Citologia, Histologia e Embriologia

Transcrição

1 FUNDAÇÃO PRESIDENTE ANTÔNIO CARLOS - FUPAC FACULDADE PRESIDENTE ANTÔNIO CARLOS DE UBERLÂNDIA Citologia, Histologia e Embriologia Educação Física 1º P Prof. Msc Ana Paula de Souza Paixão

2 O que significa o termo Citologia, Histologia e Embriologia?

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4 INTRODUÇÃO Biologia celular ou citologia Ramo da biologia (estudo dos seres vivos) que estuda as células - suas funções (secreção, digestão e armazena informação) e sua importância na complexidade dos seres vivos. É o estudo integrado da célula através de todo o artesanal técnico disponível.

5 INTRODUÇÃO Histologia É o ramo da anatomia microscópica que estuda os tecidos animais e vegetais. É o estudo integrado do tecido através de todo o artesanal técnico disponível.

6 INTRODUÇÃO Embriologia Humana É a ciência que estuda a origem e o desenvolvimento de um ser humano - vai de um zigoto até ao nascimento.

7 INTRODUÇÃO Os conhecimentos celulares e histológicos progridem junto com os métodos de investigação. Inicialmente microscópico óptico Descobrimento das cels e elaboração de teorias seres vivos são constituídos por células. Posteriormente técnicas citoquímicas Identificação e localização de moléculas celulares

8 INTRODUÇÃO Posteriormente microscópio eletrônico Grande poder de resolução observar estruturas celulares que não poderiam ser vistas ao óptico.

9 MÉTODOS DE ESTUDO I Confecção de cortes para estudo nos microscópios óptico e eletrônico Embora melhor estudar microscópicamente as cels vivas - há vantagens em obter um preparo permanente (lâmina). As cels ficam preservadas fixadas e coradas para melhor demonstração dos seus componentes.

10 MÉTODOS DE ESTUDO I Confecção de cortes para estudo nos microscópios óptico e eletrônico Preparado permanente ideal mostrar as cels com as mesmas características, mas nem sempre é possível artefatos Alterações produzidas nas células pelas técnicas empregadas.

11 MÉTODOS DE ESTUDO I Confecção de cortes para estudo nos microscópios óptico e eletrônico Os passos para a confecção: Fixação (formol ou bouin) Desidratação (álcool) Clarificação (xilol) Inclusão (parafina fundida - bloco) Microtomia Reidratar (remover a parafina - xilol) Coloração Desidrata (álcool) lamínula fixada

12 MÉTODOS DE ESTUDO I Fixação 1ª etapa para o preparado finalidades: Evitar autólise destruição celular por enzimas Impedir atividade e proliferação bacteriana. Endurecer as cels resistam melhor as etapas seguintes. Aumentar a afinidade das cels pelo corante usados na óptica e aumentar o contraste na eletrônica.

13 MÉTODOS DE ESTUDO I Fixação 1ª etapa para o preparado: O formol ou aldeído glutárico (glutaraldeído) fixam as células combinam com os grupos aminoácidos das proteínas e estabilizam a mesma. Serão inclusas em parafina

14 MÉTODOS DE ESTUDO I Microtomia 2ª etapa para o preparado: O tecido destinado ao estudo - protegidos - incluídos em parafina ou resinas plásticas. Os tecido (cels) - cortados em fatias finas (1 a 6 µm) para a microscopia - micrótomo. Usam navalha e aço (parafina), vidro ou diamante (resinas) - colocar em lâminas e corar.

15 MÉTODOS DE ESTUDO I Micrótomo

16 MÉTODOS DE ESTUDO I Coloração 3ª etapa para o preparado: Organelas - transparentes e incolores dificulta o estudo. Coloração - tornam visíveis os componentes celulares Corantes são bases ou ácidos Corantes básicos o grupamento cromóforo (responsável pela cor) é o catiônico.

17 MÉTODOS DE ESTUDO I Coloração 3ª etapa para o preparado: Cromóforo básicos cromo (cor) e foro (conduz). Combinam com os grupamentos ácidos (aniônicos) das moléculas celulares. Moléculas ácidas (DNA e RNA)- são basófilas - afinidade pelos corantes básicos (ligam a estrutura basófila do tecido). EX: azul de toluidina- conj, azul de metileno- bact, hematoxilina -núcleo

18 MÉTODOS DE ESTUDO I Coloração 3ª etapa para o preparado: Corantes ácidos - cromóforo é aniônico combinam com os componentes celulares básicos. Moléculas básicas - acidófilas - afinidade pelo corante ácidos (ligam a componentes básicos das proteínas citoplasmática). EX: eosina- citop, orange G- citop, fucsina ácida-bac

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20 MÉTODOS DE ESTUDO I Microscópio Óptico

21 MÉTODOS DE ESTUDO I Microscópio Óptico Apresenta uma parte mecânica (serve de suporte) e uma óptica (3 sistemas de lentes condensador, objetiva e a ocular).

22 MÉTODOS DE ESTUDO I Microscópio Óptico Partes ópticas: Condensador - projeta luz sobre as cels examinadas - atravessa elas e penetra na objetiva. Objetiva projeta imagem aumentada no plano focal da ocular - também amplia. Imagem fornecida pela ocular percebida pela retina

23 MÉTODOS DE ESTUDO I Microscópio Óptico A ampliação total do microscópio aumento da objetiva (4x, 10x, 20x, 40x) X aumento da ocular. Resolução (detalhes celulares) da imagem depende da objetiva.

24 MÉTODOS DE ESTUDO I Microscópio eletrônico de transmissão -Grande poder de resolução (10 a X) - feixes de elétrons. -Os elétrons são produzidos através do aquecimento (sistema de vácuo) de filamento de tungstênio o cátodo emitem elétrons. Formam feixes passam pelos estágios e por ultimo projeta - tela fluorescente - formam uma imagem(2 D) visível ou filme fotográfico. A preparação celular 2 fixadores (glutaraldeído, ósmio, urânio, chumbo) - fixador e contraste.

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27 MÉTODOS DE ESTUDO II Continuando... Citoquímica O que compreende este método?

28 MÉTODOS DE ESTUDO II Citoquímica Técnicas de reações químicas diversas identificação e localização das moléculas que constituem as cels; Estuda a localização intracelular. Aplicado microscópio óptico e eletrônico

29 MÉTODOS DE ESTUDO II Citoquímica No óptico - produto da reação química é corado. No eletrônico produto da reação química deve dispersar elétrons (elétrons densidade- cora +). Reações seguem a lei de Lambert-Beer produzem nas cels. e tecidos intensidades da cores proporcionais à das subst. Aparelhos (histofotômetro ou cito) determina a intensidade da cor dosar a quantidade de subs.

30 MÉTODOS DE ESTUDO II Citoquímica Reação de Feulgem - técnica que identifica DNA: - Mergulha a lâmina em solução de ácido clorídrico; - Hidrólise do DNA - deixa livre o seu sitio ativo; - Reativo Schiff (solução de fucsina básica descorada) - combina com o sitio ativo livre; - Formam - complexo de cor vermelha; - Intensidade da cor - DNA - estudo quantitativo; Identificar RNA, proteínas, enzimas, etc - o mesmo processo.

31 MÉTODOS DE ESTUDO II Microscópio de fluorescência O que compreende este método?

32 MÉTODOS DE ESTUDO II Microscópio de fluorescência - Corantes fluorescentes: Combinam e identificam subst. não fluorescentes nas cels (alaranjado de acridina DNA e RNA).

33 MÉTODOS DE ESTUDO II Imunocitoquímica O que compreende este método?

34 MÉTODOS DE ESTUDO II Imunocitoquímica Usam anticorpos para identificar estruturas teciduais- antígenos. Identificação - reações específicas (interação anticorpo-antígeno) que confere cor aos compostos que se pretendem estudarpermitindo a sua visualização ao microscópio óptico ou eletrônico.

35 MÉTODOS DE ESTUDO II Imunocitoquímica Permite a localização intracelular de proteínas específicas(anticorpo)- reação antígeno anticorpo; Localização com precisão a molécula protéica e exclui todas as outras; Métodos imunológicos- utilizam anticorpos conjugado a um marcador (radioativo, visível ao óptico ou fluorescente e eletrônico).

36 Hepatocarcinoma

37 Antígeno Anticorpo Antígeno Anticorpo Marcador Marcador

38 Protozoários

39 Até a próxima aula