Disciplina Biologia Celular

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1 Disciplina Biologia Celular Profª Cristina Lacerda Soares Petrarolha Silva Curso de Biotecnologia FISMA / FEA Aula 2: Tecnologia da Biologia Celular Parte I Bio Cel Profª Cristina 1

2 Tamanho das céls e seus componentes Unidades de medidas utilizadas 2

3 Ao natural 1- Confecção de cortes para microscopia Preservadas Fixação: Evita Autólise e Proliferação bactérias Propicia endurecimento celular Aumenta afinidade a corantes e contrastes FORMOL e GLUTARALDEÍDO TETRÓXIDO DE ÓSMIO e GLUTARALDEÍDO 3

4 Microtomia Inclusão Corte espessura 1 a 6 μm Corantes Organelas transparentes Corantes Básicos : grupamento cromóforo catiônico (+ carga positiva) Afinidade por ácidos (aniônicos carga negativa) DNA e RNA são basófilas Ex: azul de toluidina, azul de metileno, hematoxilina 4

5 Corantes Ácidos : grupamento cromóforo aniônico (: carga negativa) Afinidade por bases (catiônicos: + carga positiva) Proteínas são acidófilas Ex: Eosina, Fucsina ácida e Orange G 5

6 2- Microscópio Óptico ou de Luz s 6

7 Sinônimos para o microscópio óptico: Microscópio Comum Microscópio de Luz Microscópio Fotónico Microscópio de Campo Claro 7

8 Porção mecânica Porção óptica Sistema óptico de observação Sistema óptico de iluminação O Princípio de funcionamento: Condensador: projeta cone luz material em observação Cone de luz atravessa o objeto e atinge a objetiva Objetiva: projeta imagem aumentada no plano focal da ocular Ocular novamente aumenta o objeto 8

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10 Para uma leitura mais detalhada de como ocorre a formação da imagem no olho, consulte: MARQUES, G. C., UETA, N. Ótica da visão. Disponível em: 10

11 Ampliação do microscópio = aumento da objetiva X aumento da ocular Poder de resolução: capacidade de separar detalhes É medido pelo Limite de resolução Menor distância que deve existir entre dois pontos, para que eles apareçam individualizados O que determina a riqueza dos detalhes: Poder de resolução Compr. onda objetiva ou Ampliação?????? 11

12 Outros Microscópios Ópticos Microscópio de Polarização Microscópio de Contraste de Fase Microscópio Confocal Microscópio de Fluorescência 12

13 Polarização Foco de luz polarizado Estruturas e substâncias celulares dividem o foco de luz em 2 (planos perpendiculares) = estruturas anisotrópica e são birrefrinfgentes - apresentam índice de refração diferentes conforme a incidência da luz Estruturas isotrópicas não modificam o plano de polarização da luz Prismas: polarizador (condensador) analisador (objetiva) Em planos perpendiculares permitem a visualização apenas das estruturas birrefringentes 13

14 reflexão refração Contraste de Fase Transforma as diferenças de fase dos raios luminosos em diferenças de intensidade luminosa. Fase escura (positiva) e fase clara (negativa) Estudo de células vivas 14

15 Comparações A) Microscópio óptico comum, B) Contraste de fase POSITIVO, C) Microscopia interferencial segundo Normasky, D) Contraste de fase NEGATIVO Contraste de fase + Luz polarizada Confocal Células isoladas e cortes de tecidos espessura superior ao plano de foco do microscópio óptico Na prática- com o movimento do micromético um plano entra em foco enquanto os demais saem de foco = PERDA DE NITIDEZ No confocal: varredura por feixe de laser, ponto a ponto = CORTE ÓPTICO Resultado: apenas aquela fatia fará parte da formação da imagem = maior nitidez 15

16 Confocal 16

17 Fluorescência Transmissão Varredura 2-Microscópio Eletrônico Melhor resolução Células não vivas Preparativos Eletrodensidade 17

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20 Imagens, esquemas e fotos retirados da internet, através do site: Para estudar: Junqueira, L.C., Carneiro, J. Biologia Celular e Molecular. Guanabara Koogan. 8ª ed Capítulo 2, p