c aderno f armácia Alice LOUZADA OLIVEIRA. a ; Carla D. PADILHA b ; George GONZÁLEZ ORTEGA; Pedro Ros PETROVICK

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1 Caderno de Farmácia, v. 17, n. 1, p , c aderno de f armácia ISSN ACHYROCLINE SATUREIOIDES (LAM.) DC. (MARCELA), ASTERACEAE, AVALIAÇÃO COMPARATIVA DA DROGA VEGETAL E ESTUDOS PRELIMINARES DE OTIMIZAÇÃO DA EXTRAÇÃO 1 Alice LOUZADA OLIVEIRA. a ; Carla D. PADILHA b ; George GONZÁLEZ ORTEGA; Pedro Ros PETROVICK Tecnologia Farmacêutica, Departamento de Produção e Controle de Medicamentos, Faculdade de Farmácia, UFRGS a Bolsista de Iniciação Científica CNPq; b Bolsista de Iniciação Científica PIBIC/PROPESQ/UFRGS RESUMO: A. satureioides (Lam.) DC., Asteraceae, tem amplo uso na medicina tradicional. Investigações farmacológicas de extratos de suas inflorescências demonstraram atividades sedativa, analgésica, antiinflamatória e antiespasmódica. Estes efeitos biológicos dependem do meio extrativo e da qualidade da matéria-prima vegetal. Com a finalidade de avaliar as características desta matéria-prima vegetal foram realizados ensaios de perda por dessecação, teor de extrativos e de flavonóides totais e os resultados comparados com dados existentes em outras pesquisas. Os resultados obtidos na caracterização físico-química da matéria-prima vegetal estão de acordo com os anteriormente descritos. Como algumas das ações farmacológicas podem estar associadas aos flavonóides, compostos majoritários na droga, e como a β-ciclodextrina (βcd) possui propriedades que influenciam a solubilidade destas moléculas, objetivou-se a obtenção de extratos com baixo teor etanólico e alta concentração de flavonóides. Para tanto foram realizados experimentos exploratórios através de planejamento fatorial 2 3. Os extratos foram obtidos por maceração a frio, com concentração fixa da droga vegetal, variando o teor etanólico e a presença de βcd no meio extrativo. Foi observado aumento estatisticamente significativo no teor de flavonóides totais com a elevação do teor etanólico. O tempo de maceração não foi o fator determinante do rendimento de extração. A influência da βcd na extração de flavonóides não se mostrou estatisticamente significativa nessa primeira etapa de experimentos, porém, para os macerados com menor teor etanólico no solvente, observou-se maior eficiência na extração dos flavonóides, com conseqüente redução do tempo de contato, o que demonstra uma vantagem tecnológica interessante. UNITERMOS: Achyrocline satureioides, β-ciclodextrina, flavonóides, solubilidade, extração ABSTRACT: ACHYROCLINE SATUREIOIDES (LAM.) DC., ASTERACEAE: COMPARATIVE EVALUATION OF THE VEGETAL DRUG AND PRELIMINARY OPTIMIZATION STUDIES ON EXTRACTION. A. satureioides has a widespread use in traditional medicine. Pharmacological studies of extracts obtained from the inflorescences demonstrated sedative, analgesic, antinflammatory and antispasmodic activities. These biological effects depend on the extraction medium and the quality of the vegetable drug. In order to evaluate the characteristics of the vegetable raw matter, loss on drying, extractives and total flavonoid content were performed and the results were compared to data present in other researches. The observed results of the physico-chemical characterization are in accordance with others already reported. Because some of the pharmacological activities may be associated to the flavonoids, major compounds in the drug and the β-cyclodextrin (βcd) can influence the solubility of such molecules, it was aimed the preparation of extracts with low alcohol content and high flavonoid concentration. Exploratory experiments were performed using a 2 3 factorial design. The extracts were obtained by maceration with a fixed concentration of vegetable drug. A statistically significant enhancement of the total flavonoid content was observed increasing the alcohol content in the extraction medium. The maceration s extent was not the determinant factor on the extraction yield. Although the influence of βcd on the extraction of Achyrocline satureioides flavonoids hasn t been statistically significant at this first part of the experiments, for the macerate with lower alcohol content, it was observed better flavonoid extraction efficiency with consequent reduction of the contact time, what suggests an interesting technological advantage. KEYWORDS: Achyrocline satureioides, β-cyclodextrin, Flavonoid, Solubility, Extraction 1 Trabalho premiado com o terceiro lugar no 21 Concurso Acadêmico de Pesquisa Científica do Diretório Acadêmico da Faculdade de Farmácia da UFRGS, 2000.

2 34 Caderno de Farmácia, v. 17, n. 1, p , 2001 INTRODUÇÃO Medicamentos fitoterápicos e plantas medicinais possuem um papel de destaque no sistema brasileiro de saúde, tanto do ponto de vista econômico como cultural. Nesse contexto, a realização de pesquisas objetivando o desenvolvimento de formas farmacêuticas, contendo produtos derivados de plantas medicinais, com eficácia, segurança e qualidade constantes e comprovadas, vem ocupando um número crescente de pesquisadores em todo o mundo e, especialmente no Brasil (PETROVICK et al., 1997). O desenvolvimento galênico de fitoterápicos visa a obtenção de formas farmacêuticas onde o potencial químico e terapêutico do vegetal deve ser preservado e valorizado (BASSANI, 1990). Dentre as plantas empregadas no Sul do Brasil e países da fronteira, destaca-se a Achyrocline satureioides, conhecida como marcela ou macela. Acreditando no potencial deste vegetal, foi iniciada uma linha de pesquisa a cerca de 16 anos no Programa de Pósgraduação em Ciências Farmacêuticas da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, envolvendo aspectos fitoquímicos, farmacológicos, biotecnológicos e de tecnologia farmacêutica (HENRIQUES & LINCK, 1995). Foram comprovadas farmacologicamente as atividades antimicrobianas (MOTA, 1963; GUTKING et al., 1981; MARTINS et al., 1988; LIMA, 1990); atividade tripanossomicida e inseticida (ROJAS DE ARIAS et al., 1995); atividade antiespasmódica de extratos aquosos e hidroalcoólicos (LANGELOH & SCHENKEL, 1982, 1982b, 1985; SIMÕES et al., 1984, 1986; SILVA, 1993; SILVA & LANGELOH, 1993); atividade analgésica (SIMÕES, 1984; SIMÕES et al., 1988); atividade antiinflamatória (SIMÕES, 1984; SIMÕES 1988; SONAGLIO, 1987; CAMARGO et al., 1994) e a atividade antiviral (SIMÕES, 1992). O desenvolvimento tecnológico de extratos de Achyrocline satureioides iniciou-se neste curso de Pós-graduação com a padronização de soluções extrativas hidroalcoólicas e o estabelecimento de metodologias para o controle de qualidade da matéria-prima e do produto acabado por SONAGLIO (1987). KNORST (1991) desenvolveu, posteriormente, formas farmacêuticas plásticas contendo soluções extrativas concentradas do vegetal avaliando a estabilidade e a liodisponibilidade das preparações (DE PAULA, 1996 ; SANTOS, 1996). Tendo em vista que a caracterização físicoquímica da droga vegetal e dos extratos obtidos a partir de suas inflorescências faz parte do conjunto das especificações de qualidade na obtenção de um fitoterápico, foram realizados os ensaios de perda por dessecação, teor de extrativos e teor de flavonóides totais. Além disso, os flavonóides marcadores de A. satureioides possuem reduzida solubilidade em água, o que justifica o emprego da β-ciclodextrina já que a mesma possui propriedades que influenciam a estabilidade e a solubilidade de várias moléculas e produtos secos nebulizados de origem vegetal. Assim, mostra-se interessante o estudo da sua influência sobre as características de extratos de A. satureioides. MATERIAL E MÉTODOS Matéria-prima vegetal A matéria-prima vegetal estudada, Achyrocline satureioides, foi coletada no município de Presidente Lucena (RS) no dia 16 de abril de A identificação botânica (KNORST, 1995) foi realizada por Marcos Sobral do Departamento de Botânica do Instituto de Biociências da UFRGS. As sumidades floridas foram separadas manualmente, armazenadas à temperatura ambiente durante 15 dias, ao abrigo da luz, e moídas em moinho de facas com abertura de malha de saída de 1 mm (SONAGLIO, 1987). Perda por dessecação (CARVALHO, 1997) O teor de umidade foi determinado por método gravimétrico, utilizando-se balança com sistema de secagem por infravermelho. Cerca de 2,0g de droga vegetal, exatamente pesados, foram colocados em pesa-filtros, previamente tarados, e dessecados nas seguintes condições de secagem: sensibilidade de 120 segundos e temperatura de 105 ºC, com intervalo de 10 minutos entre cada determinação, tempo necessário para o resfriamento da balança. Os resultados foram expressos em porcentagem ponderal sobre a quantidade da droga, através da média de três determinações. Planejamento da extração Para a extração foram utilizadas misturas de etanol e água destilada, adicionadas ou não de β- ciclodextrina (Merck). A partir das inflorescências de Achyrocline satureioides foram realizadas duas extrações concomitantemente. Na primeira, foram obtidas duas soluções extrativas empregando como solventes etanol 40 % (V/V) e etanol 80 % (V/V). O método de extração empregado foi maceração a frio realizada ao abrigo da luz e com agitações ocasionais, e a relação droga vegetal:solvente de 7,5 % (m/v) (SONAGLIO, 1987). A segunda extração seguiu os mesmos passos da anterior, sendo que foram adicionados 25,5 g de β- ciclodextrina ao meio extrativo como no início do procedimento de maceração. Essa quantidade de β-ciclodextrina foi calculada com base na obtenção do teor de flavonóides totais da droga vegetal e levando-se em consideração uma proporção de 40 partes de β-ciclodextrina para uma parte de soluto calculada como quercetina (VINADÉ, 1995). Em uma primeira etapa, utilizou-se um tempo de

3 Caderno de Farmácia, v. 17, n. 1, p , maceração de 4 dias e posteriormente, 8 dias, obtendo-se, assim, oito soluções extrativas. Os experimentos exploratórios foram realizados através de planejamento fatorial 2 3, levando-se em consideração os parâmetros teor etanólico, tempo de maceração e presença de β- ciclodextrina, conforme tabela 1. Os efeitos e as interações foram calculados em função do teor de flavonóides totais. Tabela 1. Planejamento fatorial Fator teor etanólico experimento (%) tempo de maceração (dias) β-ciclodextrina SE ausente SE presente SE ausente SE presente SE ausente SE presente SE ausente SE presente Teor de extrativos (BUNDESVEREINIGUNG, 1986a) Exatamente cerca de 1,0 g da matériaprima vegetal triturada foi aquecido à ebulição com 100,0 g de água durante 10 minutos. Após resfriamento, reconstitui-se o peso inicial com adição de massa de água correspondente àquela evaporada. a solução foi filtrada, desprezando-se os 20 ml iniciais. Foram pesados exatamente cerca de 20,0 g do restante do filtrado em pesafiltro (27 mm d.i. x 55 mm altura), previamente tarado, evaporando-se até a secura em banho de água fervente, sob agitação constante. Após evaporação completa do solvente, o pesa-filtro com o resíduo foi colocado em secador infravermelho acoplado à balança analítica, à temperatura de 105 ºC, até obtenção do peso constante. O teor de extrativos (TE) foi calculado como percentual ponderal pela média de três determinações segundo a equação (1). onde: rs 500 TE = p t (1) TE = teor de extrativos (% m/m) rs = massa do resíduo seco (g) p = massa da droga (g) t = perda por dessecação (g) 500 = fator de diluição x 100 Teor de flavonóides totais (TFT) (BUNDESVEREINIGUNG, 1986b) Exatamente cerca de 0,40 g de droga vegetal ou, no caso da solução extrativa (SE), 15,0 ml de SE foram pesados e transferidos para balão de fundo redondo de 100 ml, acrescentando-se 1,0 ml de solução de metenamina 0,5 % (m/v), 20 ml de acetona R e 2,0 ml de ácido clorídrico R (EUROPEAN, 1969). A mistura foi aquecida sob refluxo durante 30 minutos e filtrada para balão volumétrico de 100 ml através de pequena quantidade de algodão. O resíduo da droga ou da SE e o algodão foram lavados com duas porções de 20,0 ml de acetona e aquecidos à fervura, sob refluxo, durante 10 minutos. As soluções foram filtradas, através de algodão, para o balão volumétrico, completando-se o volume com acetona. Alíquota de 20,0 ml desta solução foi tratada com 20 ml de água e extraída com 15 ml de acetato de etila, em funil de separação. A extração foi repetida três vezes, com porções de 10 ml de acetato de etila. As fases acetato de etila, após serem reunidas e lavadas com 50 ml de água em funil de separação, foram transferidas para balão volumétrico de 50 ml, completando-se o volume com acetato de etila. Esta solução recebeu a denominação de solução-mãe (SM). Foi adicionado 1,0 ml de solução metanólica de cloreto de alumínio 1 % (m/v) a 10,0 ml da SM. Esta solução foi diluída com solução metanólica de ácido acético 5 % (V/V) em balão volumétrico de 25 ml e denominada de solução amostra (SA) (BÖHME & HARTKE, 1981). Concomitantemente, 10,0 ml da SM foram diluídos com solução metanólica de ácido acético 5 % (V/V) em balão volumétrico de 25 ml, recebendo a denominação de solução comparativa (SC). A absorvância da SA medida contra a SC, em cubeta de 1,0 cm de caminho óptico, 30 minutos após a adição de cloreto de alumínio. O comprimento de onda selecionado foi de 425 nm. Os resultados foram expressos em porcentual ponderal calculado como quercetina (C 15 H 22 O 7 ) pela média de três determinações, onde o cálculo do teor baseia-se na extinção específica da mesma a 425 nm, 1979), segundo a equação (2): onde: TF A fd 500 p(100 t) E 1% 1cm = (2) = 500 (DAC, TF = teor de flavonóides totais calculados como quercetina (%; m/m); A = absorvância medida na amostra (AUFS); p = massa da droga (g); t = perda por dessecação (%;m/m); fd = fator de diluição (62500) DISCUSSÃO DOS RESULTADOS A perda por dessecação (PD), indicativo do teor de material volátil do vegetal a 105 C, apresentou um valor de 9,66 % (m/m), o qual pode estar relacionado com as condições edafoclimáticas no momento da coleta ou com a secagem e outros tratamentos aplicados à droga antes da análise. Acredita-se que a variabilidade

4 36 Caderno de Farmácia, v. 17, n. 1, p , 2001 nos resultados de PD poderá ser reduzida pela padronização dos parâmetros do plantio, coleta e dos tratamentos prévios da droga. A importância da perda por dessecação está ligada à estabilidade microbiológica da droga, como expressão de sua suscetibilidade ao desenvolvimento de bactérias e fungos, e estabilidade química, representada especialmente pelos processos de hidrólise (WHO, 1992). A PD pode fornecer dados acerca do rendimento de extração, já que a secagem influi no estado de integridade das estruturas celulares, expondo-as mais ou menos ao contato com solventes (HARBONE et al., 1975). Além do mais, sob o ponto de vista tecnológico e de produção, é importante conhecer quantitativamente o conteúdo de água presente na matéria-prima vegetal, para que este valor seja considerado nos cálculos de rendimento. Os valores da literatura e o encontrado para a droga vegetal em estudo encontram-se abaixo dos limites máximos encontrados no código oficial brasileiro, com relação à maioria das drogas vegetais constituídas de sumidades floridas (FARMACOPÉIA, 1977). O ensaio do teor de extrativos (TE) indica a quantidade de substâncias extraíveis, ou seja, solúveis em determinado sistema solvente. É um método empregado na seleção do solvente mais adequado à extração das substâncias de interesse de uma planta ou como indicativo para o ajuste da quantidade de matéria-prima a ser utilizada visando uma concentração final determinada de substância de interesse no produto da extração. Nesse estudo, o TE foi empregado exclusivamente como um ensaio auxiliar na caracterização físicoquímica da droga vegetal visto que essas características também fazem parte dos parâmetros de qualidade da matéria-prima vegetal. O valor de TE encontrado para a droga vegetal em estudo foi de 15,60 % (m/m). Esses valores também estão relacionados com diferentes fatores ligados ao local de coleta da matéria-prima bem como período e época da coleta. Os componentes majoritários das sumidades floridas da marcela são as agliconas flavonoídicas (HAENSEL & OHLENDORF, 1971; FERRARO et al., 1981; SIMÕES, 1984; MESQUITA et al., 1986; BROUSSALIS et al., 1988; LIMA et al., 1990), às quais se atribui grande parte das atividades farmacológicas citadas. Suas concentrações são determinadas através da quantificação dos teores totais desta classe química, sendo que nesse estudo obtevese um valor de 1,70 % (m/m) de flavonóides totais para a droga vegetal, o qual é calculado como quercetina, visto que é o flavonóide majoritário na marcela. O teor de flavonóides totais foi determinado tanto para a matéria-prima vegetal quanto para os extratos obtidos a partir do farmacógeno, que no caso da marcela são suas sumidades floridas. É importante ressaltar que no cálculo desse TF foi descontado o teor de umidade do vegetal. O resultado encontrado apresenta-se de acordo com dados já relatados em outras pesquisas. Esse ensaio também faz parte da caracterização físico-química da droga vegetal e constitui um dado importante relacionado com a qualidade da matéria-prima vegetal. O teor de flavonóides totais também foi considerado nos cálculos sobre a quantidade de β-ciclodextrina a ser utilizada na obtenção dos extratos, por maceração a frio e com concentração de droga vegetal de 7,5 % (m/v) (SONAGLIO, 1987). A quantidade de β-ciclodextrina calculada foi de 25,5 g levando-se em conta uma proporção de 1 parte de soluto, calculado como quercetina, para 40 partes de β-ciclodextrina (VINADÉ, 1995). Para as soluções extrativas, obtiveram-se os seguintes resultados descritos na tabela 2. Tabela 2. Teor de flavonóides totais nas soluções extrativas de A. satureioides (n = 3) Solução Extrativa Teor de Flavonóides Totais (%; m/m) ± s Coeficiente de Variação (%) SE1 0,0613 ± 1, ,90 SE2 0,0685 ± 5, ,01 SE3 0,1050 ± 4, ,15 SE4 0,1261 ± 9, ,70 SE5 0,0503 ± 4, ,03 SE6 0,0503 ± 3, ,98 SE7 0,1287 ± 2, ,62 SE8 0,1267 ± 2, ,64 CONCLUSÕES A caracterização físico-química da matériaprima vegetal (MPV) encontra-se de acordo com dados anteriormente relatados em outras pesquisas, ou seja, dentro das especificações de qualidade. A influência da β-ciclodextrina na extração de flavonóides de A. satureioides não se mostrou estatisticamente significativa nessa primeira etapa de experimentos, embora haja uma tendência de aumento no TFT quando da utilização da βcd na preparação de soluções extrativas submetidas a 4 dias de maceração. Entretanto, verificou-se que a presença desse adjuvante na etapa de extração dos flavonóides da matéria-prima vegetal mostrou-se favorável sobre o tempo de maceração, possibilitando uma redução do tempo de contato entre a MPV e o solvente para 4 dias. Isso está embasado no resultado da análise de variância pelo teste de Student-Newman-Keuls que apresentou diferença estatisticamente significativa entre SE2 (EtOH 40 %; 4 dias de maceração e com β-ciclodextrina) e SE5 (EtOH; 8 dias de maceração e sem β- ciclodextrina). Através de análise de variância (ANOVA) simples entre as médias de TFT, concluiu-se que o fator que aumenta o TFT de forma estatisticamente significativa é o teor etanólico das soluções de extração.

5 Caderno de Farmácia, v. 17, n. 1, p , PERSPECTIVAS Considerando-se o início recente desses estudos e a possibilidade de um produto fitoterápico tecnologicamente mais viável, tem-se como perspectiva a otimização do processo de extração de Achyrocline satureioides utilizando a β-ciclodextrina na preparação das soluções extrativas. Visto que nos estudos relativos à preparação de extratos secos nebulizados partindo de uma solução desalcoolizada sobre membrana de osmose inversa, constatou-se perda significativa de compostos flavonoídicos na etapa de eliminação do etanol (BASSANI, 1990), faz-se interessante o estudo sobre a possibilidade de obtenção de extratos de marcela com menor teor alcoólico e sem grande alteração da concentração de flavonóides utilizando-se β-ciclodextrina na etapa de extração. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS: BASSANI, V.L. Valorisation de formes galeniques vegetales desalcoolisation et concentration de solutions extratives sur membrane d osmose inverse. Montpellier: Faculté de Pharmacie, Tese de Doutorado. BÖHME, H.; HARTKE, K. Deutches Arzneibuch 8. Ausgabe 1978 Kommentar. Stuttgart: Wissenschaftliche, p BROUSSALIS, A.M.; FERRARO, G.E.; GURNI, A. A.; COUSSIO, J.D. Phenolic Constituents of four Achyrocline satureioides. Biochem. Syst. Ecol., v. 16, n. 4, p , BUNDESVEREINIGUNG Deutscher Apothekerverbände (Hrgsb.). Deutscher Arzneimittel-Codex Frankfurt: Govi, Stuttgart: Deutscher Apotheker, 1986a. v. 1, Codex-Probe 4. BUNDESVEREINIGUNG Deutscher Apothekerverbände (Hrgsb.). Deutscher Arzneimittel-Codex Frankfurt: Govi, Stuttgart: Deutscher Apotheker, 1986b. v. 2: Holunderblüten, p CAMARGO, C.H.F.; LOBO, G.S.; SIMÕES, C.M.O.; GABILAN, N.H.; NICOLAU, M. Avaliação da atividade antiinflamatória do extrato (EB) de Achyrocline satureioides (marcela) no extravasamento plasmático (EP) induzido pela bradicinina e substância P em ratos conscientes. In: SIMPÓSIO DE PLANTAS MEDICINAIS DO BRASIL, 13, 1994, Fortaleza. Resumos..., Fortaleza: UFC, Res. 316 CARVALHO, E.L.S. Desenvolvimento de produto seco nebulizado de Maytenus ilicifolia Martius ex Reiss. - Celastraceae (espinheira-santa). Porto Alegre: Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas, UFRGS, Dissertação de Mestrado. DE PAULA, I.C. Desenvolvimento tecnológico de forma farmacêutica plástica contendo extrato seco nebulizado de Achyrocline satureioides (Lam.) DC. Compositae marcela. Porto Alegre: Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas, UFRGS, Dissertação de Mestrado. EUROPEAN Pharmacopoeia. Saint Ruffine: Maisonneuve, FARMACOPÉIA Brasileira. 3ed., São Paulo: Andrei, FERRARO, G.E.; NORBEDO, C.; COUSSIO, J.D. Polyphenols from Achyrocline satureioides. Phytochemistry, v. 20, n. 8, p , GUTKING, G.O.; MARTINI, V.; GRAÑA, N.; COUSSIO, J.D.; TORRES, R.A. Screening of South American Plants for Biological Activities. 1. Antibacterial and Antifungical Activity. Fitoterapia, v. 5, p , HAENSEL, R.; OHLENDORF, D. Ein neues im Ring B unsubstituiertes Flavon aus Achyrocline satureioides. Archiv. Pharm., v. 304, n. 12, p , HARBONE, J.B.; MABRY, T.J.; MABRY, H. The Flavonoids. New York: Academic, Part 1, p HENRIQUES, A.T.; LINCK, V.O. (org.) A produção científica da Faculdade de Farmácia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul Porto Alegre: Palotti, KNORST, M.T. Desenvolvimento tecnológico de forma farmacêutica plástica contendo extrato concentrado de Achyrocline satureioides (Lam.) DC. Compositae (marcela). Porto Alegre; Curso de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas, UFRGS, Dissertação de Mestrado. LANGELOH, A.; SCHENKEL, E.P. Atividade antiespasmódica do extrato hidroalcoólico de marcela ( A. satureioides Lam. DC., Compositae). In: CONGRESSO BRASILEIRO DE FARMACOLOGIA E TERAPÊUTICA EXPERIMENTAL, 1, 1982, Pirassununga, Resumos..., Pirassununga: CIZIP, 1982a. p.135. LANGELOH, A.; SCHENKEL, E.P. Efeito antagonista do extrato de marcela (Achyrocline satureioides) sobre as contrações produzidas por acetilcolina, histamina e cloreto férrico na musculatura intestinal. In: ENCONTRO ANUAL DE CIÊNCIAS FISIOLÓGICAS, 11, 1982, Rio Grande, Resumos..., Rio Grande: FURG, 1982b. p.40. LANGELOH, A.; SCHENKEL, E.P. Atividade antiespasmódica do extrato hidroalcoólico de marcela (A. satureioides Lam. DC.), Compositae sobre a musculatura lisa genital de ratos. Cad Farm., v. 1, n. 1, p , LIMA, C.S. Estudo químico e biológico de Achyrocline satureioides DC. Recife: Centro de Ciências da Saúde, UFPE, Dissertação de mestrado. LIMA, C.S.; BIEBER, W.L.; MELLO, J.F. Constituintes antimicrobianos de Achyrocline satureioides DC. In: SIMPÓSIO DE PLANTAS MEDICINAIS DO BRASIL, 11, Resumos..., João Pessoa: UFPB, p MARTINS, D.G.; SANTOS, E.R.; MACIEL, G.G.M.; DIV, M.B.S.; NASCIMENTO, S. C. Estudos toxicológicos, microbiológicos e in vitro de Achyrocline satureioides In: SIMPÓSIO DE PLANTAS MEDICINAIS DO BRASIL, 10, 1988, São Paulo: Resumos..., São Paulo. Departamento de Psicologia

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