Ana Patrícia Coimbra e David Cunha

Transcrição

1 Ana Patrícia Coimbra e David Cunha

2 1. Efeito Neuroprotetor do NPY Ana Carvalho 2. Efeitos de diferentes anti-epiléticos em murganhos Inês Morte 3. Papel Neuroprotetor da Adenosina na Retinopatia Diabética Joana Vindeirinho 4. Técnicas de imunohistoquímica em retinas de ratos diabéticos Gabriel Costa

3 Efeito Neuroprotetor do NPY Objetivo: Investigar se o NPY tem um efeito neuroprotetor contra a excitotoxicidade do glutamato em células de retina de rato. Métodos: Isolamento de células de retina de rato; Estudo de morte celular Incorporação de iodeto de propídeo; Imunocitoquímica.

4 O que é o NPY? Neurotransmissor; Péptido constituído por 36 aminoácidos; Encontra-se no cérebro e no sistema nervoso autónomo; Regula o uso de energia e está envolvido na aprendizagem, no processamento de memória e na epilepsia; Segregado pelo hipotálamo; Aumenta a proporção de energia acumulada como gordura e bloqueia sinais nociceptivos (de perceção de dor) que se dirigem para o cérebro; Diminui os efeitos do glutamato.

5 O que é o glutamato? Neurotransmissor do sistema nervoso, envolvido na aprendizagem e a memória; A sua acumulação pode causar morte celular (excitotoxicidade); Esta excitotoxicidade ocorre, muitas vezes em episódios de isquemia cerebral e está associada a doenças como esclerose lateral e doença de Alzheimer.

6 Isolamento de células de retina de rato 9 e 10 de Julho 1. Preparação de meio Mínimo Essencial Eagle (MEM); 2. Extração dos olhos dos ratos Wistar com 6 dias; 3. Dissecação das retinas; 4. Digestão das retinas em tripsina; 5. Preparação de suspensão de células;

7 Isolamento de células de retina de rato 9 e 10 de Julho 6. Contagem de células viáveis com TrypanBlue para cálculo do número de células na suspensão celular ; 7. Cálculo do número de poços necessários para crescer as células (caixas multiwell de 12 com lamelas); 8. Incubação da cultura durante 8 dias (37ºC e 5% CO 2 ).

8 Incubação das células de retina - Adição de glutamato e NPY às culturas 16 e 17 de Julho Glutamato + NPY Concentrações: NPY- 100 um Glutamato- 500 um Quantidade adicionada: NPY- 5uL Glutamato- 2,5 ul

9 Incorporação de iodeto de propídeo Controlo ~ NPY Glutamato Glutamato + NPY

10 Imunocitoquímica 17 de Julho 1. Marcadores Hoechst e TUJ1 Controlo ~ NPY Glutamato Glutamato + NPY

11 2. Marcadores Hoechst e GFAP Controlo Glutamato 3. Marcadores Hoechst e ED1

12 Efeitos de diferentes anti-epiléticos em murganhos Objetivo: Determinar os efeitos da exposição in uteru de fármacos antiepiléticos no desenvolvimento do cérebro, usando como modelo animal murganhos CD1. Método: Coloração de corpos de Nissl em fatias de cérebro de murganho com violeta de cresil.

13 Coloração de corpos de Nissl com violeta de cresil 11 de Julho

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15 Papel Neuroprotetor da Adenosina na Retinopatia Diabética: Alterações no Sistema Adenosinérgico Objetivo: Mostrar se o sistema adenosinérgico na retina é afetado pela diabetes. Métodos: Extratos proteicos.

16 O que é a Retinopatia Diabética? Olho normal Olho com retinopatia diabética

17 Retinopatia Diabética diminuição Aumento da inflamação Adenosina Ativação das microglias Libertação de fatores próinflamatórios Adenosina Inflamação

18 Técnicas de imunohistoquímica em retinas de ratos diabéticos Objetivo: Identificar alterações em retinas de animais diabéticos e o papel do fator de necrose tumoral. Métodos: Coloração de corpos de Nissl de retinas com violeta de cresil; Imunohistoquímica de cortes de retina de ratos.

19 Cortes da retina de rato Imunohistoquímica Violeta de Cresil

20 Constituição da retina Retina não neural 2. Fotorrecetores 3. Camada Nuclear Externa (núcleos dos fotorrecetores) 4. Camada plexiforma externa (sinapses entre bipolares e ganglionares) 5. Camada nuclear interna (células bipolares) 6. Camada plexiforme interna (sinapses entre bipolares e ganglionares) 7. Células ganglionares

21 Agradecimentos Grupo de Neuroendrocrinologia e neurogénese do CNC, em especial: Gabriel Costa Inês Morte Joana Vindeirinho Ana Carvalho Célia Aveleira Magda Dra. Teresa Girão

22 Fontes (consultado a 15/07/2012) 1/ciencias_bio moleculares 1/glutamato (consultado a 19/07/2012); a 19/07/2012); (consultado a 19/07/2012); Vindeirinho, Joana (2012). Uncovering the Neuroprotective Role of adenosine in Diabetic Retinopathy: alterations in the adenosinergic system (Tese de Mestrado). pp 3 e 4.;