FUNDAÇÃO PRESIDENTE ANTÔNIO CARLOS - FUPAC

Transcrição

1 FUNDAÇÃO PRESIDENTE ANTÔNIO CARLOS - FUPAC FACULDADE PRESIDENTE ANTÔNIO CARLOS DE UBERLÂNDIA Biologia Celular Prof. Msc Ana Paula de Souza Paixão Biomedicina 1º P

2 O que significa o termo Biologia Celular e Molecular?

3 INTRODUÇÃO Biologia celular ou citologia Ramo da biologia (estudo dos seres vivos) que estuda as células - suas funções (secreção, digestão e armazena informação) e sua importância na complexidade dos seres vivos. É o estudo integrado da célula através de todo o artesanal técnico disponível.

4 INTRODUÇÃO Biologia Molecular É o estudo da Biologia em nível molecular, focando no estudo da estrutura e função do material genético.

5 INTRODUÇÃO Os conhecimentos celulares progridem junto com os métodos de investigação. Inicialmente microscópio óptico Descobrimento das cels e elaboração de teorias seres vivos são constituídos por células. Posteriormente técnicas citoquímicas Identificação e localização de moléculas celulares

6 INTRODUÇÃO Posteriormente microscópio eletrônico Grande poder de resolução observar estruturas celulares que não poderiam ser vistas ao óptico.

7 Confecção de cortes para estudo nos microscópios óptico e eletrônico Embora melhor estudar microscópicamente as cels vivas - há vantagens em obter um preparo permanente (lâmina). As cels ficam preservadas fixadas e coradas para melhor demonstração dos seus componentes.

8 Confecção de cortes para estudo nos microscópios óptico e eletrônico Preparado permanente ideal mostrar as cels com as mesmas características, mas nem sempre é possível artefatos Alterações produzidas nas células pelas técnicas empregadas.

9 Confecção de cortes para estudo nos microscópios óptico e eletrônico Os passos para a confecção: Fixação Inclusão Microtomia Coloração

10 Fixação 1ª etapa para o preparado finalidades: Evitar autólise destruição celular por enzimas Impedir atividade e proliferação bacteriana. Endurecer as cels resistam melhor as etapas seguintes. Aumentar a afinidade das cels pelo corante usados na óptica e aumentar o contraste na eletrônica.

11

12 Fixação 1ª etapa para o preparado: O formol ou aldeído glutárico (glutaraldeído) fixam as células combinam com os grupos aminoácidos das proteínas e estabilizam a mesma. Serão inclusas em parafina

13 Microtomia 2ª etapa para o preparado: O tecido destinado ao estudo - protegidos - incluídos em parafina ou resinas plásticas. Os tecido (cels) - cortados em fatias finas (1 a 6 µm) para a microscopia - micrótomo. Usam navalha e aço (parafina), vidro ou diamante (resinas) - colocar em lâminas e corar.

14 Micrótomo

15 Coloração 3ª etapa para o preparado: Organelas - transparentes e incolores dificulta o estudo. Coloração - tornam visíveis os componentes celulares Corantes são bases ou ácidos Corantes básicos o grupamento cromóforo (responsável pela cor) é o catiônico.

16 Coloração 3ª etapa para o preparado: Cromóforo básicos cromo (cor) e foro (conduz). Combinam com os grupamentos ácidos (aniônicos) das moléculas celulares. Moléculas ácidas (DNA e RNA)- são basófilas - afinidade pelos corantes básicos (ligam a estrutura basófila do tecido). EX: azul de toluidina- conj, azul de metileno- bact, hematoxilina -citop

17 Coloração 3ª etapa para o preparado: Corantes ácidos - cromóforo é aniônico combinam com os componentes celulares básicos. Moléculas básicas - acidófilas - afinidade pelo corante ácidos (ligam a componentes básicos das proteínas citoplasmática). EX: eosina- nucleo, orange G- citop, fucsina ácidabac

18 Microscópio óptico

19 Microscópio Óptico Apresenta uma parte mecânica (serve de suporte) e uma óptica (3 sistemas de lentes condensador, objetiva e a ocular).

20 Microscópio Óptico Partes ópticas: Condensador - projeta luz sobre as cels examinadas - atravessa elas e penetra na objetiva. Objetiva projeta imagem aumentada no plano focal da ocular - também amplia. Imagem fornecida pela ocular percebida pela retina

21 Microscópio Óptico A ampliação total do microscópio aumento da objetiva (4x, 10x, 20x, 40x) X aumento da ocular. Resolução (detalhes celulares) da imagem depende da objetiva. -Microscópio de polarização - utiliza um feixe luminoso polarizado (única direção) - estudar a organização as células (semelhante ao óptico). Possui 2 primas ou discos polarizados (filtros)

22 -Microscópio de Polarização Um é colocado no condensador funciona como polarizador. O outro é colocado na ocular (analisador). Polarizador ilumina as cels. com o feixe de luz polarizada. Analisador verifica o efeito das estruturas celulares sobre o feixe de luz polarizada.

23 -Microscópio Confocal As cels isoladas e tecidos vão apresentar espessuras maiores em relação ao óptico. O artifício do macro e micrométrico - focalização A movimentação do botão um plano da cel. entra em foco (nítida) e outro plano sai de foco (borrado). Iluminação - raios laser - varrem o corte iluminado - apenas 1 plano (usa-se composto fluorescente - processada no computador).

24 Microscópio eletrônico de transmissão -Grande poder de resolução (10 a X) - feixes de elétrons. -Os elétrons são produzidos através do aquecimento (sistema de vácuo) de filamento de tungstênio o cátodo emitem elétrons. Formam feixes passam pelos estágios e por ultimo projeta - tela fluorescente - formam uma imagem(2 D) visível ou filme fotográfico. A preparação celular 2 fixadores (glutaraldeído, ósmio, urânio, chumbo) - fixador e contraste.

25 Ânodo- eletrodo negativo (recebe elétrons) Cátodo- eletrodo positivo (emite elétrons)

26

27 - Microscópio de Varredura: A imagem produzida é tridimensional (3 D). Usado para o exame superficial de partículas virais e células. Aumento de a x

28

29 Até a próxima aula