MICROSCOPIA E O ESTUDO DA CÉLULA

Transcrição

1 Citologia e Histologia MICROSCOPIA E O ESTUDO DA CÉLULA PROFESSORA: Fernanda Guimarães guimaraes.biologia@gmail.com

2 NÍVEIS DE ORGANIZAÇÃO BIOLÓGICA

3 Estruturas microscópicas Invisíveis a olho nu Estruturas macroscópicas Visíveis a olho nu

4 MICROSCOPIA O olho humano só forma imagens de objetos maiores que 0,1mm Para observar objetos menores é necessário a utilização de aparelhos que garantam aumento da imagem

5 UM BREVE HISTÓRICO Hans e Zacharias Jansen (Século XVI) Inventores do primeiro microscópio Conjunto de lentes com capacidade de ampliar imagens

6 UM BREVE HISTÓRICO Leeuwenhoek (Século XVII) Considerado o Pai da Microbiologia Inventor do primeiro microscópio com finalidade científica

7 UM BREVE HISTÓRICO Robert Hooke (Século XVII) Primeiro microscópio composto

8 UM BREVE HISTÓRICO Robert Hooke (Século XVII) Observação de pedaços de cortiça Descoberta da célula Do latim cellula diminutivo de cella pequeno compartimento

9 UM BREVE HISTÓRICO Schleiden e Schwann (Século XIX) Teoria celular Todo organismo vivo é formado por células Célula Unidade fundamental da vida

10 BIOLOGIA ESTRUTURAL Limitações para o estudo da biologia estrutural Reduzidas dimensões celulares Ausência de contraste entre estruturas Grande espessura dos materias biológicos

11 BIOLOGIA ESTRUTURAL Soluções para o estudo da biologia estrutural Aparelhos ideiais microscópios Técnicas especiais para obtenção e processamento de materiais biológicos

12 MICROSCÓPIO Aparelho capaz de reproduzir para o olho humano imagens aumentadas de estruturas pequenas tais como as células

13 TIPOS DE MICROSCÓPIOS

14 MICROSCÓPIO DE LUZ Permite a vizualização da morfologia das células Requer coloração para facilitar a vizualização Obtenção de imagens coloridas

15 MICROSCÓPIO ELETRÔNICO Permite a vizualização da morfologia das organelas citoplasmáticas Requer contratação Obtenção de imagens em preto e branco

16 MICROSCÓPIO DE LUZ MICROSCÓPIO ELETRÔNICO

17 MICROSCÓPIO DE LUZ MICROSCÓPIO ELETRÔNICO

18 PREPARO DE MATERIAIS PARA ESTUDO DE MICROSCOPIA DE LUZ Esfregaço Decalque Esmagamento Lâminas permanentes

19 ESFREGAÇO Utilizado para materiais líquidos (exemplos: sangue e esperma) Espalha-se uma fina camada do material sobre a lâmina uniformemente

20 ESFREGAÇO

21 DECALQUE Comprimir a superfície de um material biológico sobre a lâmina As células superficiais ficarão aderidas à lâmina

22 ESMAGAMENTO Esmagar um pequeno pedaço de material biológico entre a lâmina e a lamínula Lamínula Material biológico Lâmina

23 LÂMINAS PERMANENTES São preparações duráveis para microscopia Requerem técnicas especiais para conservar e corar o material biológico a ser observado posteriormente

24 ETAPAS PARA OBTENÇÃO DE LÂMINAS PERMANETES 1. Obtenção do material biológico 2. Fixação 3. Desidratação 4. Inclusão 5. Microtomia 6. Coloração 7. Montagem

25 1. OBTENÇÃO DO MATERIAL BIOLÓGICO Escolha do material Extração do material do organismo Lavagem do material em solução fisiológica para retirada de sangue e fluidos

26 2. FIXAÇÃO Utilização de solução fixadora para estabilizar as estruturas celulares Garante que o tecido fique o mais próximo possível da sua condição in vivo Exemplo: Formol e etanol

27 3. DESIDRATAÇÃO Utilização de séries alcoólicas para retirar toda a água do material Necessário pois a etapa seguinte requer ausência de água

28 4. INCLUSÃO Todo local que possuía água será preenchido por parafina ou resina Garante que o material fique resistente aos cortes que sofrerá na próxima etapa

29 5. MICROTOMIA O material será cortado em fatias finas e colocados sobre as lâminas Utiliza-se o micrótomo aparelho que garante cortes de espessura definidas

30 MICRÓTOMO

31 6. COLORAÇÃO Utiliza-se corantes específicos para cada tipo de material O material será corado para facilitar a visualização ao microscópio

32 7. MONTAGEM Os corte, já corados, serão cobertos por lamínulas e colados com resina A lâmina permanente está pronta

33 ETAPAS DE MONTAGEM DE LÂMINAS PERMANETES

34 INTERPRETAÇÃO DE CORTES Imagem ao microscópio é apenas uma seção do material biológico Imagem é bidimensional mas devemos ter a idéia de algo tridimensional

35 INTERPRETAÇÃO DE CORTES Corte transversal Corte no menor eixo do objeto

36 INTERPRETAÇÃO DE CORTES Corte Longitudinal Corte no maior eixo do objeto A B C

37 INTERPRETAÇÃO DE CORTES Tomemos como exemplo uma estrutura semelhante a um ovo, com clara e gema

38 Alguns tipos de cortes Corte 1 Corte 2 Corte 3

39 Alguns tipos de cortes 4 5 Corte 4 Corte 5

40 INTERPRETAÇÃO DE CORTES

41 MICROSCOPIO DE LUZ 1 = ocular 2 = objetivas e revólver 3 = platina 4 = charriot 5 = macrométrico 6 = micrométrico 7 = diafragma no condensador 8 = condensador 9 = botão do condensador 10 = dois parafusos do condensador 11 = fonte de luz 12 = controle de iluminação 13 = diafragma de campo 14 = dois parafusos de ajuste da luz 15 = focalizadora da lâmpada

42

43 LENTES DO MICROSCÓPIO DE LUZ Ocular Objetivas Material

44 FORMAÇÃO DA IMAGEM NA MICROSCOPIA Objeto na lâmina Imagem formada pela objetiva (real, maior e invertida) Imagem final do objeto (virtual, ampliada e invertida)

45 AUMENTO DO MICROSCÓPIO Combinação das lentes oculares e objetivas Exemplo Ocular 8x Objetiva 10x x = Aumento total 80x

46 PODER DE RESOLUÇÃO MICROSCÓPIO Esta relacionada ao comprimento de onda da luz e à abertura numérica da objetiva Limite de resolução: Menor distância que deve existir entre dois pontos para que eles apareçam individualizados

47 LIMITES DE RESOLUÇÃO 1mm 1000µm Microscópio eletrônico Microscópio de luz Olho humano 0,0003µm 0,25µm 100µm

48 PROFUNDIDADE DE CAMPO É a distância compreendida entre as regiões imediatamente acima e abaixo do plano que está em foco As objetivas de menor aumento garantem uma maior profundidade de campo

49 MICROSCOPIA X CÉLULA A microscopia de luz garante visualização da morfologia das células Microscopia eletrônica garante visualização da morfologia das organelas citoplasmáticas

50 CÉLULA PROCARIONTE X EUCARIONTE CÉLULA PROCARIONTE CÉLULA EUCARIONTE Não possui envoltório nuclear Não possui organelas membranosas Possui nuclear Possui membranosas envoltório organelas

51 CÉLULA PROCARIONTE Citoplasma Nucleóide Ribossomos Parede celular Membrana faculty.abe.ufl.edu

52 CÉLULA PROCARIONTE faculty.abe.ufl.edu faculty.abe.ufl.edu

53 FORMAÇÃO DAS ENDOMEMBRANAS

54 TEORIA SIMBIÔNTICA Teoria de origem da mitocôndria Mitocôndria era uma bactéria que foi fagocitada por uma célula eucariota Mitocôndria com membrana dupla

55 CÉLULA EUCARIONTE enfenix.webcindario.comif

56 Para que o mal triumfe, basta que os bons não façam nada. Edmund Burke