Laboratório de Controlo de Qualidade

Transcrição

1 Laboratório de Controlo de Qualidade Fátima, 21 de Setembro de 2017 Isabel Lopes

2 METODOLOGIAS ANALÍTICAS EM ALIMENTAÇÃO ANIMAL

3 Análises e Controlo de Qualidade Avaliar especificações nutricionais de matérias primas Cumprir aspetos legislativos (Ex. PAT s) Detetar atempadamente eventuais contaminações (ex. no âmbito das substâncias indesejáveis) Realizam-se análises para: Controlar pontos críticos e garantir a segurança alimentar Garantir a especificação nutricional do produto acabado Otimizar a produção (custo/benefício)

4 Análises e Controlo de Qualidade SEGURANÇA ALIMENTAR Reg.(CE) nº 183/2005 de 12 Jan 2005, que estabelece os requisitos de higiene dos alimentos para animais Diretiva 2002/32 de 7 maio de 2002, relativa às substâncias indesejáveis em alimentos para animais Sistemas certificadores de segurança alimentar (NP EN ISO 22000; FSSC 22000; FAMI QS; GMP+; HACCP; )

5 PCQ-Planos de Controlo de Qualidade Grãos de Cereais Aveia; Cevada; Milho; Trigo; Triticale Subprod. Cereais Farinha de Bolacha H P F G C A Aç Melaços FN D FAD Proteínas Ori. Vegetal B. Soja(1); B. Colza; B. Palmiste (1): Atividade Ureásica; Solub.KOH; Lisina H-Humidade; P-Proteína; F-Fibra; G-Gordura; C-Cinza; A-Amido; Aç-Açucares; FND-Fibra Neutro Detergente; FAD-Fibra Ácido Detergente Minerais H C Ca Na P Carbonato de Cálcio Bicarbonato de Sódio Fosfato Bicálcico Sal Forragens H P F C A Digest FND G FAD ADL Sil. Milho Sil. Azevém Sil. Erva Sil. Luzerna Mat. Fibrosas H P F G C Aç FND FAD Luzerna Casca de Soja Alfarroba B. Azeitona Polpa Citrinos Polpa Beterraba Proteínas Animais Farinha de Pescado (1) Produtos Lácteos (2) Soro Doce Soro Reengordurado Soro Deslactosado Gorduras (3) Banhas Óleos Vegetais Gorduras Compostas (1): Lisina, cloretos, cálcio, fósforo (2): lactose, ph, cloretos; (3): impurezas, ac oleica, peróxidos Planos de Rotina (Matérias primas, produto acabado, mercadorias, ) (avaliação nutricional; pesquisa de substâncias indesejáveis; parâmetros de obrigatoriedade legal; etc.) Análises Extra-Plano (problemas fabrico; problemas nas explorações, etc.)

6 REG. (CE) N. 401/ Estabelece os métodos de amostragem e de análise para o controlo oficial dos teores de micotoxinas nos géneros alimentícios Amostragem Amostra: Porção Representativa do todo. Um saco?. Um camião?. Um armazém? Em geral, o laboratório tem a função de analisar/avaliar resultados, não sendo responsável pela amostragem. A amostragem é um procedimento que requer métodos e equipamentos adequados para a tarefa. Qualquer análise das características de um lote e qualquer interpretação dos resultados será inútil se a amostra não for representativa do lote de onde é retirada. A amostragem é um procedimento que requer grande cuidado. É fortemente recomendado que esta tarefa seja desempenhada por pessoal treinado, utilizando o equipamento adequado. NP EN ISO 24333: Cereais e produtos derivados- amostragem Técnicas Adequadas de Amostragem Qualidade do resultado analítico= f (qualidade da amostragem; qualidade dos dados analíticos) NP ISO 6497: 2011 Alimentos para animais amostragem UE N.º 691/2013 Métodos de amostragem e análise para o controlo oficial de alimentos para animais.

7 Amostragem (Amostragem para obtenção da massa mínima de amostra para laboratório de Grãos, exemplo de distribuição dos pontos de amostragem em 25 pontos para lotes ou sub-lotes de 500 < m toneladas); acc. NP EN ISO 24333:2009 Garantir tanto quanto possível que o parâmetro que pretendemos medir está uniformemente distribuído (os alimentos são heterogéneos e devemos assumir que o são, mas uma amostra representativa é o espelho do sistema que pretendemos conhecer) O erro da amostragem deve pesar menos do que o erro decorrente de não se ter procedido a uma colheita representativa (a não ser que pretendamos uma amostra de conveniência).

8 Receção no laboratório Amostra representativa Há que assegurar que não vão ocorrer alterações na composição entre a amostragem e a análise NO LABORATÓRIO: Receção da amostra Identificação Motivo/Objetivo da análise Encaminhamento correto Moer S? N? Separar S? N? Frio? S? N? Microbiologia S? N? NIR? Química Clássica? S? N? An. Externa? S? N?

9 A importância dos laboratórios Aplicar o método adequado Coerente com o objetivo procurado (ex.: GB vs GA) De preferência, métodos validados (gama de aplicação,...) Aplicar sistemas que assegurem a qualidade dos resultados (procedimentos/normas reconhecidas; programas de avaliação interlaboratoriais; uso de materiais de referência) acreditação NP EN ISO/IEC Ensaios ASFAC; Ensaios FAPAS; Ensaios LGC

10 ENSAIOS INTERLABORATORIAIS A importância dos laboratórios

11 A importância dos laboratórios NP ISO 5984:2014 Determinação da Cinza Bruta NP ISO 6492:2014 Determinação da Gordura Bruta NP EN ISO 16472:2013 Determinação do teor de fibra neutro-detergente tratada com amilase (andf) NP EN ISO 6497:2011 Alimentos para animais. Amostragem NP EN ISO 15914:2010 Determinação enzimática do teor total de amido NP EN ISO :2009 Determinação do teor de azoto e cálculo do teor de proteína bruta. Parte 2: Método mineralização em bloco e destilação pelo vapor NP EN ISO Determinação do azoto total, por combustão, segundo o método de Dumas e cálculo do teor de proteína bruta. Parte 1:Sementes de oleaginosas e alimentos 1:2009 para animais NP EN ISO 6865:2009 Determinação do teor de celulose bruta. Método da filtração intermédia NP EN ISO :2007 Determinação do teor de azoto e cálculo do teor de proteína bruta. Parte 1: Método de Kjeldahl NP EN ISO 6869:2007 Determinação dos teores de cálcio, cobre, ferro, magnésio, manganês, potássio, sódio e zinco. Método por espectrometria de abosrção atómica NP 874:2000 NP 875:1994 NP 2972:1994 NP 2971:1992 NP 4040:1990 NP 3997:1989 NP2026:1987 NP 2027:1987 NP 1785:1986 Determinação do fósforo total. Método espectrofotométrico Determinação do teor de humidade Determinação do teor de cloretos solúveis na água. Técnica de Charpentier-Volhard Determinação do teor em cinza insolúvel no ácido clorídrico Determinação da humidade nas gorduras e óleos animais e vegetais Determinação da actividade ureásica dos produtos derivados da soja Determinação do teor de amido. Método polarimétrico Determinação do teor de lactose. Método de Luff-Schroorl Determinação do teor de açucares. Método de Luff-Schroorl NP 2028:1983 Determinação do teor de proteína digestível NP EN ISO 24333:2016 Cereais e Produtos-Amostragem NORMAS/PROCEDIMENTOS

12 EXATIDÃO,PRECISÃO,INCERTEZA O verdadeiro valor não se pode conhecer com toda a certeza, mas pode conhecer-se com uma determinada incerteza «INCERTEZA: Um parâmetro associado ao resultado de uma medição, que caracteriza a dispersão dos valores que podem com razoabilidade ser atribuídos ao mensurando». Pode ser um desvio padrão (ou um múltiplo) ou a largura de um intervalo de confiança. (EURACHEM) Quando se realizam várias medições e não se conhece o valor de referência apenas se podem calcular as incertezas relativas. Medidas mais afastadas uma das outras: Maior incerteza Medidas mais próximas uma das outras: Menor incerteza Erro=Ivalor medido valor verdadeiroi

13 PRECISÃO O grau de concordância entre ensaios independentes obtidos sob condições estipuladas Medidas de precisão extremas: A reprodutibilidade (R) que proporciona uma maior variabilidade (interlaboratorial). A diferença absoluta entre dois ensaios independentes, obtidos utilizando o mesmo método em amostras idênticas, em laboratórios diferentes com diferentes operadores usando diferentes equipamentos, não deverá exceder em mais do que 5% dos casos o R. A repetibilidade (r) que proporciona uma menor variabilidade (ensaios repetidos sem variar fatores. Intralaboratorial). A diferença absoluta de dois ensaios independentes, obtidos utilizando o mesmo método de análise em amostras idênticas no mesmo laboratório, pelo mesmo operador, usando o mesmo equipamento num curto intervalo de tempo, não deve exceder em mais de 5% dos casos o limite de repetibilidade r. Em geral, a variação intralaboratorial é de ½ a 2/3 da variação interlaboratorial. (retirado de NP ISO 6865:2009)

14 Critérios de Aceitação de Resultados Para resultados válidos: 1. Equipa com formação e experiência Parâmetro Repetibilidade (r) Reprodutibilidade (R) Proteína Bruta (PB) (Kjeldahlx6.25) PB<20% - 0.2% em valor absoluto 20<PB<40% - 1% em valor relativo PB>40% - 0.4% em valor absoluto PB<20% - 0.3% em valor absoluto 20<PB<40% - 1.5% em valor relativo PB>40% - 0.6% em valor absoluto 2. Técnicas Validadas/equipamentos adequados - Manutenção - Calibração - Ensaios interlaboratoriais - Amostra de referência - Adequação de procedimentos experimentais 3. Correta interpretação de resultados Gordura Bruta (GB) Fibra Bruta (FB) Cinza Bruta (CB) GB<5% - 0.2% em valor absoluto 5<GB<10% - 4% em valor relativo sobre o valor mais alto GB>10% - 0.4% em valor absoluto FB<10% - 0.3% em valor absoluto FB 10% - 3% em valor relativo sobre o valor mais alto CB<3% - 0.3% em valor absoluto 3<GB<5% - 10% em valor médio 5<GB<20% - 0.5% em valor absoluto 20<GB<45% - 2.5% em valor médio GB>40% - 1% em valor absoluto GB<10% - 0.6% em valor absoluto GB>10% - 1% em valor absoluto FB<10% - 0.8% em valor absoluto FB 10% - 8% em valor relativo sobre o valor mais alto CB<20% - 0.5% em valor absoluto Exemplo de critérios de aceitação de resultados obtidos em duplicado.

15 Análises de componentes maioritários. Fracionamento Hum Cinza Prot Gord Fibra 7,0 3,4 16,0 44,6 28,8 A soma dos componentes só será 100% quando um deles se determine por diferença. Noutros casos, determinam-se analiticamente todas as frações, e a soma aproxima-se a 100%. = 99,8% Humidade Alimento Matéria Seca Matéria Orgânica Cinza Bruta (matérias minerais) Proteína Bruta Gordura Bruta Fibra Bruta Extrativos não azotados (extrato etéreo) Esquema de Weende

16 Análises de componentes maioritários. Fracionamento Carbohidratos Carbohidratos Não Fibrosos Fibrosos NDF ADF Açúcar Amido Hemicelulose Celulose Lenhina

17 Técnicas Analíticas CLÁSSICAS INSTRUMENTAIS ALTERNATIVAS. Humidade. Gordura. Fibra. Acidez oleica. Índice de peróxidos Téc. gravimetria volumetria Fósforo Metais Espectrofotometria (Abs. Atómica, UV/VIS) não destrutivas NIR (Near Infrared Refletance )

18 Humidade Metodologia (existem vários métodos): Habitualmente, secagem em estuda /16h (maior parte das amostras), 104 /3h, 125 /4h, 135 /2-3h (grãos); ISO 6496:1999 Determinação da humidade e materiais voláteis em alimentos para animais REG. CE 827/2000; Anexo IV Determinação da qualidade dos cereais ISO 665:2000-Determinação da humidade e matérias voláteis em oleaginosas NP 4040:1990-Determinação da humidade nas gorduras e óleos animais e vegetais Métodos alternativos à secagem em estufa: Balança de Infravermelhos Medidores por condutividade elétrica

19 Humidade e matérias voláteis Precauções indicadas no método oficial: - Cereais e farinhas à base de cereais, a secagem é feita a 130ºC. É necessário uma présecagem em grãos e alimentos com humidade muito alta (ex.: milhos de campanha) - Alimentos, óleos e gorduras: 103ºC. TGA - Alimentos com mais de 4% de sacarose ou lactose, alimentos com mais de 25% de minerais que contenham água de cristalização: em estufa a 80-85ºC (sob vácuo). Outras considerações a ter em conta: - Problema da decomposição de ureia. Não deve ultrapassar 104ºC/3h para os alimentos ricos em ureia. - Uma secagem em estufa, em muitos casos, pode ser um problema devido: i. Perda de água de cristalização por fosfatos (a partir dos 40ºC, lentamente, e a 100ºC é perdida muito rapidamente). ii. O bicarbonato de sódio começa a decompor-se a partir de 60ºC. - Determinam-se também as substâncias voláteis presentes (ex.: ácidos orgânicos voláteis, amónia, p. ej.) - Esta análise deve efetuar-se imediatamente depois de abrir as embalagens que contém as amostras; - A reação de Maillard liberta água durante a desidratação e é acelerada a elevadas temperaturas

20 Humidade e atividade da água (a w ). A Atividade da Água (a w ) visa unicamente medir a água que se encontra disponível para ser incorporada nos processos químicos e fisiológicos, que são vitais para o desenvolvimento da flora microbiana, enquanto que o teor da água / humidade de um substrato contabiliza tanto a água livre como a água que se encontra fortemente ligada ao substrato.. É importante saber a a w pois os fungos são sensíveis aos seus níveis o que nos permite definir intervalos para o desenvolvimento dos diferentes grupos em função da temperatura..para que não ocorram contaminações fúngicas severas, a w 0,65, o que corresponde a uma humidade (água livre) de sensivelmente 13,5% nos grãos de cereais (ex. milho, trigo, cevada), a 11,5% no grão de soja e a 8,5% no amendoim e girassol. Aparelho que permite determinar a atividade da água, modelo de bancada.

21 Proteína Bruta. Entende-se por Proteína Bruta o teor de Azoto x fator (dependente do produto). O fator internacional de conversão baseia-se na composição média dos aminoácidos presentes nas proteínas dos alimentos. Método Dumas [NP EN ISO 16634:2009]: Amostra (ca.0,2g) Combustão ( ºC) Remoção de água Redução de NO x a N 2 Eliminação de excesso de O 2 c/ cobre de SO 2 /SO 3, halogéneos e CO 2 Remoção de humidade (c/ anidrona) Deteção e Quantificação de N numa célula termoconductimetrica Proteína = N x Fator multiplicativo convencionado (ex.: 6,25* p/ a maioria dos casos; 5,70 para grãos de trigo; 6,38 para leite e produtos lácteos). *6,25=100/16,0(% N existente na proteína)

22 Proteína Bruta Método Kjeldahl [ISO :2009]: Comparação do Mét. Dumas vs Mét Kjeldahl: Comparação de resultados entre o método de Dumas e o método de Kjeldahl. Esquema referente ao método de Kjeldahl. NO 3 -; NH 4 + são tb convertidos N orgânico total (proteico e não proteico*) *-(ureia/clorofila/trimetilaminas/vit.b12 )

23 Gordura Bruta. Entende-se por Gordura Bruta o teor das substâncias que se se solubilizam em éter de petróleo e se conseguem medir por um processo de destilação, seguido de secagem e pesagem do extrato obtido. [NP ISO 6492:2014] G A (sem hidrólise ácida) - Cereais (milho, trigo, cevada, etc.) - Alguns bagaços G B (c/ hidrólise prévia em meio ácido, HCl 3N, a quente) - Matérias primas origem animal, incluindo produtos lácteos - Glúten; leveduras; proteínas de soja e de batata, alimentos tratados termicamente, extrudidos. - Alimentos compostos em que pelo menos 20% de gordura venha da maioria dos produtos referidos anteriormente. Montagem automática de 6 posições extração com o principio de Soxhlet. A hidrólise ácida gera, maioritariamente, resultados superiores de gordura, especialmente em alimentos sujeitos a tratamento térmico ou de origem animal.

24 Gordura Bruta Gordura A vs Gordura B, dados Eurocereal

25 Gordura Bruta Ácidos gordos livres 97-99% Óleo/Gordura Lípidos Humidade Impurezas Ác.gordos Contêm Unidades básicas dos lípidos Simples Acilgliceróis. Monoacilgliceróis.Diacilgliceróis.Triacilglieróis Cêras Saponificáveis Complexos Fosfolípidos Glucolípidos Esfingolípidos Aminolípidos Insaponificáveis Não contêm ácidos gordos Glicerol livre Esteróides (esterois; hormonas) Terpenos (pigmentos, vitaminas, extratos veg.) Eicosanóides

26 Oxidação & Rancificação Rancificação Hidrolítica : a gordura hidrolisa-se formando mono-, diacilglicérideos, ácidos gordos livres e glicerol.. Através de um catalisador em meio aquoso.. Ou através da ação de enzimas hidrolíticas (lípases, lipoxidases e lipoxigenases) produzidas por microrganismos. Peroxidação lipídica oxidativa do ranço: processo completo de oxidação mediante a formação de radicais livres. É necessário um fator que inicie a reação em cadeia (calor, metais, oxidantes, etc.) Métodos analíticos baseados em:. Aumento da acidez. Os ácidos fórmicos e propiónicos são solúveis em água, éter, álcool.. Aumento da fase inicial e intermédia dos peróxidos.. Formação de compostos polares (degradação).. Formação de aldeídos em fases terminais da oxidação. t tempo

27 Índice de Acidez. Entende-se por Acidez Oleica - [NP 903:1987], a percentagem de ácidos gordos livres de uma gordura ou óleo expressa em % ácido oleico.. Entende-se por Índice de Acidez, a quantidade em base (KOH ou NaOH) necessários para neutralizar os ácidos gordos leves presentes em 1g de gordura, (mgkoh/g). RELAÇÃO: índice de acidez= % acidez oleica x 1,99 Amostra Diluição em mistura alcoólica 50% (álcool etílico + éter etílico) Titulação em NaOH 0,1N ou KOH 0,1N na presença da solução alcoólica de fenolftaleína Cálculo da % acidez (em ácido oleico) = Τ 2,82 Vgastos m Determinação da acidez por titulação ácido-base.

28 Índice de Peróxidos. Entende-se por Índice de Peróxidos (IP) a quantidade de oxigénio ativo, expresso em miliequivalentes contido em 1 kg de gordura ou óleo (meqo2/kg) - [NP 904:1987] tiossulfato de sódio Amostra Dissolução c/ Clorofórmio + Ác. Acético Junção de Iodeto de Potássio (KI) Cálculo IP= Τ 10 (Vb V1) m V b - valor do titulante usado no ensaio em branco amostra + mistura diluente + KI + indicador Titula-se c/ Tiossulfato de Sódio (V1) (Na2S2O3) na presença do amido como indicador IP<10 meq O2/kg acc. FEDNA Titulação Iodométrica

29 Amido. Entende-se por Amido, o polissacarídeo constituído principalmente de amilose (uni. glicose alfa 1,4 amilose) e amilopectina (glicose ligada por pontes glicosidicas alfa 1,4 e 1,6 ). A amilopectina, menos hidrossolúvel que a amilose, é o principal constituinte dos polissacarídeos. Polarimetria [NP 2026:1987] : Amostra B m1 (g) Amostra A m2 (g) Insolubilização do Amido Digestão do amido e açucares c/ HCl a quente Açucares Açucares + amido Polarímetro usado para a quantificação do amido. Leitura da rotatividade ótica uma substância opticamente ativa roda o plano de polarização da luz Leitura da Amostra A (αa) e Amostra B (αb) α D 20 =o valor da rotatividade específica do amido puro medido a 589,3 nm Ex.: 184,6 amido de milho; 182,7 amido de trigo; 181, 5 amido de cevada Amido (%)= 2000 αd 20 + [ 2,5α A m1-5α B m2 ]

30 Amido Método Enzimático [REG ;REG 2017/68] : Método enzimático deve de ser usado especialmente nestes casos: Prod. derivados de beterraba Polpa citrinos Sementes linho; bagaço-linho (obtido por extração ou por pressão) Polpa de batata Colza; bagaço-colza; bagaço-girassol Produtos ricos em inulina Leveduras desidratadas Prod. Soja Hidrólise enzimática (especifica, α-amílase e amiloglucosidase) Amido Glucose Cromatografia Líquida (HPLC) ou Espectrofotometria (UV/V) Dados Eurocereal/ASFAC 2016/2017 A glucose libertada após a degradação enzimática é doseada usando o método de glucose-oxidase. A intensidade da coloração, medida a 505 nm, é proporcional à quantidade de glucose presente na amostra.

31 Fibra Bruta Aplicação: Alimentos p/ animais c/ fibra bruta >1%. Entende-se por Fibra Bruta o teor de carbohidratos resistentes ao tratamento sucessivo com ácidos (H 2 SO 4 - retira amido, açucares, pectina e hemic. ) e bases diluídos (KOH-retira proteínas, pectina, hemic. e parte lenhina) [NP EN ISO 6865:2009] Tratamentos prévios para: Amostras c/ >10% Gordura Amostras c/ >5% Carbonatos Amostra Pesagem do Resíduo (P2) Ataque ácido (H 2 SO 4 0,26N fervura, 30min) Incineração (550º) Ataque básico (KOH 0,23N fervura, 30min) Secagem e pesagem (P1) Quimicamente a fibra é um agregado de compostos e não uma entidade química. Cálculo da Fibra % = (P1 P2) Τ m x 100% Equipamentos semi-automáticos para determinação da fibra bruta.

32 Outras Fibras: FND, FAD, ADL Metodologia de Weende e van Soest Analise proximal (Weende) Proteína bruta Extrato etéreo Componente Químico Proteína N não proteico lípidos Pigmentos Análise de van Soest Solúveis em detergente neutro FND, Fibra Neutro-Detergente [ NP EN ISO 16472:2013 ] FAD, Fibra Ácido-Detergente [ NP EN ISO 13906:2008 ] Extratos livres de N Fibra bruta Açucares Ácidos orgânicos Pectinas Hemicelulose Lenhina solúvel em sol. alcalinas Lenhina insolúvel em sol. alcalina N ligado à fibra celulose Lenhina FAD FND ADL, Lenhina Ácido-Detergente Cinza bruta Minerais insolúveis em detergente Minerais solúveis em detergente [ NP EN ISO 13906:2008 ]

33 FND, FAD, ADL Metodologia de Weende e van Soest Metodologia de Van Soest Solução Neutro Detergente (lauril (ou dodecil)) sulfato de sódio (Desengorduramento prévio; tratamento em α- amílase Termoestável) P1 A solução detergente solubiliza as proteínas, sendo que o sulfato de sódio, eventualmente utilizado, ajuda também a remover alguma matéria azotada. Solução ácido - Detergente A solução detergente remove os hidratos de carbono ácido-lábeis, proteínas não complexadas em produtos de Maillard (danificadas pelo calor) e gorduras P2 FND - Hemicelulose -Celulose -Lenhina -Cutina -Minerais Insolúveis -N Ligado a fibras -Celulose -Lenhina -Cutina -Minerais Insolúveis -N Ligado a fibras P3 72% 12M -Lenhina -Cutina -Minerais 550º Resíduo Mineral (P1 P4) FND = Τ m x 100% (P2 P4) FAD = Τ m x 100% (P3 P4) ADL = Τ m x 100% P4

34 Cinza Bruta. Cinza Bruta: resíduo remanescente após incineração a 550ºC, onde se encontram os compostos inorgânicos (macrominerais, microminerais, oligoelementos) - [ISO 5984:2014] m A m % Cinza Bruta = resíduo Τ ma 100 Resíduo (Teor de Cinza) Mufla, 550 C Incineração até estabilização de peso Método Termogravimétrico para a determinação da humidade e cinza bruta (método sequencial).

35 Cinza Bruta Cuidados a ter em conta - [ISO 5984:2014] : 1. Os cloretos podem volatilizar-se à temperatura do forno ( C). 2. Os fosfatos a 325 C formam pirofosfato com perda de peso. E alguns reagem com carbonatos 3. Os bicarbonatos decompõem-se e formam carbonatos. O carbonato de sódio até aos 700 C permanece inalterado. 4. Os silicatos presentes podem esconder ou adsorver algumas frações de elementos. Pode ser uma fonte de erro se se procura analisar determinados elementos a partir das cinzas. Cinza insolúvel em Ácido Clorídrico [ ISO 2971:1992 ] A cinza insolúvel em ácido clorídrico é determinada gravimetricamente; o resíduo resultante da determinação da cinza bruta é digerido em ácido clorídrico fervente. A solução é filtrada e o resíduo é seco e incinerado sendo o resíduo remanescente valorizado como cinza insolúvel (útil, por exemplo, na verificação da presença de terras em algumas matérias primas).

36 Espectrofotómetro de absorção atómica. Metais (Ca, Cu, Fe, Mg, K, Na, etc) m 1 Incineração matéria mineral Solubilização em meio ácido Cu Zn Ca K Fe Na Mg Mn - Método Gravimetria - Método Espectrofotometria UV/VIS - Método ICP (Cromatografia Indução Plasma) - Absorção Atómica (grafite ou chama) [NP EN ISO 6869:2007]

37 O Mn como indicador de homogeneidade Os testes de homogeneidade destinam-se a verificar a correta distribuição das matérias primas e dos aditivos numa mistura. A sua realização é obrigatória para todos os fabricantes de aditivos, pré-misturas e alimentos compostos, registados ou aprovados ao abrigo do REG.(CE) 183/2005. O manganês (Mn) é um oligoelemento muito usado para esta avaliação, analisando-se num conjunto de amostras representativas da mistura (em geral, 9 a 20 amostras). Trata-se de um método indireto (baseado na concentração); considera-se uma distribuição normal; a homogeneidade é expressa em função do coeficiente de correlação e assume-se mistura correta com CV<10%. A análise do Mn pode fazer-se por absorção atómica (chama), indução de plasma ou absorção molecular. Teor Mn (mg/kg) Amostras Média (mg/kg) 83.0 Desvio-Padrão (mg/kg) 5.9 Coef.de Variação,CV(%) 7.1 Mistura homogénea 7.1 de acc. com critério

38 Teor de Cloretos. Teor de Cloretos: é determinado com base na reação de precipitação do ião Cl com o nitrato de prata. [NP 2972:1994] Método com eléctrodos (Chloride Analyser M926). Método por titulação (técnica de Charpentier-Volhard).

39 Fósforo m 1 Cinzas Incineração Solubilização em HCl P Espectrofotometria de absorção molecular (UV/VIS) - [NP 874:2000] (Reagente vanadomolíbdico + P= Complexo amarelo) leitura a 430 nm Lei de Lambert- Beer: A=αlc A: absorvância l é a distância que a luz atravessa c é a concentração de substância absorvente no meio α é a absortividade molar da substância Conc vs ABS 0 0,2 0,4 0,6 0,8 Espetrofotómetro UV/VIS, análise do Fósforo (P).

40 Açucares Método de Luff-Schoorl Lactose Esquema reacional da análise de açucares pelo método de Luff Schoorl.

41 Açucares Açucares Totais e Redutores Método Luff - Schoorl Lactose m 2 m 1 + solubilização com etanol 40%, 1h Remoção de interferentes com solução Carriez I e II Det. Açucares Totais Tratado quente + HCl + H 2 SO 4 6N + KI sat + amido Na 2 S 2 O 3 0,1N Solubiliza-se em água quente, faz-se reagir com levedura (Saccharomyces cerevisiae) Remoção de interferentes com Carriez I e II Lactose intacta Det. Açucares Redutores Açucares totais e redutores [NP 1785:1986], lactose [ NP 2027:1987])

42 Açucares Desvantagens do método de Luff-Schrool: Falta de especificidade Alternativa: HPLC A separação do tipo de açucares pode ser importante para a avaliação nutricional. Perfil cromatográfico da mistura de carboidratos. Amostra de açucares e lactose, HPLC.

43 Relatório de Ensaio

44 Análise Rápida via NIR As redes NIR são uma mais valia NIR: Resposta Rápida; Redução Custo Analítico, Mét. isento reagentes Os métodos físico-químicos são o suporte para a análise rápida via NIR. - [NP ISO DIS 12099:2016]- Equações robustas precisam de métodos analíticos válidos e pessoas treinadas!

45 Obrigado pela atenção