Universidade Feevale, ERS 239, 2755, CEP , Novo Hamburgo, RS, Brasil. 2

Transcrição

1 Astrt GERMINAÇÃO DE ESPOROS E DESENVOLVIMENTO DE GAMETÓFITOS DE CYATHEA ATROVIREN (LANGSD. & FISCH.) DOMIN (CYATHEACEAE): INFLUÊNCIA DE SAIS MINERAIS E SACAROSE Ttieli Silveir 1 Ctiusi Mron 2 Annette Droste 3 Reeido em ; Aeito The tree fern Cythe trovirens (Lngsd. & Fish.) Domin ours in diverse hitts in Brzil, eing trget of extrtivism due to its ornmentl hrteristis. Nutritionl onditions tht promote spore germintion nd erly development of gmetophytes re ruil for the whole life yle of ferns. The ojetive of the study ws to ssess spore germintion nd erly gmetophyti development of C. trovirens in the presene of different mronutrient slt nd surose onentrtions. Spores were surfe sterilized with 2% sodium hypohlorite nd sowed in Murshige & Skoog (MS) liquid medium ontining 25, 50, 75 or 100% of the originl mronutrient slts, without ddition of surose or with 15, 30, 45 or 60 g L -1 of the rohydrte. Perentges of germintion nd of lminr gmetophytes in the different tretments were determined nd ompred y the Student-Newmn-Keuls test. Regrdless slt onentrtion, the perentge of germinted spores in the sene of surose (28.7 to 69.3%) ws signifintly higher thn the perentges reorded in medi ontining 45 (1 to 41%) nd 60 g L -1 (5 to 20%) of the rohydrte. When tretments with different mronutrient onentrtions without ddition of surose were ompred, the highest germintion perentges (69.3%) nd lminr gmetophyte perentges (42.7%) were oserved in the medium with 25% of the slts, whih differ signifintly from the vlues reorded in the medium with 100% of the originl onentrtion of MS slts (28.7 nd 5.3%, respetively). The MS medium with 25% of mronutrient slts nd without surose is reommended for the erly stge of in vitro ulture of C. trovirens. Key Words: In vitro ulture. Conservtion. Tree fern. 1 Bolsist PROBITI/FAPERGS, Curso de Ciênis Biológis, Lortório de Biotenologi Vegetl, Universidde Feevle, ERS 239, 2755, CEP , Novo Hmurgo, RS, Brsil. E-mil: ttieli@feevle.r. 2 Bolsist PROSUP CAPES de Mestrdo no Progrm de Pós-Grdução em Qulidde Amientl, Lortório de Biotenologi Vegetl, Instituto de Ciênis d Súde, Universidde Feevle, ERS 239, 2755, CEP , Novo Hmurgo, RS, Brsil. E-mil: ti.mron@hotmil.om 3 Doutor e Professor Adjunt do Progrm de Pós-Grdução em Qulidde Amientl, Lortório de Biotenologi Vegetl, Instituto de Ciênis d Súde, Universidde Feevle, ERS 239, 2755, CEP , Novo Hmurgo, RS, Brsil. E-mil: nnette@feevle.r. PESQUISAS, BOTÂNICA Nº 68: São Leopoldo: Instituto Anhietno de Pesquiss, 2015.

2 396 Silveir, Mron & Droste. Resumo A smmi roresente Cythe trovirens (Lngsd. & Fish.) Domin oorre em diversos hitts no Brsil, sendo lvo de extrtivismo devido sus rterístis ornmentis. As ondições nutritivs que propiim germinção de esporos e o desenvolvimento iniil de gmetófitos são determinntes pr todo o ilo de vid ds smmis. O ojetivo do estudo foi vlir germinção de esporos e o desenvolvimento de gmetófitos de C. trovirens n presenç de diferentes onentrções de sis mronutrientes e de srose. Esporos form superfiilmente esterilizdos om 2% de hipolorito de sódio e semedos em meio Murshige & Skoog (MS) líquido ontendo 25, 50, 75 ou 100% dos sis mronutrientes originis, sem srose ou om dição de 15, 30, 45 ou 60 g L -1 do roidrto. Form determinds s porentgens de germinção e de gmetófitos lminres nos diferentes trtmentos, e omprds pelo teste de Student-Newmn-Keuls. Independentemente d onentrção de sis, s porentgens de esporos germindos n usêni de srose (28,7 69,3%) form signifitivmente superiores às porentgens registrds nos meios ontendo 45 (1 41%) e 60 g L -1 (5 20%) do roidrto. Qundo os trtmentos om diferentes onentrções de mronutrientes sem dição de srose form omprdos entre si, s miores porentgens de germinção (69,3%) e de gmetófitos lminres (42,7%) form oservds no meio om 25% dos sis, que diferirm signifitivmente dos vlores registrdos no meio om 100% d onentrção originl de sis MS (28,7 e 5,3%, respetivmente). O meio MS om 25% de sis mronutrientes e sem srose é reomenddo pr etp iniil do ultivo in vitro de C. trovirens. Plvrs-hve: Cultur in vitro. Conservção. Smmi roresente. Introdução As smmis onstituem um grupo de grnde diversidde morfológi, inluindo plnts de lguns milímetros de omprimento té espéies roresentes (Pge, 1979), que presentm um vrid oupção de hitts, om distriuição desde o nível do mr té o limite d vegetção ltimontn, ns regiões tropiis (Pge, 1979; Windish, 1992). Estim-se que oorrm er de espéies de smmis no mundo (Morn, 2008) sendo que espéies estão distriuíds no Brsil, ds quis 461 são endêmis (Prdo & Sylvestre, 2015). As Cytheee, tmém onheids omo xxins ou smmiçus, são smmis roresentes, mplmente explords n região sul do Brsil pr fins ornmentis (Shmitt & Windish, 2005). Cythe trovirens (Lngsd. & Fish.) Domin é um Cytheee de té seis metros de ltur, om rízes dventíis e folhs que podem ter té três metros de omprimento, ontendo espinhos nos peíolos (Fernndes, 1997). A espéie oorre em estdos do Nordeste, Centro-Oeste, Sudeste e Sul do Brsil, no Prgui, n Argentin (Pone, 1996) e no Urugui (Mrquez & Bruss, 2011). No Brsil, espéie é enontrd priniplmente no domínio d Florest Atlânti ( Windish & Sntigo, 2015) e sofre om pressões ntrópis de

3 Germinção de Esporos e Desenvolvimento de Gmetófitos 397 unho explortório, sendo que plnts inteirs são retirds de seus hitts nturis pr ornmentção de jrdins e seus áudies são utilizdos pr frição de vsos (Shmitt, 2005; Fernndes, 2000). O esteleimento de Cythe trovirens oorre em hitts om diferentes estágios suessionis, e indivíduos podem ser enontrdos em poeir, florest seundári ix e lt. Apesr de presentr oorrêni em mientes om diferentes rterístis, vrição dos ftores iótios o longo do no influenim os eventos fenológios, omo produção e senesêni de folhs e mturção de esporos (Shmitt & Windish, 2012). No sul do Brsil, foi verifido que produção e mturção de esporos é restrit os meses de verão, sendo possível que o ilo reprodutivo d espéie poss estr reliondo ftores mientis espeífios, omo, fotoperíodo, tempertur e sustrto, refletindo tmém n formção de novos indivíduos (Shmitt & Windish, 2012). Pr onservção e proteção de um espéie explord, são utilizds estrtégis in situ e ex situ (Primk & Rodrigues, 2008). As ténis de ultur in vitro são vlioss pr propgção e o uso sustentável dos reursos vegetis (Hrding et l.,1997), sendo ssim um possiilidde de produção de indivíduos e um form indiret de reduzir pressão sore espéies explords pelo seu vlor eonômio. Pr que ultur in vitro tenh suesso, é neessário ompreender s exigênis eofisiológis pr o desenvolvimento ds plnts. Um vez que o gmetófito é o estádio de desenvolvimento mis sensível do ilo de vid ds smmis, s ondições in vitro pr germinção de esporos e o desenvolvimento gmetofítio são deisivs pr propgção efiiente dests plnts (Hu et l., 2010). A onentrção de sis e de fontes de rono são ftores que influenim no esteleimento e desenvolvimento in vitro de gmetófitos de smmis (Mohr, 1962; Khoo & Thoms, 1980; Lê, 1983; Psqul et l., 1994; Fernández et l., 1997). O meio Murshige e Skoog (MS) ( Murshige & Skoog, 1962) é utilizdo pr ultur de smmis ( Knuss, 1976; Psqul et l.,1994; Fernández et l.,1997; Cox et l., 2003; Hu et l., 2010) e em su formulção originl ontém srose. Este meio present onentrções de sis mronutrientes miores omprtivmente outros meios, lém de sis mironutrientes (Torres et l., 1998). A onentrção idel de srose pr d teido vegetl depende de seu efeito promotor omo nutriente e de seu efeito iniidor omo gente osmótio (Fernández & Revill, 2003). Diferençs entre espéies são oservds ns resposts às ondições in vitro, de form que lgums smmis presentm germinção e resimento de gmetófitos miores em meios om miores onentrções de nutrientes, enqunto que outrs espéies têm preferêni por meios menos rios em nutrientes, inluindo fonte de rono (Fernández et l., 1997; Mron et l., 2014). O presente estudo teve por ojetivo vlir germinção de esporos e o desenvolvimento de gmetófitos de Cythe trovirens n presenç de diferentes onentrções de sis mronutrientes e de srose. A hipótese

4 398 Silveir, Mron & Droste. testd foi de que germinção de esporos e o desenvolvimento gmetofítio são superiores em ulturs om miores onentrções destes ompostos. Mteril e métodos A populção de Cythe trovirens d qul form oletds folhs férteis enontr-se n Áre de Relevnte Interesse Eológio Henrique Luis Roessler ( S e 51º06 56 O; 16,4 m de ltitude), que foi deretd em 2009 omo Unidde de Conservção. A áre está lolizd no miente urno do muniípio de Novo Hmurgo, Rio Grnde do Sul, Brsil. As folhs form oletds de dez espéimes, ondiionds em ndejs e mntids em tempertur de 26±1 C por proximdmente 72 h pr induzir deisêni dos esporângios, onforme método de Brum & Rndi (2006), om dptções. Os esporos form seprdos dos esporângios trvés de filtrção em ppel interfolhdo (Melpper ). Em tuos Eppendorf (pidde de 1,5 ml), form olodos 60 mg de esporos, os quis pssrm por ssepsi em 1 ml de hipolorito de sódio 2% por 15 min e qutro lvgens em 1 ml de águ destild utolvd (Vrgs & Droste, 2014). Imeditmente pós ssepsi, os esporos form semedos em meio MS, om ph justdo em 6,0 (Rehenmher et l., 2010) ntes d esterilizção em utolve. Pr esterilizção superfiil dos esporos, foi diiond tidion (Fluk, Sigm -Aldrih) n onentrção de 0,5 g L -1 (Vrgs & Droste, 2014) em d frso (pidde de 200 ml) ontendo 30 ml de meio MS e 10 mg de esporos. Form preprds três repetições (frsos) pr d onentrção de sis mronutrientes (25, 50, 75 e 100%) omind om d onentrção de srose (0, 15, 30, 45 e 60 g L -1 ), totlizndo 20 trtmentos e sessent repetições. As ulturs form mntids em miente om tempertur ontrold de 26±1 C e fotoperíodo de 12 hors luz, intensidde luminos de 70 µmol m -2 /s. A germinção e o desenvolvimento gmetofítio form vlidos os 30 e 60 dis de ultivo in vitro. Pr d trtmento, três lâmins mirosópis form preprds (um lâmin prtir de d frso), sendo ontdos os 100 primeiros indivíduos oservdos de d lâmin em mirosópio inoulr (Nikon, Elipse E200, umento de 400x), onforme metodologi propost por Vivini & Rndi (2008). O número totl de gmetófitos e o número de gmetófitos lminres (estádio de desenvolvimento gmetofítio mis vnçdo visulizdo no período de 60 dis) (Figur 1) form registrdos, seguindo lssifição desrit por Rehenmher et l. (2010). Utilizou-se omo ritério pr onsiderr esporo germindo emergêni do loróito e do rizoide (Rnl, 1999). A normlidde dos ddos foi vlid pelo teste de Shpiro-Wilk. Os ddos form sumetidos o teste de Kruskl-Wllis e s diferençs entre médis form nlisds pelo teste de Student-Newmn-Keuls, 5% de proilidde. O grupmento dos trtmentos om se n distâni eulidin foi feito por meio d nálise de onglomerdos hierárquios om estndrdizção ds vriáveis. Pr os testes, foi utilizdo o progrm BioEstt versão 5.3.

5 Germinção de Esporos e Desenvolvimento de Gmetófitos 399 Figur 1. Cythe trovirens: (A) Esporos (rr = 50 µm). (B) Gmetófito lminr (rr = 100 µm). Resultdos A germinção de esporos de Cythe trovirens foi oservd em todos os meios de ultur. No entnto, s diferentes onentrções de sis mronutrientes e de srose influenirm n pidde de germinção dos esporos ( Figur 2). Tnto os 30 em omo os 60 dis pós semedur, independentemente d onentrção de sis, porentgem de esporos germindos n usêni de srose foi signifitivmente superior às porentgens registrds nos meios ontendo 45 e 60 g L -1 dest fonte de rono. As porentgens de esporos germindos n presenç de 15 e 30 g L -1 de srose form esttistimente intermediáris. Slient-se que nos trtmentos om 100% dos sis mronutrientes não houve germinção n presenç de 45 e 60 g L -1 de srose os 30 dis. Neste mesmo período e trtmentos, porentgem de germinção foi signifitivmente inferior no meio om 30 g L -1 de srose, qundo omprd à registrd n usêni de srose, enqunto que, n presenç de 15 g L -1 do roidrto, porentgem foi intermediári (Figur 2) Germinção (%) s 15s 30s 45s 60s 0s 15s 30s 45s 60s 0s 15s 30s 45s 60s 0s 15s 30s 45s 60s Germinção (%) s 15s 30s 45s 60s 0s 15s 30s 45s 60s 0s 15s 30s 45s 60s 0s 15s 30s 45s 60s A 25MS 50MS 75MS 100MS Trtmentos B 25MS 50MS 75MS 100MS Trtmentos Figur 2. Porentgem (médi ± desvio pdrão) de germinção de esporos de Cythe trovirens os 30 dis (A) e 60 dis (B) de ultivo em meio om diferentes onentrções de sis mronutrientes (MS) e de srose (s). Médis om letrs iguis em d onentrção de sis mronutrientes indim que os ddos não diferem esttistimente entre si, de ordo om o teste de Student-Newmn-Keuls, 5% de proilidde.

6 400 Silveir, Mron & Droste. As porentgens de gmetófitos lminres nos meios om 25% d onentrção de sis mronutrientes om 15g L -1 ou sem srose form signifitivmente superiores à porentgem registrd n mior onentrção de srose os 30 dis pós semedur (Figur 3). Nos meios om 50 e 75% de sis mronutrientes, s porentgens de gmetófitos lminres desenvolvidos n usêni de srose form signifitivmente miores dquels nos meios om 30 g L -1 ou mis de srose. Nos trtmentos om 100% dos sis, pens n usêni e n presenç de 15 g L -1 de srose houve formção de gmetófitos lminres (Figur 3). Aos 60 dis, s porentgens de gmetófitos lminres n usêni de srose nos trtmentos om 25, 50 e 75% de sis mronutrientes form signifitivmente superiores às porentgens registrds n presenç de 45 e 60 g L -1 do çúr (Figur 3). Nos trtmentos om 100% dos sis, s porentgens de gmetófitos lminres form s mis ixs oservds (0,67 7,67%). Gmetófitos lminres (%) Gmetófitos lminres (%) s 15s 30s 45s 60s 0s 15s 30s 45s 60s 0s 15s 30s 45s 60s 0s 15s 30s 45s 60s 0s 15s 30s 45s 60s 0s 15s 30s 45s 60s 0s 15s 30s 45s 60s 0s 15s 30s 45s 60s 25MS 50MS 75MS 100MS 25MS 50MS 75MS 100MS A Trtmentos B Trtmentos Figur 3. Porentgem (médi ± desvio pdrão) de gmetófitos lminres de Cythe trovirens os 30 dis (A) e 60 dis (B) de ultivo em meio om diferentes onentrções de sis mronutrientes (MS) e de srose (s). Médis om letrs iguis em d onentrção de sis mronutrientes indim que os ddos não diferem esttistimente entre si, de ordo om o teste de Student-Newmn-Keuls, 5% de proilidde. Pelo fto de numerimente s miores porentgens de germinção de esporos e de gmetófitos lminres terem sido oservds n usêni de srose independente d onentrção de mronutrientes, ests form esttistimente omprds (Figur 4). As miores porentgens de germinção (69,3%) e de gmetófitos lminres (42,7%) form oservds os 60 dis pós semedur no meio om 25% dos sis mronutrientes, emor s porentgens nos meios om 50 e 75% dos sis não tenhm sido signifitivmente inferiores (50% dos sis: 62,0 e 35,3%; 75% dos sis: 53,7 e 40,3%, respetivmente). A germinção e formção de gmetófitos lminres no meio ontendo 100% dos sis mronutrientes form signifitivmente inferiores (28,7 e 5,3%, respetivmente) os vlores registrdos no meio om 25% dos sis. O proesso de germinção foi retrddo n onentrção originl de sis do meio MS sem srose, um vez que pens 18,6% dos indivíduos germindos hvi tingido o estádio lminr nesse trtmento, enqunto que nos demis meios sem srose, os gmetófitos lminres representrm pelo menos 57% dos indivíduos germindos (Figur 4).

7 Germinção de Esporos e Desenvolvimento de Gmetófitos 401 Germinção e gmetófitos lminres (%) MS 50MS 75MS 100MS Trtmentos Figur 4. Porentgem (médi ± desvio pdrão) de germinção (rrs prets) e de gmetófitos lminres (rrs inzs) de Cythe trovirens os 60 dis em meios om diferentes onentrções de sis mronutrientes (MS) sem dição de srose. Médis om letrs iguis (rrs d mesm or) indim que os ddos não diferem esttistimente entre si, de ordo om o teste de Student-Newmn-Keuls, 5% de proilidde. Considerndo simultnemente germinção de esporos e formção de gmetófitos lminres, nálise de grupmento dos trtmentos possiilitou distinguir dois grupos: A e B (Figur 5). As ominções de 25% dos sis mronutrientes de MS sem srose e om 15g L -1 de srose e de 50% e 75% de mronutrientes sem srose influenirm germinção e o desenvolvimento gmetofítio de form similr (Figur 5, grupo A). As demis ominções de sis mronutrientes e srose formrm um grnde grupo (Figur 5, grupo B), dentro do qul os trtmentos 25% de sis om 30 e 45 g L -1 de srose e 50% de sis om 15 g L -1 se gruprm (Figur 5, grupo B) e se diferenirm dos demis (Figur 5, grupo B). Os trtmentos om s miores onentrções de sis mronutrientes e de srose se gruprm, reforçndo os resultdos que evidenirm um influêni negtiv destes sore germinção e o desenvolvimento de gmetófitos lminres. 25MS0s 25MS15s 50MS0s 75MS0s 25MS30s 25MS45s 50MS15s 25MS60s 75MS45s 50MS60s 100MS30s 75MS60s 100MS60s 100MS45s 50MS30s 50MS45s 75MS30s 100MS0s 100MS15s 75MS15s B B B A 0 20% 40% 60% 80% 100% Dissimilridde Figur 5. Dendrogrm gerdo pel nálise de glomerdos hierárquios om pdronizção ds vriáveis, utilizndo o índie de dissimilridde sedo n distâni eulidin pr os 20 trtmentos om diferentes onentrções de sis mronutrientes e de srose pr o ultivo in vitro de Cythe trovirens.

8 402 Silveir, Mron & Droste. Disussão A mior porentgem de germinção de esporos de Cythe trovirens oservd n usêni de srose e diminuição grdtiv do número de esporos germindos n medid em que onentrção dest fonte de rono foi umentd no meio de ultur orroorou om o registro pr Diksoni sellowin Hook (Diksoniee), outr smmi roresente (Renner & Rndi, 2004). Esporos de Adintum reniforme vr. sinense (Y. X. Lin) (Pteridee) ultivdos em meio MS om 45 e 60 g L -1 de srose presentrm trso n germinção qundo omprdos esporos germindos n presenç de 15 g L -1 do roidrto (Hu et l., 2010).Cythe trovirens tmém presentou menor germinção de esporos no meio MS om onentrção originl dos sis mronutrientes. No entnto, não se oservou derésimo sensível do número de esporos germindos entre os trtmentos om 25 e 50% destes sis. Cox et l. (2003) oservrm usêni de germinção de esporos de Shize dihotom (L.) Sw. (Shizeee) em 50% dos mronutrientes, evidenindo preferêni dest espéie pelo meio MS om 25% de sis. Conentrções menores de nutrientes no meio de ultur representm um pressão osmóti inferior àquel presente qundo lts onentrções de nutrientes ompõem o meio, o que é enéfio pr sorção de águ por prte dos esporos, que é requisito pr o iníio do proesso de germinção (Whittier, 1975). Além disso, dição de srose o meio de ultur pode umentr os níveis de ontminção por fungos ou téris (Cid, 2010), fto oservdo pr C. trovirens no presente estudo. Tis orgnismos ompetem pelos nutrientes, podem eliminr sustânis tóxis pr o meio, em omo fetr produção de metólitos seundários importntes pr o desenvolvimento vegetl (Torres et l.,1998), vindo diminuir pidde de germinção. No entnto, enqunto lgums espéies de smmis possuem preferêni por meios menos rios em nutrientes, outrs têm germinção estimuld em meios om onentrção originl de sis, tis omo Dryopteris ffinis (Lowe) Frser-Jenk. (Dryopteridee) (Fernández et l., 1996), Blehnum spint (L.) Sm. (Blehnee), Pteris ensiformis (Burm. F.) (Fernández et l., 1996) e Asplenium nidus L. (Aspleniee) (Fernández et l., 1997). A dição de srose o meio de ultur de Cythe trovirens não promoveu o resimento dos gmetófitos. Porentgens esttistimente equivlentes de gmetófitos lminres form oservds nos meios om zero 30 g L -1 de srose, om destque numério pr os gmetófitos desenvolvidos n usêni deste roidrto. Meios sem dição de fontes de rono ou om ixs onentrções dests são preferidos tmém por outrs espéies de smmis no estádio iniil de desenvolvimento gmetofítio. Pr Pltyerium ifurtum (Cv.) C. Chr. (Polypodiee), o meio MS om 25% d onentrção originl dos sis mronutrientes e sem srose foi o mis enéfio pr formção de gmetófitos jovens, que tiverm seu resimento iniido n presenç de 30 g L -1 dest fonte de rono (Cmloh & Gogl, 1992, Cmloh, 1993). A mesm onentrção de srose igulmente iniiu germinção de esporos e o resimento gmetofítio de

9 Germinção de Esporos e Desenvolvimento de Gmetófitos 403 Osmund reglis L. (Osmundee) ( Fernández et l., 1997). A espéie tmém teve o desenvolvimento iniil de gmetófitos estimuldo em ix onentrção de sis mronutrientes (25%). Ao ontrário, qundo os gmetófitos form ultivdos em meios om 100 ou 50% d onentrção de sis, os mesmos presentrm nerose e seu resimento essou, o que foi triuído à mior onentrção de mônio presente nestes meios (Fernández et l., 1997). O mônio é um fonte importnte de nitrogênio pr queles teidos que possuem omportmento nutritivo heterotrófio durnte o período em que não são pzes de suprir sus neessiddes energétis om o proesso fotossintétio (Whittier, 1989). A pidde de formr e desenvolver gmetófitos n usêni de srose indiou utotrofi desse estádio de desenvolvimento em C. trovirens no presente estudo. Sendo ssim, ests estruturs não dependem d presenç de mônio e o mesmo pode té vir ser prejudiil pr o estádio de desenvolvimento iniil. Tmém pr Adintum reniforme vr. sinense, onentrção originl de sis mronutrientes no meio MS ssoid 45 ou 60 g L -1 de srose não se mostrou enéfi pr os gmetófitos em estádio lminr, que formrm rmifições o invés de seguir seu desenvolvimento morfológio esperdo (Hu et l., 2010) e dr origem gmetófitos ordiformes, típios do próximo estádio de desenvolvimento. Ao ontrário, gmetófitos lminres típios e em mior número form otidos em meio MS om 25% d onentrção originl de mronutrientes ontendo 15 g L -1 de srose (Hu et l., 2010). Tmém no presente trlho form visulizdos gmetófitos lminres rmifidos nos meios om 45 e 60 g L -1 de srose, pontndo pr um efeito negtivo d presenç de lts onentrções deste roidrto sore este estádio de desenvolvimento de C. trovirens. D mesm form omo pr germinção dos esporos, diferentes espéies de smmis presentm preferênis diverss pel disponiilidde de nutrientes no meio de ultur tmém no estádio iniil de gmetófitos. Ao ontrário dos resultdos otidos pr Cythe trovirens, o meio MS em su formulção originl de sis e ontendo 20 g L -1 de srose promoveu o umento d mss se de gmetófitos de Diksoni sellowin, enqunto que n usêni de srose ou om 40 e 50 g L -1 deste roidrto, os gmetófitos presentrm menor mss se (Renner & Rndi, 2004). A redução d mss se dos gmetófitos em meio sem srose foi triuíd à defiiêni em sustânis de reserv durnte germinção e os primeiros estádios do desenvolvimento gmetofítio, em onsequêni de um tx fotossintéti insufiiente lid à respirção. Por su vez, dição de onentrções mis lts de srose o meio, de 40 ou 50 g L -1, torn o potenil osmótio mis negtivo, o que pode levr à menor ou nenhum sorção de águ e onsequentemente iniir o metolismo dos gmetófitos, reduzindo su mss se (Renner & Rndi, 2004). Os pdrões de germinção dos esporos e do desenvolvimento iniil dos gmetófitos lminres evidenirm que s onentrções de 45 e 60 g L -1 de srose, independentemente d onentrção de sis mronutrientes do meio MS, em omo onentrção originl destes sis, mesmo n usêni

10 404 Silveir, Mron & Droste. de srose, form restritivs o esteleimento de Cythe trovirens, de form que hipótese iniil não foi sustentd. Reomend-se utilizção do meio MS om 25% d onentrção originl de sis mronutrientes e sem dição de srose pr etp iniil do ultivo in vitro dest espéie. Futuros estudos deverão direionr esforços pr vlição do efeito d ix pressão osmóti do meio de ultur sore os estádios mis vnçdos do desenvolvimento de C. trovirens. Agrdeimentos Os utores grdeem à Universidde Feevle pel infrestrutur disponiilizd e pelo poio finneiro, em omo à Fundção de Ampro à Pesquis do Rio Grnde do Sul (FAPERGS) pel ols de Iniição Tenológi e Inovção (PROBITI) onedid à primeir utor e à CAPES/PROSUP pel ols de Mestrdo onedid à segund utor. Referênis iliográfis BRUM, F. M. R. & RANDI, A. M Germintion of spores nd growth of gmetophytes nd sporophytes of Rumohr dintiformis (Forst.) Ching (Dryopteridee) fter spore ryogeni storge. Revist Brsileir de Botâni 29: CAMLOH, M. & GOGALA, N In vitro ulture of Pltyerium ifurtum gmetophytes. Siene Hortiulture 51: CAMLOH, M Spore germintion nd erly gmetophyte development of Pltyerium ifurtum. Amerin Fern Journl 89: CID, L.P.B Cultivo in vitro de plnts. Brsíli: EMBRAPA. 303 p. COX, J.; BHATIA, P. & ASHWATH, N In vitro spore germintion of the fern Shize dihotom. Sienti Hortiulture 97: FERNANDES, I Txonomi e fitogeogrfi de Cytheee e Diksoniee ns Regiões Sul e Sudeste do Brsil. 435 f. Tese (Doutordo em Botâni) Instituto de Bioiênis. Universidde de São Pulo, São Pulo, FERNANDES, I Txonomi dos representntes de Diksoniee no Brsil. Pesquiss, Botâni 50: FERNÁNDEZ, H.; BERTRAND, A.M. & SÁNCHES-TAMÉS, R Influene of tissue ulture onditions on pogmy in Dryopteris ffinis sp. ffinis. Plnt Cell, Tissue nd Orgn Culture 45: FERNÁNDEZ, H.; BERTRAND, A.M. & SÁNCHES-TAMÉS, R Miropropgtion nd phse hnge in Blehnum spint nd Pteris ensiformes. Plnt Cell, Tissue nd Orgn Culture 44: FERNÁNDEZ, H.; BERTRAND, A.M. & SÁNCHES-TAMÉS, R Gemmtion in ultured gmetophytes of Osmund reglis. Plnt Cell Reports 16: FERNÁNDEZ, H.; BERTRAND, A.M. & SÁNCHES-TAMÉS, R Plntlet regenertion in Asplenium nidus L. nd Pteris ensiformes L. y homogeniztion of BA treted rhizomes. Sienti Hortiulture 68: FERNÁNDEZ, H. & REVILLA, M.A In vitro ulture of ornmentl ferns. Plnt Cell, Tissue nd Orgn Culture 73: 1-13.

11 Germinção de Esporos e Desenvolvimento de Gmetófitos 405 HARDING, K.; BENSON, E. & CLACHER, K Plnt onservtion iotehnology: An overview. Agro-Food-Industry Hi-Teh 8: HUA, W.; XIU-QUN, L.; HUA, J. & LONG-QING, C Effets of light, mronutrients, nd surose on germintion nd development of the endngered fern Adintum reniforme vr. sinense (Adintee). Sienti Hortiulture 125: KHOO, S.I. & THOMAS, M.B Studies on the germintion of fern spores. Plnt Propgtion 26: KNAUSS, J.F A prtil tissue ulture method for pthogen-free propgtion of seleted ferns from spores. Proeedings of the Florid Stte Hortiulturl Soiety 89: LÊ, L Essi de multplition de Nepholepis exltt pr ulture in vitro de tissue gmétophytique. Revue Suisse de Vitiulture, Aroriulture et Hortiulture 15: MARCON, C.; SILVEIRA, T & DROSTE, A Germintion nd gmetophyte development of Cythe orovdensis (Rddi) Domin (Cytheee) from spores stored t low tempertures. At Sientirum 36: MARQUEZ, G.J. & BRUSSA, C.A First reord of Cytheee in Uruguy. Amerin Fern Journl 101: MOHR, H The influene of visile rdition on the germintion of rhegonite spores nd the growth of the fern protonem. Botnil Journl of the Linnen Soiety 58: MORAN, R.C Diversity, iogeogrphy nd floristis. In: RANKER, T.A.; HAUFLER, C.H. (Ed.). Biology nd Evolution of Ferns nd Lyophytes. Cmridge, Cmridge University Press: MURASHIGE, T. & SKOOG, F A revised medium for rpid growth nd iossys with too tissue ultures. Physiologi Plntrum 15: PAGE, C.M Experimentl spets of fern eology. In: DYER, A.F. The experimentl iology of ferns. London, Ademi Press: PASQUAL, M.; HOSHIKA, E. & ISHIDA, J.S Influêni de diferentes onentrções de srose e sis mineris sore multiplição in vitro de Nephrolepis exltt, um smmi ornmentl. Pesquis Agropeuári Brsileir 29: PRADO, J. & SYLVESTRE, L. Smmis e Liófits in List de Espéies d Flor do Brsil. Rio de Jneiro: Jrdim Botânio do Rio de Jneiro. Disponível em: Aesso em 28 Fev PONCE, M Pteridophyt. In: ZULOAGA, F.O.; MORRONE, O. (Ed.). Ctálogo de ls plnts vsulres de Argentin I: Pteridophyt, Gymnosperme y Angiosperme (Monootyledonee). Monogrphs in Systemti Botny from the Missouri Botnil Grden: PRIMACK, R.B. & RODRIGUES, E Biologi d Conservção. Londrin, Editor Plnt. 323 p. RANAL, M Effets of temperture on spore germintion in some fern speies from semideiduous mesophyti Forest. Amerin Fern Journl 89: RECHENMACHER, C.; SCHMITT, J.L. & DROSTE, A Spore germintion nd gmetophyte development of Cythe trovirens (Lngsd. & Fish.) Domin (Cytheee) under different ph onditions. Brzilin Journl of Biology 70: RENNER, G.D.R. & RANDI, A.M Effets of surose nd irrdine on germintion nd erly gmetophyte growth of the endngered tree fern Diksoni sellowin Hook (Diksoniee). At Botni Brsili 18: SCHMITT, J.L Estudos florístios, eológios e do desenvolvimento em Cytheee (Pteridophyt) no Rio Grnde do Sul, Brsil.167 f. Tese (Doutordo em Botâni) Instituto de Bioiênis. Universidde Federl do Rio Grnde do Sul, Porto Alegre.

12 406 Silveir, Mron & Droste. SCHIMITT, J.L. & WINDISCH, P.G Aspetos eológios de Alsophil setos Kulf. (Cytheee, Pteridophyt) no Rio Grnde do Sul, Brsil. At Botni Brsili 19: SCHMITT, J.L. & WINDISCH, P.G Cudex growth nd phenology of Cythe trovirens (Lngsd. & Fish.) Domin (Cytheee) in seondry forest, southern Brzil. Brzilin Journl of Biology 72: TORRES, A.C.; CALDAS, L. S. & BUSO, J. A. (Ed.) Cultur de teidos e trnsformção genéti de plnts. Brsíli, ABCTP/Emrp. 509 p. VARGAS, I.B. & DROSTE, A In vitro propgtion of Cythe trovirens (Cytheee): spore storge nd steriliztion onditions. Revist de Biologi Tropil 62: VIVIANI, D. & RANDI, A.M Effets of ph, temperture nd light on spore germintion nd growth nlysis of young sporophytes of Polypodium lepdopteris (Pteridophyt, Polypodiee). Rodriguési 59: WHITTIER, D.P The influene of osmoti onditions on indued pogmy in Pteridium gmetophytos. Phytomorphology 25: WHITTIER, D.P Effets of nitrogen soure on spore germintion nd gmetophyte growth of Psilotum. Botnil Gzette 151: WINDISCH, P.G Pteridófits d região norte-oidentl do Estdo de São Pulo: gui pr estudo e exursões. 2ª ed. São José do Rio Preto, UNESP. 110p. WINDISCH, P.G. & SANTIAGO, A.C.P. Cytheee in List de Espéies d Flor do Brsil. Rio de Jneiro: Jrdim Botânio do Rio de Jneiro. Disponível em:< Aesso em: 25 fev