Infecção simultânea por Ehrlichia canis, Babesia canis e vírus da cinomose canina - Relato de Caso

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1 Infecção simultânea por Ehrlichia canis, Babesia canis e vírus da cinomose canina - Relato de Caso Simultaneously infection with Ehrlichia canis, Babesia canis and canine distemper virus Case Report Coinfección por Ehrlichia canis, Babesia canis y el virus de la cinomosis canina Relato de un Caso Farlen José Bebber Miranda 1, Antonio Peixoto Albernaz 2, Maria Angélica Dutra Viestel 3, Orlando Augusto Melo Jr 3, Josias Alves Machado 4, Ricardo Benjamin Machado Alves 5, Cláudio Baptista de Carvalho 6 Resumo Uma cadela sem raça definida de oito meses de idade, domiciliada, foi atendida no ambulatório do Hospital Veterinário da Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro. No histórico, foram relatados tosse há um mês, secreção ocular, hiporexia e tremores, além da informação da não vacinação do animal. O quadro clínico foi considerado crítico, com o animal comatoso e apresentando febre e pneumonia, sem alterações neurológicas. O hemograma indicou anemia, linfocitopenia e monocitose, além de trombocitopenia. Foram observadas em esfregaço periférico mórulas típicas de Ehrlichia sp. em monócitos, inclusões intraeritrocitárias típicas de Babesia canis, assim como corpúsculo de Sinegaglia-Lentz em um linfócito. O soro foi submetido à reação de imunofluorescência indireta, que acusou anticorpos específicos IgG anti-e. canis, e no inquérito viral, foi utilizado o método de imunoensaio cromatográfico, sendo confirmada a presença de antígenos do 1 MV, MSc. Setor de Patologia Clínica / HV / UENF. farlenuenf@yahoo.com.br 2 MV, MSc. DSc. Prof. Associado / CCTA / UENF. 3 MV, MSc. CCTA / UENF. 4 Biólogo. CCTA/UENF. 5 MV, MSc, DSc. CCTA/UENF. 6 MV, MSc, DSc. Prof. Titular / CCTA / UENF. 238

2 vírus da cinomose, caracterizando a infecção. O animal foi tratado, mas não houve sucesso na terapia, com o óbito ocorrendo no dia seguinte. Palavras-chave: Hemoparasitose, cão, sorologia. Abstract This work reports a case of an eight-months- old female dog, which was evaluated at the Veterinary Hospital of the Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro. The owner reported cough, eye secretions, hiporexia and neurological signs. The dog was not vaccinated, was comatose and had fever and pneumonia, but no neurological signs. The hematology indicated normocytic normochromic anemia, lymphocytopenia, monocytosis and thrombocytopenia. In the blood smear, it was observed typical morulae of Ehrlichia sp. in monocytes, Babesia canis inclusions in erytrocites and Sinegaglia-Lentz inclusion body in lymphocyte. The serum was submitted to the Indirect Immunofluorescence Test which showed anti-e. canis IgG antibodies. The viral investigation, evaluated by Immunochromatography Test, confirmed the presence of canine distemper virus antigens, that confirm the infection. The animal was treated, but died one day after treatment. Key words: Cellular inclusions, dog, serology Resumen Se relata el caso de una perra sin raza definida de ocho meses de edad, que fue atendida en el Hospital Veterinario de la Universidad Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro En la historia clínica fue relatado hace un mes tos, secreción ocular, hiporexia y temblores, además de la información de la no vacunación del animal. El cuadro clínico fue considerado crítico, con el animal comatoso y presentando fiebre y neumonía, sin alteraciones neurológicas. El hemograma indicó anemia, linfopenia y monocitosis además trombocitopenia. Fueron observadas mórulas típicas de Ehrlichia sp. en monocitos, además de grandes inclusiones intraeritrocitárias típicas de Babesia canis, así como, corpúsculos de Lentz- Sinigaglia- en un linfocito. El suero fue sometido a reacción de Inmunofluorescencia indirecta mostrando anticuerpos específicos IgG anti-e. canis, y la presencia de antígenos de virus de moquillo canino al 239

3 método de inmunoensayo cromatográfico caracterizando la infección. El animal fue tratado, pero la terapia no tuvo éxito, ocurriendo el óbito al siguiente día. Palabras clave: Hemoparasitosis, perro, serología. Introdução A erliquiose canina é causada por microrganismos do gênero Ehrlichia, riquétsias parasitas de leucócitos e plaquetas, enquanto a babesiose tem como agentes etiológicos protozoários intracelulares do gênero Babesia 1. Ambas as doenças são transmitidas ao cão pela picada do carrapato Rhipicephalus sanguineus através de sua secreção salivar 2, e possuem características clínicas variáveis e inespecíficas, podendo o hospedeiro apresentar infecções leves a severas e ir a óbito 3,4. Achados de mórulas em monócitos confirmam o diagnóstico de erliquiose canina através da visualização destas estruturas citoplasmáticas, sendo uma técnica importante de diagnóstico. Entretanto, essa observação é bastante dificultada em casos crônicos 5. Nestes casos o diagnóstico deve levar em consideração as observações clínicas e hematológicas 6, apesar das manifestações clínicas serem inespecíficas 7. Apatia, inapetência, hipertermia, mucosas pálidas e hemorragia, linfoadenopatia, esplenomegalia e uveítes se enquadram nos sinais clínicos comuns em eliquiose 8. A babesiose canina é causada por protozoários intraeritrocitários do gênero Babesia, e acomete canídeos silvestres e domésticos. É uma doença em que se observa frequentemente febre, apatia e anemia 9. Pesquisas moleculares têm mostrado a existência de três subespécies, B. canis canis, B. canis vogeli e B. canis rossi 10,11. Na maioria das vezes o diagnóstico citológico é dificultado pela baixa parasitemia e a 240

4 doença não é confirmada. Neste caso o diagnóstico sorológico é importante, principalmente para estudos epidemiológicos 12. Apesar do R. sanguineous ser o principal vetor da babesiose canina no Brasil, já foi observada a presença do parasito em outros carrapatos, como Amblyomma cajennense e Boophilus microplus 13. Na América do Sul predomina a subespécie B. canis vogeli, que comumente ocasiona doença de média gravidade, muitas vezes sem evidência clínica 14. A cinomose canina é causada por um vírus do tipo RNA de fita simples negativa, membro da família Paramixoviridae e do gênero Morbillivirus. Trata-se de uma doença caracterizada por imunossupressão seguida de infecções secundárias, com os órgãos linfóides sofrendo hipotrofia a partir do décimo dia de infecção 15,16. Os sinais clínicos incluem apatia, ataxia, paraplegia, tetraplegia, atrofia muscular e hiperestesia, mioclonias, tremores, incontinência, convulsão e coma 17. Relato de caso Uma cadela sem raça definida de oito meses de idade foi atendida no ambulatório do Hospital Veterinário da Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro, com quadro clínico grave e inespecífico. No histórico o proprietário revelou que o animal tossia muito havia um mês, e que apresentava secreção ocular há 15 dias, além da ocorrência de hiporexia e tremores. Ao ser questionado na anamnese, o proprietário relatou que o animal não era vacinado, e que um outro cão da casa havia sido diagnosticado como portador de erliquiose. O paciente se apresentava comatoso, sendo ainda observada a presença de carrapatos, além de pirexia, bradicardia, mucosas pálidas e alteração na dígito percussão, com área pulmonar ventral comprometida bilateralmente. Foram coletados sangue venoso total com e sem anticoagulante (05 e 02 ml, respectivamente) para a realização de hemograma e sorologia. Os testes 241

5 sorológicos utilizados foram a imunofluorescência indireta RIFI (Kit Imunodot e microscópio modelo Jenalumar Zeiss ) visando a detecção de anticorpos anti-e. canis, e o Imunoensaio Cromatográfico IC, em laboratório particular, para detectar antígenos do vírus da cinomose canina. O sangue periférico foi coletado por punção auricular interna com agulha fina. O hemograma demonstrou anemia normocítica normocrômica, linfocitopenia relativa e absoluta, monocitose relativa e absoluta, e trombocitopenia. Os achados hematológicos observados são comuns em erliquiose, com agravamento do quadro até hipoplasia medular com pancitopenia em cronificações devido à lesão medular. Entretanto, não foi observada leucocitose, que ocorre normalmente entre duas a três semanas após a infecção como consequência de hiperplasia medular 8. À observação do esfregaço sanguíneo periférico (Figura 1), foram constatados mórula de Ehrlichia sp. em monócitos e grandes inclusões intraeritrocitárias piriformes típicas de B. canis 18. No entanto, também se observou corpúsculo de Sinegaglia- Lentz em um linfócito, fortalecendo também a suspeita de cinomose, que foi posteriormente confirmada pela positividade ao método de IC, caracterizando a infecção pela constatação de antígenos virais específicos. O IC é um teste qualitativo direto e é aplicável após 14 dias da vacinação, quando os antígenos virais vacinais encontramse em concentrações muito baixas para serem detectados. O teste de imunofluorescência indireta confirmou a presença de anticorpos IgG anti-e. canis, indicando contato prévio com tal agente. Em alguns casos deve-se analisar com critério os resultados sorológicos, já que IgG anti-e. canis só é detectável na circulação 15 dias após infecções naturais 19,20. Por outro lado, em infecções tardias ou crônicas, cães infectados podem não ser considerados positivos pela PCR por causa da baixa parasitemia

6 O animal foi submetido à fluidoterapia endovenosa e recebeu tetraciclina na dose de 10mg.Kg -1 (IM), mas não respondeu satisfatoriamente à medicação e foi a óbito no dia seguinte. Figura 1: Fotografias demonstrativas de esfregaço de sangue periférico de cão corados em Panótico (NeuProv). Uma plaqueta contendo mórulas de Ehrlichia sp. (A), inclusões piriformes intraeritrocitária de Babesia canis (B) e corpúsculo de Sinegaglia-Lentz em um linfócito (C). Aumento de 1000x, zoom óptico de 2,8x. Laboratório de Patologia Clínica/HV/UENF, 2010 Possivelmente 3,44% dos cães portadores de erliquiose também estão infectados por outros hemoparasitas 21, sendo que a coinfecção é capaz de provocar a piora do quadro clínico, pois um agente pode potencializar a ação patogênica do outro 22. Erliquiose e babesiose são endêmicas e assumem considerável importância clínica na região em questão, com positividade de 13,89% e 1,47% em esfregaço periférico, respectivamente 23,24. No entanto, ainda não há estudos epidemiológicos acerca da cinomose canina na região, embora quadros clínicos típicos sejam frequentes em clínicas e ambulatórios. Esse quadro é influenciado pela não vacinação de considerável parte da população de cães e possivelmente da utilização de vacinas comercializadas não oriundas de clínicas veterinárias que, muitas vezes, não sofreram acondicionamento adequado. Como conclusão, sugere-se que o quadro clínico grave observado 243

7 e o óbito tenham ocorrido em virtude da ação simultânea dos três patógenos em questão. É ainda o primeiro relato desta co-infecção na região estudada. Existe aumento da probabilidade de ocorrência de hemorragias na co-infecção entre erliquiose e babesiose 25, no entanto, apesar do quadro clínico crítico, esta condição não foi observada, tampouco o proprietário a relatou. Uma diminuição significativa de quadros hemorrágicos em casos de erliquiose vem sendo notada no Estado do Rio de Janeiro, possivelmente em decorrência da adaptação parasito-hospedeiro ou da cepa infectante 1. REFERÊNCIAS 1. Almosny NRP, Massard CL. Erliquiose em Pequenos Animais Domésticos e como Zoonose. In: Almosny NRP et al. (2002). Hemoparasitoses em Pequenos Animais Domésticos e como Zoonoses. Rio de Janeiro: Editora LF Livros de Veterinária Ltda, Labruna MB, Pereira MC (2001). Carrapatos em cães no Brasil. Clínica Veterinária, 6: Morais HA et al. (2004). Diretrizes gerais para diagnóstico e manejo de cães infectados por Ehrlichia spp. Clínica Veterinária, 9: Oriá AP, Pereira PM, Laus JL (2004). Uveitis in dogs infected with Ehrlichia canis. Ciência Rural, 34: Moreira SM, Machado R, Passos LF (2005). Detection of Ehrlichia canis in bone marrow aspirates of experimentally infected dogs. Ciência Rural, 35: Cohn LA (2003). Ehrlichiosis and related infections, Veterinary Clinics of North America Small Animal Practice, 33:

8 7. Waner T et al. (2001) Significance of serological testing for ehrlichial diseases in dogs with special emphasis on the diagnosis of canine monocytic ehrlichiosis caused by Ehrlichia canis. Veterinary Parasitology, 95, Nakaghi ACH et al. (2008). Canine ehrlichiosis: clinical, hematological, serological and molecular aspects. Ciência Rural, 38: Kuttler KL (1988). Worldwide impact of babesiosis. In: Ristic, M. (Ed.), Babesiosis of Domestic Animals and Man. CRC Press, Boca Raton, pp Carret C et al. (1999). Babesia canis canis, Babesia canis vogeli, Babesia canis rossi: differentiation of the three subspecies by a restriction fragment length polymorphism analysis on amplified small subunit ribosomal RNA genes. The Journal of Eukaryotic Microbiology, 46: Zahler M et al. (2000). Babesia gibsoni of dogs from North America and Asia belong to different species. Parasitology, 120: Levy MG, Breitschwerdt EB, Moncol DJ (1987). Antibody activity to Babesia canis in dogs in North Carolina. Journal of the American Veterinary Medical Association, 48: Costa-Júnior LM et al (2009) Canine babesiosis caused by Babesia canis vogeli in rural areas of the State of Minas Gerais, Brazil and factors associated with its seroprevalence. Research in Veterinary Science, 86: Caccio SM et al. (2002). Molecular characterisation of Babesia canis canis and Babesia canis vogeli from naturally infected European dogs. Veterinary Parasitology, 106: Krakowka S, Higgins RJ, Koestner A (1980). Canine distemper virus: review of structural and functional modulations in lymphoid tissues. American Journal of Veterinary Research, 41:

9 16. Lamb AB, Kolakofsky D. Paramyxoviridae: the viruses and their replication. In: Fields BN, Knipe DM, Howley PM (1996). Fundamental virology, 3.ed. Philadelphia: Lippincott- Raven, Tipold A et al. (1996). Neurological signs in canine distemper encephalomyelitis a clinical study. European Journal of Companion Animal Practice, 6: Klinefelter MR (1982). Cause, diagnosis and treatment of canine piroplasmosis. Veterinary Medicine, Small Animal Clinician, 77: Weisiger RM, Ristic, M, Huxsoll DL (1975). Kinetics of antibody response to Ehrlichia canis assayed by the indirect fluorescent antibody method. Am. J. Vet. Res. 36, Waner T et al. (1996b). Detection of ehrlichial antigen in plasma of beagle dogs with experimental acute Ehrlichia canis infection. Vet. Parasitol. 63, Moreira SM et al. (2003). Retrospective study ( ) on canine ehrlichiosis in Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, 55: Harikrishnan TJN, Pazhanivel JC (2005). Concomitant Babesia gibsoni and Ehrlichia canis infection in a dog. Veterinarski Arhiv, 75: Albernaz AP et al. (2007). Erliquiose canina em Campos dos Goytacazes, Rio de Janeiro, Brasil. Ciência Animal Brasileira, 8: Miranda FJB et al. (2008). Freqüência de cães infectados por Babesia spp. em Campos dos Goytacazes, RJ. Ciência Animal Brasileira, 9: Trapp SM et al. (2006). Seroepidemiology of canine babesiosis and ehrlichiosis in a hospital population. Veterinary Parasitology, 140: Recebido em: Março de 2010 Aceito em: Janeiro de 2011 Publicado em: Fevereiro de