T4 Livre Veterinário Para uso no sistema IMMULITE 2000
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- Maria da Assunção Borja Melgaço
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1 T4 Livre Veterinário Para uso no sistema IMMULITE 2000
2 T4 Livre IMMULITE 2000 Português Uso Previsto: Somente para uso animal com o analisador IMMULITE 2000 para a medição quantitativa de tiroxina (T4) sem ligação proteica em soro, como auxílio na avaliação clinica do estado da tireoide em animais. Número de Catálogo: L2KVF42 (200 testes) Código do Teste: VF4 Cor: Violeta Resumo e Explicação O principal hormônio da tireoide, tiroxina (T4), circula quase que inteiramente ligado a proteínas transportadoras, incluindo 3 globulinas e a albumina em cães. O T4 livre presente no soro representa uma pequena fração biologicamente ativa do T4 total (<0,1%). A concentração de proteína transportadora alterada induz alterações nos níveis de T4 Total, e concentrações de T4 livre tendem a permanecer dentro de uma faixa restrita. Por esta razão, as medições de T4 Total nem sempre refletem a situação da tireoide. Visto que níveis anormais de T4 podem significar tanto função anormal da tireoide quanto variações na proteína transportadora (fisiológica ou patológica), medições de T4 livre são mais correlacionadas com a situação da tireoide do que as medições de T4 Total. O hipotireoidismo é considerado a desordem endócrina mais comum em cães, ao passo que o hipertireoidismo nesta espécie é relativamente desconhecido. A maioria dos casos de hipotireoidismo canino é de natureza primária, envolvendo a produção prejudicada dos hormônios da tireoide, T4 e T3. Nesta condição, são esperados níveis de TSH elevados. Hipotireoidismo secundário ou terciário, onde a produção de hormônio tireoidiano é baixa como consequência de doenças hipotalâmicas ou hipofisárias, é responsável por menos de 5% dos casos de hipotireoidismo canino. Nas últimas condições, a redução nos níveis de TSH seria esperada. Normalmente, hipotireoidismo em cães é baseado na história clínica do animal e na presença de níveis reduzidos de hormônios da tiroide. No entanto, níveis de hormônio tireoidiano suprimidos não são indicadores específicos de doenças, uma vez que esses níveis são observados em doenças não tireoidianas. O hipertireoidismo (glândulas da tiroide super ativas) é uma desordem comum em gatos mais velhos. É causada por um aumento na produção de hormônios tireoidianos a partir das glândulas da tiroide. Princípio do Procedimento O T4 Livre Veterinário IMMULITE 2000 é um imunoensaio análogo competitivo, quimioluminescente e com uma fase sólida. A fase sólida (pérola) é revestida com um anticorpo monoclonal murino anti-t4. A fase líquida consiste de fosfatasse alcalina (intestino de vitela) conjugado com T4. A amostra animal e o reagente são incubados juntos com a perola revestida durante 30 minutos. Durante esse tempo, o T4 livre na amostra compete com a enzima T4 conjugada no reagente por um número limitado de sítios ativos nos anticorpos presente na pérola. A amostra do paciente não ligada e os conjugados de enzima são então removidos por lavagem por centrifugação. Finalmente, o substrato quimioluminescente é adicionado ao tudo de reação contendo a pérola, e o sinal é gerado em proporção à quantidade de enzima ligada. O ensaio T4 Livre Veterinário IMMULITE 2000 é um teste direto e único, no sentido de que os seus resultados não são calculados como uma função do T4 total, mas interpolado a partir de uma curva de calibração padronizada (armazenada) em termos de concentrações de T4 livre 6. A este respeito, ele difere do método clássico de equilíbrio de diálise e das chamadas determinações do índice de T4 livre. O ensaio não exige um passo de préincubação nem um isolamento preliminar da fração livre por diálise ou cromatografia de coluna. O ensaio utiliza diversos recursos para preservar o equilíbrio entre T4 livre e T4 conjugado a proteína e para medir com precisão a fração livre. Em primeiro lugar, o análogo de T4 tem uma afinidade de ligação não detectável com TBG. Segundo, o anticorpo específico do ensaio se liga ao T4 tão firmemente quanto a albumina se liga ao T4 e, assim, evita a remoção do hormônio por proteínas de ligação tireoidianas. Finalmente, o processo opera à temperatura, ph e força iônica 2 IMMULITE 2000 Veterinary Free T4 (PIL2KVF4-3, )
3 fisiológicos. Ciclos de Incubação: 1 30 minutos Tempo para o Primeiro Resultado: 35 minutos. Coleta da Amostra Colete o sangue do animal por punção venosa em tubos simples e separe o soro das células. Recomenda-se o uso de uma ultracentrífuga para clarear amostras lipémicas. Amostras hemolisadas podem indicar tratamento incorreto de uma amostra antes do envio para o laboratório; portanto os resultados devem ser interpretados com cautela. A centrifugação de amostras de soro antes da formação completa do coagulo pode resultar na presença de fibrina. Para prevenir resultados errados devido à presença de fibrina, certifique-se que a formação do coágulo foi completa antes da centrifugação de amostras. Tubos de coleta sanguínea de fabricantes diferentes podem apresentar valores diferentes, dependendo dos materiais e aditivos, incluindo gel ou barreiras físicas, ativadores de coágulos e/ou anticoagulantes. Volume de Amostra Necessário: 10 µl de soro animal. Armazenamento: 7 dias a 2 8 C, ou 1 mês congelado a 20 C. 9 Advertências e Precauções Somente para uso animal. Reagentes: Manter a 2 8 C. Elimine de acordo com as leis aplicáveis. Substrato Quimioluminescente: Evite contaminação e exposição à luz solar direta. (Ver bula.) Água: use água destilada ou deionizada. Materiais Fornecidos Os componentes são um conjunto fechado. Os rótulos de código de barras são necessários para o ensaio. Pack de Pérolas T4 Livre Veterinário (L2VF412) Com código de barras. 200 pérolas revestidas com anticorpo monoclonal murino anti-t4. Estável a 2 8 C até a data de expiração. L2KVF42: 1 pack. Frasco de Reagente T4 Livre Veterinário (L2VF4A2) Com código de barras. 11,5 ml de fosfatase alcalina (intestino de vitela) conjugado com T4 em tampão. Estável a 2 8 C até a data de expiração. L2KVF42: 1 frasco. Antes do uso, retire a parte superior da etiqueta na perfuração, sem danificar o código de barras. Remova o selo de alumínio do topo da embalagem; encaixe a tampa deslizante nas rampas da tampa do reagente. Ajustadores T4 Livre Veterinário (LVF4L, LVF4H) Dois frascos (baixo e alto) de T4 livre liofilizado em soro canino processado. Reconstitua cada frasco 2,0 ml de água destilada ou deionizada. Misture por inversão com movimentos lentos até o material liofilizado dissolver completamente. Estável por 4 meses (alíquota) a 20 C. L2KVF42: 1 conjunto. Antes de passar os controles, coloque as Etiquetas de Alíquota apropriadas (fornecidas com o kit) em tubos de ensaio, de modo que os códigos de barras possam ser lidos pelo leitor on-board. Componentes do Kit Fornecidos Separadamente L2SUBM: Substrato Quimioluminescente L2PWSM: Solução de Lavagem de Probe L2KPM: Kit de Limpeza de Probe LRXT: Tubos de reação (descartáveis) K9TCM: Um módulo de controle binível, com base em soro canino, contendo T4 livre como um dos 3 ensaios constituintes. Também Necessário Pipetas de transferência de amostra, água destilada ou deionizada e controles. Procedimento de Ensaio Nota-se que para um desempenho ótimo, é importante realizar todos os procedimentos de manutenção de rotina, conforme definido no Manual do Operador do IMMULITE Veja o Manual do Operador do Sistema IMMULITE 2000 para procedimentos de: preparação, programação, diluições, ajustes, ensaios e controle de qualidade. IMMULITE 2000 Veterinary Free T4 (PIL2KVF4-3, ) 3
4 Intervalo Recomendável entre Ajustes: 2 semanas Controle de Qualidade de Amostras: Use controles ou conjunto de amostras de soro com pelo menos dois níveis de T4 livre. Valores Esperados Cada laboratório deve estabelecer seus próprios intervalos de referência. Dados de Desempenho Veja Tabelas e Gráficos para dados representativos de desempenho do ensaio. Os resultados estão expressos em ng/dl. (Salvo quando especificado, todos os resultados são gerados de amostras de soro caninas ou felinas coletadas em tubos sem barreiras de gel, ou aditivos promotores de coagulação). Fator de Conversão: ng/dl 12,87 pmol/l Intervalo Reportável: 0,3 6 ng/dl ( pmol/l). O ensaio é rastreável com um padrão interno manufaturado usando materiais qualificados e procedimentos de medição. Sensibilidade Analítica: Limite do Branco (maior valor esperado para uma amostra sem o analito, determinada de acordo com CLSI EP17-A 7 ): 0,04 ng/dl (0,51 pmol/l). Limite de Detecção (menor concentração detectável, determinada de acordo com CLSI EP17-A 7 ): 0,10 ng/dl (1,29 pmol/l). Sensibilidade Funcional: (concentração com 20% do coeficiente de variação (CV) determinado de acordo com CLSI EP5- A2 8 ): 0,25 ng/dl (3,2 pmol/l). Precisão: As amostras foram analisadas em duplicata ao longo de 10 dias, quatro ensaios por dia, para um total de 40 ensaios e 80 réplicas (Consulte a tabela Precisão ). Especificidade: Os anticorpos utilizados no procedimento do T4 Livre Veterinário IMMULITE 2000 são altamente específicos para T4 livre. (Veja tabela Especificidade ). Efeito do Ácido Oleico: Nenhum efeito significativo. (Veja tabela Efeito do Ácido Oleico). Referências 1) Ferguson DC. Thyroid function tests in the dog. Veterinary Clinics of North America. Small Animal Practice 1984; 14: ) Panciera DL. Hypothyroidism in dogs; 66 cases ( JAVMA 1994; 204: ) Nesbitt GH, Izzo J, Peterson L, Wilkins RJ. Canine hypothyroidism; A retrospective study of 108 cases. JAVMA 1980; 177: ) Feline advisory bureau (fab) information sheet; Hyperthyroidism in cats, updated Novermber FAB, Taeselbury, High Street, Tisbury, Wiltshire, UK, SP3 6LD. 5) Witherspoon LR, El Shami AS, et al. Chemically blocked analog assays for free thyronines. Clin Chem 1988;34:9 16 and ) Wosilait WD. A theoretical analysis of the distribution of thyroxine among sites on thyroid binding globulin, thyroid binding prealbumin and serum albumin. Res Commun Chem Pathol Pharmacol 1977;16: ) CLSI. Protocols for the Dtermination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline. CLSI document EP17-A Vol. 24 (No. 34). CLSI, ) Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline-Second Edition. CLSI document EP5- A2. CLSI, ) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 4rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders, 1996: Assistência Técnica Por favor, entre em contato com o seu Distribuidor local. O Sistema de Qualidade da Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. É certificado pelo ISO 13485:2003. Tabelas e Gráficos Precisão (ng/dl) Intraensaio Total Média SD CV SD CV 1 0,59 0,064 10,8% 0,070 11,9% 2 1,07 0,081 7,6% 0,089 8,3% 3 1,88 0,110 5,9% 0,123 6,5% 4 3,15 0,159 5,0% 0,186 5,9% 5 5,87 0,207 3,5% 0,250 4,3% 4 IMMULITE 2000 Veterinary Free T4 (PIL2KVF4-3, )
5 Especificidade ng/dl Somada Albumina Aparente ng/dl %Reação cruzada 5,000,000,000 2,22 D-T4 1,000 3,5-Diodo-L-tironina 10,000 3,5-Diodo-DL-tirosina 100,000 1,32 0,001% L-T3 100,000 3,70 0,004% 5,5-Difenilhidantoína 4,000,000 10,97 3-Monoiodo-L-tirosina 10,000 Ácido Salicílico 50,000,000 Ácido 3,3',5,5'-Tetraiodotiroacético 2,000 6-n-Propil-2-tiouracila 1,000 Metimazol 1,000,000 Fenilbutazona 1,000,000 : não detectável. Mudanças desta edição: cc#19681: criada nova IFU. cc#19681a: Revisado o Limite de Branco e o Limite de detecção de valores. Compreenda os Símbolos Os seguintes símbolos podem aparecer nas etiquetas dos produtos: Definição do Símbolo Número no Catálogo Fabricante Consulte as instruções de uso Cuidado! Potencial risco biológico Limite de temperatura (2 8 C) Limite superior de temperatura ( -20 C) Limite inferior de temperatura ( 2 C) Efeito do Ácido Oleico (ng/dl) Ácido Oleico Adicionado (mmol/l) T4 Livre Dosado Não congele (> 0 C) 10 : Não detectável. Não reutilize IMMULITE é uma marca registrada da Siemens Healthcare Diagnostics Siemens Healthcare Diagnostics Inc. All todos os direitos reservados. Origem: Reino Unido PIL2KVF4 3 Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom LOT Mantenha longe da luz solar Código do lote Contém o suficiente para (n) testes IMMULITE 2000 Veterinary Free T4 (PIL2KVF4-3, ) 5
6 Definição do Símbolo Formato da data (ano-mês) Usado por CONTROL Definição do Símbolo Controle CONTROL 1 Prejudicial CONTROL 2 Corrosivo CONTROL 3 CONTROL + Controle Positivo Tóxico CONTROL + L Controle Positivo Baixo Perigoso para o ambiente CONTROL Controle Negativo BEAD PACK Pack de Perolas CONTROL AB Controle Anticorpo TEST UNIT Unidade de Teste PRE PRE A B Solução Pré Tratamento REAG WEDGE Frasco de Reagente DITHIOTHREITOL Solução Ditiotreitol REAG WEDGE A REAG WEDGE B BORATE-KCN BUF Solução Tampão Borato-KCN REAG WEDGE D ADJUSTOR Calibrador ADJUSTOR L Calibrador, baixo ADJUSTOR H Calibrador, alto ADJUSTOR AB Calibrador, Anticorpo DIL Diluente de Amostra 6 IMMULITE 2000 Veterinary Free T4 (PIL2KVF4-3, )
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