodmer et l., (5), utilizndo mesm concentrção de espermtozóides por inseminção em vcs em lctção, obteve txs de concepção semelhntes entre s fêmes inseminds com sêmen sexdo (27.6%, n=15) ou convencionl (28.1%, n=64). Seguindo est linh de pesquis, nosso grupo (Sá Filho et l., 1) vliou utilizção de dupl inseminção em novilhs Jersey recebendo o primeiro, segundo ou terceiro serviço. As novilhs (n=576) form distribuíds em três trtmentos (1Dose12h, 2Dose12h ou 2Dose12/24h). Nos grupos 1Dose12h (n=193) ou 2Dose12h (n=193) s novilhs form inseminds com um ou dus plhets contendo 2.1 milhões de espermtozóides 12 hors pós detecção de cio, respectivmente. O grupo 2Dose12/24h (n=19) s novilhs receberm dus doses com 12 hors de intervlo entre s inseminções (primeir 12 hors e segund 24 hors pós detecção do cio). Não form observds diferençs entre os grupos n tx de concepção [1Dose12h= 45.1% (87/193); 2Dose12h= 44.% (85/193); 2Dose12/24h= 49.5% (94/19); P=.51]. Entretnto, verificou-se efeito significtivo do número de serviços (P=.4) n tx de concepção [Primeiro= 55.3% (115/8); Segundo= 46.1% (94/4); Terceiro= 34.8% b (57/165); P=.4]. Resultdos semelhntes form observdos por DeJrnette et l. (9), em que s txs de prenhez reduzirm em novilhs com o umento do número de serviços (47% pr o primeiro, 39 % pr o segundo e 32% pr o terceiro serviço). Portnto, em novilhs Jersey, o umento d quntidde de espermtozóides por inseminção pós observção de cio de 2,1 pr 4,2 milhões e relizção d IA em dois momentos com intervlo de 12 hors não lterm tx de concepção. Outr possibilidde pr tentr umentr tx de concepção de novilhs inseminds com sêmen sexdo seri utilizção de GnRH no di d inseminção rtificil. Em estudo recente, Sá Filho et l. (1) observrm que o trtmento com GnRH no di d inseminção rtificil com sincronizção prévi com dus prostglndins não melhor tx de concepção em novilhs Jersey inseminds com sêmen sexdo [GnRH= 47.2% (1/212) vs. Não GnRH= 51.7 % (14/1); P=.38]. Outro possível ftor que poderi influencir tx de prenhez utilizndo sêmen sexdo seri o locl de deposição no útero. Em novilhs de leite, Kurykin et l. (7) comprrm tx de prenhez em diferentes locis de deposição do sêmen sexdo no trto uterino Nesse experimento, s novilhs form inseminds 8-82h pós segund dose de PGF2α (primeir dose de PGF2α 14 dis ntes d segund dose) com sêmen sexdo (2.2 x 1 6 sptz/plhet). O ldo d ovulção foi determindo por exme ultrssonográfico. As txs de prenhez form similres entre os diferentes locis de deposição do sêmen sexdo no trto uterino de novilhs de leite. Uso d rdiotelemetri (Het Wtch) pr detecção do cio em progrms de IA com sêmen sexdo Em estudo recente, Sá Filho et l. (1) vlirm utilizção do sêmen sexdo em novilhs Jersey inseminds em diferentes momentos em relção o início do cio identificdo por rdiotelemetri (Het Wtch ). Nesse estudo 638 novilhs Jersey form inseminds em diferentes momentos pós o início do cio (12 16h; 16 h; 24h e 24 3h). A tx de concepção foi mior (P=,3) ns novilhs inseminds entre 16 e 24 hors em relção às inseminds entre 12 e 16 hors. Vlores intermediários form obtidos em inseminções relizds entre 24 e 3 hors pós o início do cio (Figur 2). SPERMOVA (11), Vol. 1, N 1 ISSN : 2223-9375 15
P.S. Bruselli et l. // SPERMOVA (11) 1(1): 14-25 53,5 51,8 5 164 234 45,5 3 37,7 16 b 134 b 1 12 16 16 24 24 3 Intervlo cio/inseminção (hors) Figur 2. Tx de concepção de novilhs Jersey de cordo com o intervlo entre início do cio e inseminção utilizndo sêmen sexdo ( b; P <,5). Em outro estudo recente relizdo, Sles et l. (1) vlirm utilizção do sêmen sexdo ou convencionl de três diferentes touros em novilhs Jersey inseminds pós o início do cio identificdo por rdiotelemetri (Het Wtch ). Verificouse que o sêmen convencionl [64,2% (238/371)] presentou mior tx de concepção do que o sêmen sexdo [49,5% (189/382); P =,1]. Além disso, houve efeito de touro n tx de concepção [Touro A =, 5,% (18/216) b ; Touro B = 63,4% (211/333) e Touro C = 53,5% (17/) b ; P=,8]. Not-se que lguns touros presentrm menores diferençs n tx de concepção qundo inseminção rtificil foi relizd com sêmen sexdo ou convencionl (Figur 3). 8 Sexdo Convencionl 7,9 49,5 57,6 56,1,4 59,8 Bull Touro 755 A Bull Touro A7 B Bull Touro 762 C Figur 3. Tx de concepção de novilhs Jersey submetids à inseminção rtificil de cordo com o touro (A, n=216; B, n= 333 e C, n=) e o tipo de sêmen (sexdo ou não sexdo). Verificou-se efeito de touro (P =,8) e de sêmen (P =,1). Os resultdos são indictivos de que dequção do momento ds inseminções em relção o início do cio melhor tx de concepção, pesr do processo de sexgem estr reduzindo eficiênci d técnic em novilhs. Vle ressltr diferenç individul de fertilidde entre touros. Ess informção tem relevnte plicção prátic, pois possibilit seleção de touros de mior desempenho pós sexgem. O efeito individul d fertilidde de touros pós sexgem tmbém tem sido foco de outros grupos de pesquis (Borchersen e Pecock, 9). Inseminção rtificil em tempo fixo (IATF) com sêmen sexdo Atulmente, são rrs s publicções que tentm relcionr txs de concepção pós o uso de sêmen sexdo em vcs de corte e de leite inseminds em tempo fixo. Um ds possíveis rzões d diminuição dos índices de fertilidde pós o uso de sêmen sexdo é o menor tempo de vibilidde, ssocido com diferentes pdrões de motilidde espermátic (Schenk et l., 6). Alguns utores reltrm que o sêmen sexdo necessit de menos tempo pr cpcitção devido o processo de seprção por citometri de fluxo (Lu et l., 4). Um ds possibiliddes de diminuir vrição do momento d ovulção é o emprego de técnics de sincronizção, o que poderi colborr n eficiênci de progrms de inseminção rtificil com sêmen sexdo. SPERMOVA (11), Vol. 1, N 1 ISSN : 2223-9375 16
Tx de concepção (%) P.S. Bruselli et l. // SPERMOVA (11) 1(1): 14-25 Vcs de corte e de leite sincronizds com progestágenos e estrdiol ovulm cerc de 7-72h pós retird dos implntes (Souz et l., 6, Bruselli et l., 6, Sles et l., 8). Bsedo nesses princípios, nosso grupo de pesquis em prceri com Sexing, Lgo d Serr e Intervet relizou um primeiro estudo em vcs Nelore (Bos indicus, n=389) prids entre 3 e dis, no qul inseminção foi relizd em tempo fixo com o sêmen convencionl (x1 6 esptz/dose) ou com sêmen sexdo (2.1x1 6 esptz/dose) em dois diferentes momentos reltivos à retird do implnte uriculr contendo Norgestomet (Crestr), 54h (16-18 hors ntes d ovulção) ou h (1-12 hors ntes d ovulção). Noss hipótese foi que IATF próxim à ovulção umentri tx de concepção utilizndo sêmen sexdo por presentr menor período de vibilidde e tempo pr cpcitção no trto reprodutivo. Nesse experimento, o sêmen foi preprdo levndo em considerção cd ejculdo. No lbortório, os ejculdos form divididos, sendo metde submetid o congelmento trdicionl e outr metde, o processo de sexgem seguid de congelmento. Não foi observd diferenç n tx de concepção qundo IATF com sêmen sexdo foi relizd hors pós retird do implnte de norgestomet (Figur 4). Além disso, consttou-se que não houve diferenç n tx de concepção entre o uso do sêmen convencionl (58,9%), sexdo-x (52,%) e sexdo-y (49,%), indicndo eficiênci semelhnte pr o sêmen sexdo em mbos os sexos. Os resultdos d sexgem fetl relizdos por ultrssonogrfi dis pós IATF demonstrrm 93,9% de eficiênci de obtenção do sexo desejdo. Apesr de não ter sido verificd diferenç esttisticmente significtiv, o trso n IATF umentou 9,% tx de concepção no grupo de nimis insemindos com o sêmen sexdo. Com bse nos efeitos numericmente positivos do experimento nterior, outro estudo foi relizdo pr verificr o efeito de mior trso pr relizção d IATF ( vs. 64 hors pós retird; Souz et l., 8). Form utilizds 383 vcs Nelore com período pós-prto de 5 dís. O sêmen foi preprdo seguindo o mesmo delinemento dos experimentos nteriores. Os resultdos demonstrm que ocorre redução n tx de concepção qundo IATF é relizd 64 hors pós retird do implnte (Figur 5). Assim, os resultdos sugerem que o momento mis dequdo pr relizção d IATF com sêmen sexdo poss ser h d retird d fonte de progesteron /progestágeno (1 12 hors ntes d ovulção). b; P <.5 5 48,4 n=95 55,1 n=98 b 37,4 46,4 n=97 3 n=99 1 C54h Ch S54h Sh Sêmen convencionl Sêmen sexdo Figur 4. Efeito do momento d IA (54h ou h pós retird do implnte uriculr contendo Norgestomet) e do tipo de sêmen (convencionl ou sexdo) n tx de concepção pós IATF em vcs Nelore (Bos indicus) pós-prto. SPERMOVA (11), Vol. 1, N 1 ISSN : 2223-9375 17
P.S. Bruselli et l. // SPERMOVA (11) 1(1): 14-25 Figur 5. Efeito do momento d IA (h ou 64h pós retird do implnte de progestágeno) e do tipo de sêmen (convencionl ou sexdo) n tx de concepção pós IATF em vcs Nelore (Bos indicus) no pós-prto. Em função dos resultdos obtidos nos experimentos nteriores, Sles et l. (11) vlirm qul seri o melhor momento pr relizr IATF com sêmen sexdo em relção o momento d ovulção. Nesse estudo, 339 vcs de cortes lctntes form distribuíds letorimente pr receber IATF com sêmen sexdo 36, 48 ou hors pós retird do dispositivo de progesteron. Exmes ultrssonogrficos form relizdos de 12/12 hors em todos os nimis pr determinr o momento d ovulção. As ovulções ocorrerm em médi 71,8 ± 7,8 hors pós retird do dispositivo. Observou-se mior tx de prenhez ns vcs inseminds próxims à ovulção. Os resultdos estão presentdos n Tbel 1. Tbel 1. Risco de prenhez de cordo com o intervlo entre IATF e ovulção em vcs de corte lctntes inseminds com sêmen sexdo. Intervlo IATF /ovulção No./No. Risco de prenhez (95% IC) 1 P > 24 > 12 24 > 12 5,8,24 5/87 c (,8-,7) 19,4 21/18 b Referênci 37,9 2,34 36/95 (1,22-4,51) <,1,1 Após ovulção,b Letrs diferentes n mesm colun, difere esttisticmente (P <.5). 1 IC = Intervlo de confinç. 36,4 1,8 8/22 b (,64-5,3),27 Em outro estudo relizdo no Texs EUA, vliou-se o efeito do trso de 6 hors no momento d IATF com sêmen sexdo em novilhs Jersey cíclics sincronizds e inseminds em tempo fixo (Sles et l., 11). Os nimis form sincronizdos com CIDR + 2mg de BE + PGF no di ; retird do CIDR + PGF no di 8; BE (1mg) no di 9 e IATF no di 1 (54 ou hors d retird do CIDR). Houve interção entre o tipo de sêmen e o momento d IATF n tx de concepção (p=,6), sendo observdo umento n tx de concepção qundo IATF foi relizd com sêmen sexdo hors pós retird do dispositivo de progesteron. No entnto, esse efeito não foi verificdo pr o sêmen convencionl (Figur 6). SPERMOVA (11), Vol. 1, N 1 ISSN : 2223-9375 18
P.S. Bruselli et l. // SPERMOVA (11) 1(1): 14-25 5 5,5 11 51,8 112 3 16,2 31,4 12 b 1 15 c Conv. 54h Conv. h Sexdo 54h Sexdo h Figur 6. Efeito do momento d IA (54h ou h pós retird do dispositivo de progesteron; 16 18 h ou 1 12 h ntes d ovulção) e do tipo de sêmen (sexdo e convencionl) n tx de concepção pós IATF em novilhs Jersey. Nesse experimento form empregdos 3 touros. Verificou-se diferenç n tx de concepção entre os touros utilizdos no experimento, indicndo mis um vez que pode hver diferençs entre reprodutores qundo d utilizção de sêmen convencionl e sexdo (Figur 7). 7 52,8 61,4 5 3 39,4 14,7 34,9 21,9 1 Conv. Bull 1 Sexdo Bull 1 Conv. Bull 2 Sexdo Bull 2 Conv. Bull 3 Sexdo Bull 3 Figur 7. Tx de concepção de Novilhs Jersey inseminds em tempo fixo de cordo com o touro e o tipo de sêmen (sexdo ou convencionl). Verificou-se efeito de touro (P =,1) e de sêmen (P =,1). Após determinção do melhor momento pr relizção d IATF com sêmen sexdo, outros estudos form relizdos com o objetivo de verificr o efeito do diâmetro foliculr no momento d IATF e expressão de estro n tx de concepção. Estudos nteriores demonstrrm que fêmes com folículo de mior diâmetro no momento d IATF (Sá Filho et l., 1b) e vcs que expressrm estro ntes d IATF (Sá Filho et l., 11) presentm melhores índices de concepção com sêmen convencionl. Qundo ess metodologi (diâmetro do folículo n IATF) foi empregd utilizndo sêmen sexdo (Sá Filho et l., 11, ddos ind não publicdos) observou-se interção (P=,2) entre o tipo do sêmen e o tmnho do folículo dominnte [Convencionl 8mm = 58,9% (126/214); Convencionl <8mm = 49,5% (11/4); Sexdo 8mm = 56,8% (134/236) e Sexdo <8mm = 31,2% (59/189); Figur 8]. Nesse estudo, verificou-se que diferenç entre os tipos de semen (convencionl e sexdo) n probbilidde de prenhez os 3 diminui medid em que o diâmetro dos folículos n IATF ument (P=,1; Figur 9). No estudo em que se vliou expressão do estro em protocolos de IATF com semen sexdo, verificou-se que não houve interção entre o tipo do sêmen e ocorrênci de estro entre retird do dispositivo de progesteron e IATF (P=,87; Figur 1). Porém, verificou-se diferenç esttístic entre semen convencionl e sexdo (P=,5) e entre ocorrênci de estro ou não (P=,3) n tx de prenhez de vcs Bos indicus submetids à IATF. SPERMOVA (11), Vol. 1, N 1 ISSN : 2223-9375 19
P.S. Bruselli et l. // SPERMOVA (11) 1(1): 14-25 b 58,9 b 56,8 5 49,5 3 c 31,2 1 4 214 189 236 < 8mm Convencionl > 8mm < 8mm > 8mm Figur 8. Tx de prenhez de vcs Bos indicus de cordo com o tipo de sêmen (convencionl ou sexdo) e o diâmetro do FD ( 8mm ou > 8mm) n IATF.Verificou-se interção entre o tipo de sêmen o diâmetro do FD n IATF (P =,2).,b,c Brrs com letrs diferentes são esttisticmente diferentes (P <,5). Sexdo Probbilidde de prenhez 3 dis pós IATF 8 7 5 3 2 4 6 8 1 12 14 16 18 Diâmetro do folículo dominnte n IATF (mm) Convencionl Sexdo Figur 9. Probbilidde de prenhez 3 dis pós IATF em vcs Bos indicus (n = 1344) de cordo com o tipo de semen [Convencionl (n = 673) e Sexdo (n = 671) e o diâmetro do FD n IATF [Convencionl = exp (-,18+,85* Diâmetro do FD n IATF / 1+exp (-,18+,85* Diâmetro do FD n IATF); P <,1) e Sexdo = exp (-1,2449+,117* Diâmetro do FD n IATF / 1+exp (-1,2449+,117* Diâmetro do FD n IATF); P <,1)]. 58,5 5 43,6 5, 3 33,9 1 62 183 62 184 Sem estro Estro Sem Estro Estro Convencionl Sexdo SPERMOVA (11), Vol. 1, N 1 ISSN : 2223-9375
P.S. Bruselli et l. // SPERMOVA (11) 1(1): 14-25 Figur 1. Tx de prenhez de vcs Bos indicus de cordo com o tipo de semen (convencionl ou sexdo) e ocorrênci de estro (presenç ou não de estro) entre retird do dispositivo de progesteron e IATF. Não houve interção entre o tipo de semen e ocorrênci de estro (P=.87). Como citdo nteriormente, outro possível ftor que poderi influencir tx de concepção utilizndo sêmen sexdo seri o locl de deposição no útero. Em um estudo recente Sl et l., (11, ddos ind não publicdos) comprrm tx de concepção de vcs Nelore lctntes recebendo IATF no corpo (n=1) ou no corno (n=1) do útero. Nesse experimento, s vcs form inseminds -64h pós retird do dispositvo, sendo que somente fêmes presentndo diâmetro foliculr >8mm form incluíds n nálise. As inseminções relizds no corno uterino, o sêmen foi depositdo no corno ipsilterl o mior folículo presente no momento d IATF (Figur 11). As txs de concepção form similres entre os diferentes locis de deposição do sêmen sexdo no trto uterino de vcs Nelore lctntes. 5 54.% 5.% Pregnncy per AI 3 1 1 1 Corpo Uterino Corno Uterino Figur 11. Tx de concepção vcs Bos indicus lctntes de cordo com o locl de deposição do sêmen sexdo (Corno vs. Corpo do útero). Não houve efeito do locl de deposição (P>,5). Com o intuito de reduzir o número de mnejos nos protocolos de IATF com sêmen sexdo, vcs Nelore lctntes form submetids dois diferentes protocolos de sincronizção d ovulção (BED9 e RBE9; n=593, Sá Filho et l. 1d). No BED9, os nimis receberm um dispositivo intrvginl de progesteron ssocido à dministrção i.m. de 2 mg de benzoto de estrdiol (D). No D8, o dispositivo de progesteron foi removido, dministrou-se i.m,25 mg de cloprostenol sódico e 3UI de ecg. Vinte e qutro hors pós retird do dispositivo, dministrou-se i.m. 1 mg de benzoto de estrdiol (BE). A IATF foi relizd entre e 63 hors pós remoção do dispositivo. No grupo RBE9, s fêmes form sincronizds utilizndo o mesmo protocolo descrito pr o grupo BED9, porém permnecerm com o dispositivo intrvginl durnte nove dis, dministrou-se 1 mg de BE no momento d retird do dispositivo e IATF com sêmen sexdo foi relizd entre 5-53 hors pós remoção do dispositivo. Não foi verificdo efeito do protocolo de sincronizção sobre tx de prenhez (BED9 = 47,1 %; 1/297 vs. RBE9 = 41, %; 121/295; P =,25). Conclui-se que é possível reduzir o número de mnejos sem fetr eficiênci do protocolo de sincronizção d ovulção em vcs inseminds com sêmen sexdo. Trnsferênci de embriões A vibilidde e concentrção de sêmen utilizdos em procedimentos de trnsferênci de embriões são importntes, pois nimis submetidos trtmentos superovultórios presentm, em gerl, menores txs de fertilizção de oócitos que nimis não superovuldos (Scke et l., 1998). Portnto, existem muits dúvids qunto o uso do sêmen sexdo em nimis superovuldos, principlmente devido lterções relcionds o trnsporte espermático no trto uterino em fêmes superestimulds. Com o intuito de vlir produção de embriões em vc Nelore (Bos indicus) superovulds e inseminds em tempo fixo foi relizdo um experimento pr comprr eficiênci do sêmen sexdo e do sêmen convencionl (Bruselli et l., 7). As dodors form sincronizds e inseminds em tempo fixo. A IATF com sêmen sexdo (4,2x1 6 esptz/ia) e convencionl (x1 6 esptz/ia) form relizds 12 e 24 hors pós dministrção do indutor d ovulção (GnRH). O sêmen foi produzido de um reprodutor levndo em considerção cd ejculdo e tods s vcs pssrm por todos os trtmentos (cross-over). Os resultdos estão presentdos n Tbel 2. SPERMOVA (11), Vol. 1, N 1 ISSN : 2223-9375 21
P.S. Bruselli et l. // SPERMOVA (11) 1(1): 14-25 Tbel 2. Produção de embriões de vcs Nelore (Bos indicus) superovulds e inseminds em tempo fixo com sêmen sexdo ou convencionl, Cssilândi, MS, 7. Vribles Sêmen Convencionl Sêmen Sexdo Vlor de P N. vcs 1 1 Totl de estruturs 9,9,78 8, 1,,28 Emb. trnsferíveis (Gru 1, 2 e 3) 6,8,66 4,,74,3 Emb. congeláveis (Gru 1 e 2) 5,9,71 3,5,65,3 Oócitos não fertilizdos 1,5,48 3,7,88,1 Degenerdos 1,,37,5,16,4 Tx de emb. trnsferíveis (%) 68,7 6,3 5, 5,1,1 Tx de emb. congeláveis (%) 59,6 5,1 41,7 5,2,2 Dodors inseminds com sêmen sexdo presentrm menor número de embriões trnsferíveis e congeláveis, umento do número de embriões não fertilizdos e redução n tx de embriões trnsferíveis e congeláveis. Apesr d menor produção de embriões com o emprego do sêmen sexdo é possível produzir mis embriões do sexo de interesse qundo curáci dess biotecnologi tinge 9% de determinção do sexo (Figur 12). 8 68,7 Tx de embriões viáveis (%) 5, b 34,4 45, Convencionl Sexdo Convencionl Sexdo Totl de embriões Embriões sexo de interesse Figur 12. Estimtiv de produção de embriões trnsferíveis (mcho ou fême) com o emprego de sêmen convencionl e sexdo em dodors Nelore superovulds e inseminds em tempo fixo (estimtiv de 9 % de curáci n sexgem). Nesse experimento prte dos embriões produzidos foi trnsferid à fresco em receptors sincronizds pr receber um embrião em tempo fixo (Tbel 3). Txs de prenhez semelhntes form verificds tnto os 3 qunto os dis de gestção pr embriões produzidos com sêmen sexdo ou convencionl. Após sexgem por ultrssonogrfi confirmou-se 9, % de fêmes pr o sêmen sexdo e 52,7 % pr o sêmen convencionl. Tbel 3. Tx de prenhez os 3 e dis pós trnsferênci de embriões provenientes de inseminção com sêmen convencionl e sexdo e porcentgem de fêmes n sexgem fetl. Embriões produzidos n Tx de prenhez 3 dis (%) Tx de prenhez dis (%) Sexgem fetl (% de fêmes) Sêmen convencionl 68 57,3 (39/68) 52,9 (36/68) 52,7 (19/36) SPERMOVA (11), Vol. 1, N 1 ISSN : 2223-9375 22
P.S. Bruselli et l. // SPERMOVA (11) 1(1): 14-25 Sêmen sexdo 42 57,1 (24/42) 47,6 (/42) 9, (18/) Outro experimento foi estbelecido pr vlir o efeito do trso de 6 hors n IATF com sêmen sexdo em dodors Nelore superovulds (Sores et l., 11). As dodors form sincronizds e inseminds em tempo fixo. No grupo controle, IATF com sêmen sexdo (4,2x1 6 esptz/ia, Sexdo12-24h) e convencionl (x1 6 esptz/ia) form relizds 12 e 24 hors pós dministrção do indutor d ovulção (LH). Outro grupo (Sexdo18-3h) foi insemindo com sêmen sexdo (4,2x1 6 esptz/ia) 18 e 3 hors pós o LH. O sêmen foi produzido de um reprodutor levndo em considerção cd ejculdo, semelhnte os experimentos nteriores. Os resultdos estão presentdos n Tbel 4. O trso d IATF de 12/24 hors pr 18/3 hors pós dministrção de LH umentou o número de embriões produzidos em vcs Nelore superestimulds e inseminds com sêmen sexdo. No entnto, os resultdos ind são inferiores os obtidos com utilizção de sêmen convencionl. Esses ddos são indictivos de que existe possibilidde de umentr eficiênci d produção de embriões com o emprego de sêmen sexdo trsndo em 6 hors o momento d IATF pós o trtmento pr indução d ovulção com LH. Tbel 4. Produção de embriões de vcs Nelore (Bos indicus) superovulds e inseminds em tempo fixo com sêmen sexdo e convencionl de cordo com o momento d IATF, 11. Trtmentos Convencionl Sexdo Sexdo Vlor P 12/24 12/24 18/3 N. de vcs 17 18 19 ---- Totl estructurs 8, 3,2 7,1 3,3 9, 3,8,14 N. embriões trsnferíveis 6,8 2,6 2,4 1,8 c 4,5 3, b <,1 % embriões trsnferíveis d 86,1 11,9 37,3 26,7 c 48,2 25,9 b <,1 N. embriões congeláveis 6, 2,4 2, 1,4 c 3,7 2,8 b <,1 % embriões congeláveis e 76,3 19,2 31,8 24,5 c 38, 26,5 b <,1 N. embriões degenerdos,7,7,9 1,6 1,6 2,1,5 N. oócitos não fertilizdos,5,7 3,7 3,6 b 2,9 2,6 b <,1 b c, Linhs com diferentes letrs diferem esttisticmente (P <,5) d Percentul do número de embriões trnsferíveis sobre o totl de estruturs recuperds. e Percentul do número de embriões congeláveis sobre o totl de estruturs recuperds. Experimento semelhnte o de vcs Bos indicus (Nelore) de produção in vivo de embriões com sêmen sexdo foi conduzido em novilhs Bos turus (Holndess; Sores et l., 11). Os resultdos estão presentdos n Tbel 5. Tbel 5. Produção de embriões de vcs holndess (Bos turus) superovulds e inseminds em tempo fixo com sêmen sexdo e convencionl de cordo com o momento d IATF, 11. Trtmentos Convencionl Sexdo Sexdo Vlor P 12/24 12/24 18/3 N. de vcs 11 11 11 ---- Totl estruturs 1,4 3,4 11,3 4,4 12,4 3,8.4 N. embriões trsnferíveis 8,7 2,8 4,6 3, b 6,4 3,1 b.7 % embriões trsnferíveis d 85,9 14,,7 21,3 c 54,2 23,2 b <.1 N. embriões congeláveis 6,9 1,8 3,2 1,8 b 5,4 3,4 b.7 % embriões congeláveis e 69,9 16,8 29,9 15,5 c 45,3 26,6 b <.1 SPERMOVA (11), Vol. 1, N 1 ISSN : 2223-9375 23
P.S. Bruselli et l. // SPERMOVA (11) 1(1): 14-25 N. embriões degenerdos,7,9 1,4 1,8 1,3 1,7.43 N. oócitos não fertilizdos,9 1,4 5,2 3,1 b 4,6 2,6 b.3 b c, Linhs com diferentes letrs diferem esttisticmente (P <,5) d Percentul do número de embriões trnsferíveis sobre o totl de estruturs recuperds. e Percentul do número de embriões congeláveis sobre o totl de estruturs recuperds. Os resultdos são indictivos de que o trso em 6 hors ns inseminções rtificiis com sêmen sexdo em progrms de trnsferênci de embriões pode ser um medid pr umentr eficiênci dess biotecnologi em protocolos de superovulção com o emprego de inseminção rtificil em tempo fixo, tnto em Bos indicus como em Bos turus. Conclusão Os ddos presentdos demonstrm que s txs de concepção pós detecção de cio em novilhs inseminds com sêmen sexdo são ceitáveis. Aind, com dequção do momento d inseminção em relção o início do estro está melhorndo tx de concepção. Melhores resultdos são obtidos qundo s inseminções são relizds entre 16 24 hors pós o início do estro (ou sej, 6 14 hors ntes d ovulção). A tx de concepção pós o uso d sincronizção d ovulção pr IATF com sêmen sexdo foi stisftóri, desde que o momento d IATF sej justdo pr hors pós retird do implnte (1 hors ntes d ovulção). O uso do sêmen sexdo em progrms de superovulção está diminuindo produção de embriões viáveis. No entnto, o trso de 6 hors ns inseminções (IATF 18 e 3 hors pós o indutor de ovulções), é um lterntiv pr umentr o número e embriões viáveis do sexo desejdo. É importnte slientr que existe grnde vrição individul n fertilidde de touros submetidos o processo de sexgem. Esss diferençs devem ser levds em considerção no momento d escolh do reprodutor pr progrms de inseminção rtificil e de trnsferênci de embriões. Mis experimentos são necessários pr melhor compreender os ftores que fetm fertilidde do sêmen sexdo em fêmes bovins. Agrdecimentos À Sexing Techonologies, à Lgo d Serr, à Intervet e o Dlhrt Jersey Rnch pel prceri que possibilitou o desenvolvimento dos experimentos relizdos no Brsil e EUA. Referêncis Bibliogrfics Bruselli, P.S., Ayres, H., Souz, A.H., Mrtins, C.M., Gimenes, L.U., Torres-Júnior, J.R.S. 6. Impcto d IATF n eficiênci reprodutiv em bovinos de corte. In: Simpósio Interncionl de Reprodução Animl Aplicd, 2, 6, Londrin, PR. Anis do 2º Simpósio Interncionl de Reprodução Animl Aplicd: Fculdde de Medicin Veterinári e Zootecni, Universidde de São Pulo. Vol. 1, p.113-132. Bruselli, P.S., Souz, A.H., Mrtins, C.M., Gimenes, L.U., Sles, J.N.S., Ayres, H., Arrud, R.P. 7. Sêmen sexdo: inseminção rtificil e trnsferênci de embriões. Revist Brsileir Reprodução Animl 31: 374-381. Bodmer, M., Jnett, F., Hssig, M., Den Ds, N., Reichert, P., Thun, R. 5. Fertility in heifers nd cows fter low dose insemintion with sex-sorted nd non-sorted sperm under field conditions. Theriogenology 64:1647-1655. Borchersen, S., Pecock, M. Dnish, A.I.9. Field dt with sexed semen. Theriogenology 71: 59 63, 9. Dejrnette, J.M., Nebel, R.L., Mrshll, C.E. 9. Evluting the success of sex-sorted semen in US diry herds from on frm records. Theriogenology 71: 49 58. Dejrnette, J.M., Nebel, R.L., Mrshll, C.E., Moreno, J.F., Mcclery, C.R., Lenz, R.W. 8. Effect of Sex-Sorted Sperm Dosge on Conception Rtes in Holstein Heifers nd Lctting Cows. Journl Diry Science 91:1778-1785. Grner, D.L. 6. Flow cytometric sexing of mmmlin sperm. Theriogenology 65: 943-957. Grner, D.L., Seidel Jr., G.E. 8. History of commercilizing sexed semen for cttle. Theriogenology 69: 886 895. Kurykin, J., Jkm, U., Jlks, M., Aidnik, M., Wldmnn, A., Mjs, L. 7. Pregnncy percentge following deposition of sex-sorted sperm t different sites within the uterus in estrus-synchronized heifers. Theriogenology 67:754-759. Lu, K.H., Seidel Jr., G.E. 4. Effects of heprin nd sperm concentrtion on clevge rtes of bovine oocytes inseminte with flow-cytometriclly-sorted bovine sperm. Theriogenology 62:819-83. Normn, H.D., Hutchison, J.L., Miller, R.H. 1. Use of sexed semen nd its effect on conception rte, clf sex, dystoci, nd stillbirth of Holsteins in the United Sttes. Journl Diry Science 93: 388 389. Sá Filho, M.F., Ayres, H., Ferreir, R.M., Nichi, M., Fosdo, M., Cmpos Filho, E.P., Bruselli, P.S. 1. Strtegies to improve pregnncy per insemintion using sexed semen in diry heifers detected in estrus. Theriogenology 74: 1636 1642. SPERMOVA (11), Vol. 1, N 1 ISSN : 2223-9375 24
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