VERIFICAÇÃO E VALIDAÇÃO DE MÉTODOS ANALÍTICOS

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1 0 /9. CAMPO DE APLICAÇÃO.. Ete procedmeto e aplca ao Laboratóro Químco de Cotrole da Qualdade.. OBJETIVO.. Verfcar o método aalítco ormalzado, cuja aplcação permaeça detro do ecopo para o qual fo deevolvdo;.. Valdar o método aalítco ão ormalzado, deevolvdo pelo laboratóro, modfcaçõe de método ormalzado e/ou aquele aplcado fora do ecopo para a qua foram cocebdo. 3. EQUIPE RESPONSÁVEL 3.. Todo o colaboradore do Laboratóro de Cotrole de Qualdade, cludo etagáro upervoado, que teham recebdo treameto para ete POP.. HIGIENE E SEGURANÇA.. O equpameto de proteção dvdual (EPI) eceáro para a execução dee procedmeto devem obedecer ao precozado para a aále de cada parâmetro, coforme decrto em eu repectvo POP. 5. DEFINIÇÕES 5.. Ajute: Cojuto de operaçõe efetuada em um tema de medção de modo que ele foreça dcaçõe precrta correpodete a determado valore de uma gradeza a er medda; 5.. Braco do método: Água ultrapura ou outra matrz cotedo todo o reagete que ormalmete etão em cotato com a amotra durate toda a etapa do procedmeto aalítco; 5.3. Comparação terlaboratoral: Orgazação, deempeho e avalação de medçõe ou eao o memo ou em te mlare por do ou ma laboratóro, de acordo com a codçõe predetermada; 5.. Curva aalítca: Expreão da relação etre a aalítco (dcaçõe) e o valor meddo (gradeza) ao logo de uma determada faxa; 5.5. Eao de profcêca: Determação do deempeho de eao de laboratóro por meo de comparação terlaboratoral; 5.6. Erro de medção: Dfereça etre o valor meddo de uma gradeza e um valor de referêca; 5.7. Erro temátco: Compoete do erro de medção que, em medçõe repetda, permaece cotate ou vara de maera prevível; 5.8. Ecopo: Forecmeto de evdêca objetva de que um dado tem atfaz requto epecfcado; 5.9. Exatdão de medção: Grau de cocordâca etre um valor meddo e um valor verdadero de um meurado; 5.0. Faxa de trabalho: Faxa de cocetração do aalto a qual o método pode er aplcado; 5.. Fator: Varável quattatva ou qualtatva que pode afetar o reultado com bae a matrz de expermeto; 5.. Gradeza: Propredade de um feômeo, corpo ou de uma ubtâca que pode er exprea quattatvamete ob a forma de um úmero ou referêca (udade de medda, procedmeto de medção, materal de referêca ou uma combação dete); Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

2 0 / Heterocedatcdade: Auêca de homocedatcdade, to é, a varâca do dferete íve de cocetração ão ão homogêea. Ifere-e que o modelo matemátco do mímo quadrado ordáro (regreão lear mple) aplcado a correlação etre a medçõe ob dferete íve de cocetração ão é aproprado; 5.. Homocedatcdade: Termo para degar a varâca homogêea em dferete íve de cocetração; 5.5. Icerteza de medção: Parâmetro ão egatvo que caracterza a dperão do valore atrbuído a um meurado com bae a formaçõe utlzada; 5.6. Idcação: Valor forecdo por um trumeto de medção ou por um tema de medção (cojuto de um ou ma trumeto de medção frequetemete motado a outro dpotvo, reagete e umo); 5.7. Lmte de detecção: Meor cocetração do aalto, que ob uma determada probabldade, pode er detectada (dcrmada a partr do ruído do braco do método), ma ão ecearamete quatfcada; 5.8. Lmte de quatfcação: Meor cocetração de aalto que pode er determado com precão e exatdão acetáve, ob codçõe expermeta epecífca; 5.9. Lmte de repetbldade: Parâmetro que forma e há dfereça gfcatva de precão etre a aále realzada ob codçõe de repetbldade; 5.0. Lmte de reprodutbldade: Parâmetro que forma e há dfereça gfcatva de precão etre a aále realzada ob codçõe de reprodutbldade; 5.. Leardade: Caracterítca de um método aalítco em produzr reultado que ejam dretamete proporcoa à cocetração do aalto em amotra, em uma dada faxa de cocetração; 5.. Materal de referêca certfcado (MRC): Materal de referêca acompahado de uma documetação emtda por um orgamo com autordade, a qual forece um ou ma valore de propredade epecfcada com a certeza e a ratreabldade aocada, utlzado procedmeto váldo; 5.3. Meurado: Gradeza que e pretede medr; 5.. Precão: Grau de cocordâca etre dcaçõe ou valore meddo, obtdo por medçõe repetda o memo objeto ou em objeto mlare, ob codçõe epecfcada (codçõe de repetbldade, precão termedára ou reprodutbldade); 5.5. Precão termedára: Codção de medção um cojuto de codçõe, a qua compreedem o memo procedmeto de medção, memo local e medçõe repetda o memo objeto ou em objeto mlare, ao logo de um período exteo de tempo, ma pode clur outra codçõe ubmetda a mudaça (ajute, padrõe, operadore, tema de medção, tempo, etc.); 5.6. Quat: Plural de quatl. Cojuto de (-) valore ordeado e coecutvo de uma varável que é dvdda em proporçõe equvalete, ou eja, ubcojuto com a mema quatdade de valore. Quado repreetado em termo percetua, o quat ão deomado percet (plural de percetl). A partr da fução de dtrbução acumulada, tem-e: quat = quartl = 5º percetl = 5% de um cojuto ordeado; 5.7. Recuperação: Medda de efcêca do proceo de olameto do aalto de teree a matrz a qual e ecotra preete; 5.8. Relatóro de valdação: Documeto epecífco de cada método aalítco que decreve o procedmeto, parâmetro e crtéro de acetação, bem como o reultado, a dcuão e cocluão obre o proceo de valdação; 5.9. Repetbldade: Codção de medção um cojuto de codçõe, a qua compreedem o memo procedmeto de medção, o memo operador, o memo tema de medção, a mema codçõe Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

3 0 3/9 de operação, o memo local, am como medçõe repetda o memo objeto ou em objeto mlare durate um curto período de tempo; Reprodutbldade: Codção de medção um cojuto de codçõe, a qua compreedem dferete loca, dferete operadore, dferete tema de medção (com procedmeto aalítco dferete ou ão) e medçõe repetda o memo objeto ou em objeto mlare. Tratae de um parâmetro de valdação obtdo a partr de comparação terlaboratoral ou etudo colaboratvo; 5.3. Reíduo: Dfereça etre o al aalítco meddo e o al aalítco prevto (aceto como verdadero); 5.3. Robutez: Parâmetro que mede a ebldade que um método aalítco apreeta em face de pequea varaçõe. Um método dz-e robuto quado ete for dferete à varaçõe que por vetura poam ocorrer durate a ua execução; Seletvdade: Propredade de um tema de medção, utlzado com um procedmeto de medção epecfcado, egudo a qual o tema forece valore meddo para um ou váro meurado, tal que o valore de cada meurado ejam depedete u do outro ou de outra gradeza aocada ao feômeo, corpo ou ubtâca em etudo; 5.3. Tedêca: Etmatva de um erro temátco; Valdação: Cofrmação por exame e forecmeto de evdêca objetva de que o requto epecífco para um determado uo preteddo ão ateddo; Veracdade: Grau de cocordâca etre a méda de um úmero fto de valore meddo repetdo e um valor de referêca; Verfcação: Avalação de algu parâmetro de valdação de método aalítco quado o método for ormalzado e detro do ecopo; VMP: Valor máxmo permtdo. 6. PLANEJAMENTO DA VALIDAÇÃO 6.. O etudo para determar o parâmetro de valdação devem er realzado com peoal treado, equpameto calbrado e matera de referêca certfcado; 6.. A etapa para a realzação de uma valdação aalítca ão lutrada pela Fgura ; Nota : A valdação pode clur procedmeto para amotragem, maueo e traporte. Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

4 0 /9 Verfcação Valdação Fgura : Etapa para valdação e verfcação de procedmeto aalítco 7. PARÂMETROS DE VALIDAÇÃO 7.. O parâmetro que precam er avalado durate o proceo de valdação podem varar de acordo com o tpo de eao, coforme motrado o Quadro ; Tpo de eao Compoete Elemeto Parâmetro Propredade Qualtatvo (ou aalto) meore e em maor teor traço () fíca Verfcação () Precão x x x x Seletvdade x x x x Tedêca / recuperação x x x Robutez x x x x Sebldade / learedade / faxa de trabalho x x x x Lmte de detecção x x Lmte de quatfcação x x Quadro. Parâmetro de valdação coforme o tpo de eao () São coderado como de meor teor cocetraçõe etre 0,0 a % e elemeto traço, o elemeto em cocetração abaxo de 0,0% () Referete ao método aalítco que permaecem detro do ecopo ormalzado para o qual foram cocebdo Fote: I-Houe Method Valdato - A gude for Chemcal Laboratore LGC / VAM, 003 Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

5 0 5/9 7.. Se o dado de precão (CVr e CRR) e exatdão (exprea pela recuperação) dee método ão etverem dpoíve, utlzar o crtéro defdo a Tabela coforme a faxa de cocetração do aalto a amotra; Tabela. Crtéro de acetação para precão e exatdão em fução da cocetração do aalto Aalto Aalto CVr CVR Recuperação Udade [%] [fração] [%] [%] [%] %, %,8, %, , 0-3 0,% 3,7 5, , ppm 5, , ppm 7,3, , ppm , ppb 5, , ppb () 0, ppb 30 5,3 0-0 () CV r = Coefcete de varação etmado de Horwtz para repetbldade CV R = Coefcete de varação etmado de Horwtz para a reprodutbldade () Recuperação recomedada de 70-0 % egudo Offcal Joural of the Europea Commute () Recuperação recomedada de 50-0 % egudo Offcal Joural of the Europea Commute Fote: AOAC - Peer-Verfed Method Program, maual o polce ad procedure, Arlgto, VA, Nov. 993 Offcal Joural of the Europea Commute, 00/657/EC Nota : O coefcete de varação etmado de Horwtz ão váldo para qualquer método e depede da matrz ou do aalto. Nota 3: Para fraçõe de aalto abaxo de 00 ppb, a aplcação da equação de Horwtz reulta em valore de CVR relatvamete alto e faxa de recuperação relatvamete extea. Portato, para ee íve de cocetração, o referdo crtéro de acetação também poderão etar em cooâca com a referêca ormatva para a determação de aalto ee íve de cocetração (como em cromatografa gaoa, por exemplo). Nota : No cao de avalação terlaboratoral, a reprodutbldade do método aalítco ão deve er maor que o crtéro de acetação obtdo a partr da metade da cocetração máxma etabelecda pela leglação: CV (terlaboratoral) < CV (50% do VMP) A valdação deverá er realzada a equêca lutrada pelo fluxograma da Fgura ; 7.. Regtrar todo o cálculo e dado expermeta o relatóro de valdação; Maor teor Meor teor Traço Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

6 0 6/9 Método deevolvdo Atede Não atede Leardade Atede Não atede Não atede Não atede Seletvdade Atede Lmte de quatfcação Atede Precão Atede Alteração o ecopo aalítco aalítco Não atede Tedêca Atede Não atede Robutez Atede Método valdado Icerteza de medção Fgura : Sequêca de realzação de parâmetro de valdação Nota 5: Adotar apea um procedmeto para avalação de cada um do parâmetro de valdação, cao cotráro jutfcar o relatóro de valdação; Nota 6: Para verfcaçõe de método aalítco ormalzado, adotar procedmeto de acordo com a ordem em que ão decrto ete documeto, em cooâca com a vabldade técca dee método. 8. PROCEDIMENTO 8.. Leardade 8... Preparar pelo meo 6 íve de cocetração, preferecal e gualmete epaçado, ao logo da faxa de trabalho; Nota 7: O braco do método deve er uado para verfcar e aalto ou terferete etão preete o tema aalítco, cotudo ão deve er cluído a curva aalítca, alvo e a vabldade técca do equpameto am determar; Nota 8: Se a faxa de trabalho do método a er valdado for decohecda ou e houver alteração o ecopo aalítco, proceder coforme truçõe do Aexo A; Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

7 0 7/ Aalar 3 replcata depedete para cada ível de cocetração de acordo com o método a er valdado (POP); Nota 9: Recomeda-e que a medçõe do íve de cocetração ejam realzada em ordem aleatóra, dede que eta ão comprometa o a aalítco do meore íve de cocetração; Verfcar a preeça de valore dcrepate pelo tete de Grubb (Aexo B). Ee tete deverá er aplcado em cada ível de cocetração, obedecedo a excluão máxma de até,% de toda a medçõe da curva aalítca; 8... Verfcar a homogeedade de varâca etre íve de cocetração pelo tete de Cochra (Aexo C). Se o reultado for homocedátco, proceder à regreão lear com o ível de cocetração a abca e toda a repota aalítca de cada trplcata a ordeada do gráfco. Se o reultado for heterocedátco, utlzar a traformação poderada (Aexo D); Cotrur o gráfco do reíduo, plotado o ível de cocetração a abca e todo o reíduo de cada trplcata a ordeada (Equação ). A dtrbução do valore em toro da lha cetral deve er aleatóra. Tedêca ea dtrbução caracterzam a preeça de erro temátco ou que o modelo matemátco utlzado para a cotrução da curva é adequado; e = y - ŷ (Equação ) Ode: e = reíduo referete à replcata de cada al aalítco meddo y = al aalítco meddo ŷ =al aalítco prevto (etmado atravé da equação da regreão lear) Verfcar a ormaldade do reíduo atravé do tete de Rya-Joer (Aexo E); Verfcar e o reíduo ão admíve atravé do tete-t ulateral (Equaçõe e 3). Exclur a replcata correpodete ao reíduo e te > ttabelado para (-) grau de lberdade (Aexo F); re = = ( y - ŷ ) - (Equação ) e t e = (Equação 3) Ode: re = devo-padrão do reíduo de todo o íve de cocetração = úmero total de replcata Verfcar a depedêca do reíduo atravé do tete de Durb-Wato (Aexo G); re Verfcar e o tervalo de cofaça para o coefcete lear (ICa) cotém a orgem do gráfco (Equaçõe, 5 e 6). O erro temátco ão ão gfcatvo e a reta de regreão lear paar por ee tervalo; Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

8 0 8/9 a re x = ( x - x) = = (Equação ) x = x = (Equação 5) IC a = a ± t a (Equação 6) Ode: a = devo-padrão do coefcete lear x = méda do íve de cocetração = úmero total de replcata a = coefcete agular t = valor de t-studet blateral para (-) grau de lberdade (Aexo F) Verfcar e o coefcete de correlação da regreão lear (Equação 7) atede ao crtéro de acetação predefdo pelo método; = = ( x - x)( y - y) ( x - x) ( y - y) = r = ode - < r < (Equação 7) Ode: x = méda do íve de cocetração y = méda do a aalítco Nota 0: Curva aalítca poderão er roteramete preparada em replcata por ível de cocetração dede que o crtéro de acetação ejam ateddo. 8.. Seletvdade 8... A partr da recuperação 8... Defr o poto médo da faxa de trabalho; 8... Defr a quatdade de padrão a er adcoado à matrz empregada; Nota : A lmtação dee procedmeto etá o aalto adcoado, po ele ão etá ecearamete a mema forma que a do aalto já preete a matrz. Quado adcoado em uma forma ma faclmete detectável, pode reultar em avalaçõe uperetmada da recuperação. Nota : Recomeda-e que a matrz coteha o dema parâmetro com cocetraçõe emelhate àquela determada a rota aalítca Aalar a matrz fortfcada, em trplcata, de acordo com o método a er valdado (POP); 8... Etmar a recuperação (Equação 8); Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

9 0 9/9 c - c Recuperação [%] c 3 00 Ode: c = cocetração do aalto a amotra fortfcada c = cocetração do aalto a amotra ão fortfcada c3 = cocetração do aalto adcoado à amotra (Equação 8) Comparar o reultado com o crtéro de acetação predefdo (Tabela ); Clafcar como atfatóro e a recuperação etver cotda o vervalo correpodete ao ível de cocetração; Nota 3: A recuperação também poderá er etmada em dferete íve de cocetração da faxa de trabalho, e eceáro A partr da leardade Nota : A curva aalítca preparada para o etudo da leardade deve er empregada como referêca a ee procedmeto Segur todo o tem 8., ubttudo a água ultrapura pela matrz; 8... Verfcar e o coefcete agulare e leare ão etattcamete gua (Aexo H) Lmte de detecção (LD) A partr da leardade Nota 5: A curva aalítca preparada para o etudo da leardade deve er empregada como referêca a ee procedmeto Etmar o lmte de detecção (Equação 9). LD = 3,3 b re (Equação 9) Ode: re = devo-padrão do reíduo de todo o íve de cocetração (Equação 9) b = coefcete agular da curva aalítca Nota 6: O devo-padrão do coefcete lear (Equação ) ou do a aalítco de 7 replcata do braco poderão er alteratvamete empregado o umerador da Equação A partr do braco Aalar 7 replcata do braco de acordo com o método a er valdado (POP); Etmar o lmte de detecção (Equaçõe 0 e ). = - = ( x x) - (Equação 0) Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

10 0 0/9 LD x t (Equação ) Ode: x = méda da cocetraçõe do braco = devo-padrão da cocetraçõe do braco t = valor de t-studet ulateral para (-) grau de lberdade (Aexo F) A partr da meor cocetração acetável do aalto o braco Aalar 7 replcata do padrão de acordo com o método a er valdado (POP); Calcular o coefcete de varação (Equação ) e compará-lo com o crtéro de acetação predefdo (Tabela ); CV = 00 (Equação ) x Etmar o lmte de detecção (Equação 3). LD t (Equação 3) Ode: = devo-padrão da meor cocetração acetável do aalto (Equação 0) t = valor de t-studet ulateral para (-) grau de lberdade (Aexo F) 8.. Lmte de quatfcação (LQ) 8... A partr da leardade 8... Etmar o lmte de quatfcação (Equação ); LQ = 0 b re (Equação ) Ode: re = devo-padrão do reíduo de todo o íve de cocetração (Equação 9) b = coefcete agular da curva aalítca 8... Verfcar e o LQ etmado atede ao crtéro de acetação para precão e exatdão (Tabela ) atravé da aále de 7 replcata preparada a partr da cocetração etmada. Nota 7: O devo-padrão do coefcete lear (Equação ) ou do a aalítco de 7 replcata do braco poderão er alteratvamete empregado o umerador da Equação A partr do braco 8... Aalar 7 replcata do braco de acordo com o método a er valdado (POP); 8... Etmar o lmte de quatfcação (Equação 5); LQ = x +0 (Equação 5) Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

11 0 /9 Ode: x = méda da cocetraçõe do braco = devo-padrão da cocetraçõe do braco Verfcar e o LQ atede ao crtéro de acetação para precão e exatdão (Tabela ) atravé da aále de 7 padrõe preparado com a mema cocetração que fo etmada para o LQ A partr da meor cocetração acetável do aalto o braco Aalar 7 replcata do padrão de acordo com o método a er valdado (POP); Verfcar e o LQ atede ao crtéro de acetação para precão e exatdão (Tabela ); 8... A partr da recuperação 8... Etmar o LQ a partr do prmero ível de cocetração da curva aalítca; Nota 8: Para aalto preete o braco, ee ível de cocetração deve er etmado a partr do trplo do devo-padrão ou da méda da cocetração dee braco (o que for maor); 8... Aalar 7 replcata de acordo com o método a er valdado (POP); Etmar a metade da faxa do tervalo prevto para o reultado (MFIPR) (Equação 6); MF IPR 3,963 (Equação 6) Ode: = devo-padrão da cocetraçõe do braco 3,963 = valor cotate para ete replcata 8... Etmar a recuperaçõe para o tervalo prevto uperor (IPRSUP) e feror (IPRINF) (Equaçõe 7 e 8); IPR IPR SUP INF x MFIPR 00 50% (Equação 7) Cocetração fortfcada x MFIPR 00 50% (Equação 8) Cocetração fortfcada Ode: x = méda da cocetraçõe do braco ou do meor ível de cocetração Verfcar e a recuperaçõe atedem ao crtéro de acetação predefdo (Equaçõe 7 e 8). Em cao afrmatvo, atrbur o ível de cocetração tetado ao valor do LQ do método; Nota 9: A recuperação também poderá er etmada para dferete íve de cocetração da faxa de trabalho, e eceáro Exatdão A partr de programa terlaboratora Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

12 0 / Verfcar e o ível de cocetração correpodete ao z-ecore obtdo pelo eao de profcêca etá cotdo a faxa de trabalho do método a er valdado (POP); Clafcar como atfatóra a tedêca do método e z ; Se uma da etapa dee procedmeto ão forem atfeta, avalar a tedêca a patr de outro crtéro A partr do erro ormalzado Aalar 7 replcata do ível de cocetração a er avalado de acordo com o método a er valdado (POP); Etmar o erro ormalzado (Equação 9); EN = x - x U verdadero + U verdadero (Equação 9) Ode: x = méda da cocetraçõe da replcata xverdadero = valor da cocetração aceto como verdadero U = certeza aocada ao valor expermetal Uverdadero = certeza aocada ao padrão Clafcar como adequada a tedêca do método e EN ; cao cotráro, avalar a tedêca a partr de outro crtéro A partr da recuperação Proceder ao tem A partr do erro relatvo Aalar 7 replcata do ível de cocetração a er avalado de acordo com o método a er valdado (POP); Calcular o erro relatvo (Equação 0); x - x ER[%] = x verdadero verdadero 00 (Equação 0) Ode: x = méda da replcata xverdadero = valor aceto como verdadero a partr de um padrão Comparar o reultado com o crtéro de acetação predefdo (Tabela, Nota ); Nota 0: A tedêca também pode er exprea atravé da recuperação aalítca (Equação ) ode, a prátca, oberva-e a egute equvalêca: ER = RA 00. Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

13 0 3/9 RA[%] = valor valor Obervado Eperado 00 (Equação ) Nota : Recomeda-e que o ível de cocetração eteja protamete dpoível por um padrão. Cao cotráro, preparar o ível de cocetração deejado A partr do tete de hpótee Aalar 7 replcata do ível de cocetração a er avalado de acordo com o método a er valdado (PO); Nota : Recomeda-e que o ível de cocetração eteja protamete dpoível por um padrão. Cao cotráro, preparar o ível de cocetração deejado Calcular o valor de t-studet (Equação ); ( ) μ - x t = (Equação ) Ode: μ = valor aceto como verdadero a partr de um MRC x = méda da replcata = úmero de replcata = devo-padrão da replcata Clafcar como atfatóra a exatdão e t <, Precão A partr da etmatva do lmte de repetbldade Defr o ível de cocetração que erá avalado; Aalar 7 replcata da amotra ou de um padrão de acordo com o método a er valdado (POP); Verfcar a preeça de valore dcrepate pelo tete de Grubb (Aexo B); Calcular o coefcete de varação (Equação ) e compará-lo com o crtéro de acetação predefdo (Tabela ); Clafcar como atfatóro e o CV CVr; Determar o lmte de repetbldade, r (Equação 3); Ode: = devo-padrão da replcata r =,78 (Equação 3) Clafcar como atfatóra a repetbldade e o módulo do erro etre replcata < r. Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

14 0 / A partr da precão termedára (reprodutbldade tera) Defr o ível de cocetração que erá avalado; Aalar 7 replcata da amotra ou de um padrão, por da e por aalta ( da e aalta), de acordo com o método a er valdado (POP); Verfcar a preeça de valore dcrepate pelo tete de Grubb (Aexo B); Calcular o coefcete de varação (Equação ), aplcado o devo-padrão dado pela Equação ; Comparar o coefcete de varação com o crtéro de acetação predefdo (Tabela ); Clafcar como atfatóro e o CV CVR; Determar o lmte de reprodutbldade tera, r (Equação ), aplcado o devopadrão dado pela Equação ; 7 ( ) ( x j - x j ) - j= = = (Equação ) p Ode: (p-) = grau de lberdade = úmero de amotra p = úmero de replcata por amotra j = úmero da amotra = úmero da replcata xj = valor da replcata para a amotra j x = méda artmétca da replcata da amotra j j Clafcar como atfatóra a precão termedára e o módulo do erro etre replcata < r; Nota 3: Na maora do cao, o valor de precão termedára é fução do ível de cocetração do eao Reprodutbldade A partr de programa terlaboratora Verfcar e o ível de cocetração da amotra forecda pelo provedor etá cotdo a faxa de trabalho do método a er valdado (POP); Aalar a quatdade de replcata ugerda pelo provedor do eao de profcêca (ou do etudo colaboratvo, e for o cao) de acordo com o método a er valdado (POP); Verfcar a preeça de valore dcrepate pelo tete de Grubb (Aexo B); Determar o lmte de reprodutbldade, R (Equação 5); ( + ) R =,78 (Equação 5) detro etre Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

15 0 5/9 Ode: detro = méda da varâca do reultado de cada laboratóro ( deve er meor que etre etre ) = varâca da méda do reultado de cada laboratóro detro Clafcar como atfatóra a reprodutbldade do método e a dfereça etre o valor médo de oa replcata e o valor médo de todo o grupo for meor que o lmte de reprodutbldade A partr do tete de hpótee Defr o ível de cocetração que erá avalado; Aalar 7 replcata da amotra ou de um padrão para cada um do método ob comparação; Verfcar a preeça de valore dcrepate pelo tete de Grubb (Aexo B); Comparar o valor calculado (Equação 6) com o F-tabelado (Aexo I). Se F < Ftabelado, etão a precão etre o método é coderada etattcamete gual; re re F = (Equação 6) Ode: re = maor valor ecotrado de varâca da replcata re = meor valor ecotrado de varâca da replcata Nota : Na extêca de método de referêca valdado com o qua poam er comparada a caracterítca de precão, o valore acetáve de repetbldade e reprodutbldade podem er calculado a partr da equaçõe de Horwtz (Equaçõe 7 e 8). A forma ma adequada para e avalar a acetabldade da precão de um método cote o uo do valor de HorRat (Equação 9). Am, codera-e a reprodutbldade do método atfatóra e HorRat. ( -0,5logC) CV = (Equação 7) R CV r = 0,67CV R (Equação 8) CVR( expermetal ) HorRat = (Equação 9) CV R Ode: CVR = coefcete de varação etmado de Horwtz para reprodutbldade obtda a partr de etudo colaboratvo (expreo em %) CVr = coefcete de varação etmado de Horwtz para repetbldade (expreo em %) C = cocetração (exprea em fração decmal) HorRat = Horwtz Rato CVR (expermetal) = coefcete de varação do método ob avalação a partr de etudo tra ou terlaboratoral (expreo em %) Nota 5: Na mpobldade de obteção do CVR (expermetal), poder-e-á aplcar o CVr (expermetal) ao umerador da razão de Horwtz (embora o prmero procedmeto eja o deal), coderado-e o memo deomador. Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

16 0 6/ Robutez Defr o fatore crítco ao método aalítco (por exemplo: temperatura, comprmeto de oda, etc.); Nota 6: Do valore erão atrbuído por fator (por exemplo: temperatura A = 0 C e temperatura a = 5 C) Preparar uma matrz de expermeto baeada a Tabela 3; Nota 7: O úmero de expermeto erá gual ao úmero de fatore ma um (NE = NF + ). Tabela 3. Matrz de expermeto de Plackett-Burma Valor do fatore Expermeto A a A A A A a a a a B b B B b b B B b b C c C c C c C c C c D d D D d d d d D D E e E e E e e E e E F f F f f F F f f F G g G g g G g G G g Reultado t u v w x y z Realzar o expermeto em trplcata de acordo com o método a er valdado (PO), obedecedo à combaçõe de fatore dcada pela matrz; Calcular o efeto de cada fator (Equação 30); Dx = reultado(maúculo) reultado(múculo) m - m (Equação 30) Ode: Dx = efeto do fator reultado (Maúculo) = reultado aalítco correpodete ao expermeto que cotemplam o fator detfcado pela letra maúcula (para o fator C, por exemplo, o reultado ão:, u, w e y) reultado (Múculo) = reultado aalítco correpodete ao expermeto que cotemplam o fator detfcado pela letra múcula (para o fator c, por exemplo, o reulado ão: t, v, x e z) m = metade do úmero de expermeto Verfcar e há dfereça a varação de cada fator atravé do tete-t (Equação 3), comparado-o com o valor ulateral para (-) grau de lberdade (Aexo F). Se tx < ttabelado, etão o efeto do fator x ão é gfcatvo; Nota 8: Um exemplo de avalação de robutez é dado pelo Aexo J. Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

17 0 7/9 Ode: Dx = efeto do fator m = metade do úmero de expermeto = devo-padrão do método Dx m t x = (Equação 3) Nota 9: Empregar o devo-padrão poderado e o expermeto cotver váro íve de cocetração. 9. REFERÊNCIAS 9.. NBR ISO/IEC 705 Requto gera para competêca de laboratóro de eao e calbração, ABNT, 005; 9.. VIM Vocabuláro teracoal de metrologa, ª edção luo-bralera, Imetro, 0; 9.3. RE 899 Gua para valdação de método aalítco e boaalítco, Ava, 003; 9.. NIE-DIMEL-06 Crtéro para valdação de método de eao, Imetro, 005; 9.5. DOQ-CGCRE-008_0 Oretação obre valdação de método aalítco, Imetro, 0; 9.6. DOQ-CGCRE-00_05 Defçõe de termo utlzado o documeto relacoado à acredtação de laboratóro, produtore de matera de referêca e provedore de eao de profcêca, Imetro, 0; 9.7. NIT-DICLA-57_0 Crtéro para acredtação da amotragem de água e matrze ambeta, Imetro, 00; 9.8. ISO 575- Bac method for the determato of repeatablty ad reproducblty of a tadard meauremet method, 99; 9.9. Harmozed gudele for gle-laboratory valdato of method of aaly, IUPAC techcal report, Pure Appl. Chem., vol. 7,. 5, pp , 00; 9.0. Valdação de método de eao (Mery do Sato Flho), apotla da Rede Metrológca do Etado de São Paulo, 00; 9.. Valdação de método aalítco (Clede Baa Barro), apotla do Cetro de Educação Profoal, 0; 9.. Stattc ad chemometrc for aalytcal chemtry, 5th edto, J. N. Mller & J. C. Mller, 005; 9.3. Valdação de metodologa para aále fíco-químca (Roberto Goçalve Juquera), IX Smpóo teracoal ABRAPA de ocudade de almeto, 00; 9.. Procedmeto para valdação tralaboratoral de método de eao: Deleameto e aplcabldade em aále de almeto (Shela Vtoro Carvalho de Souza), Tee de doutorado, UFMG, 007; 9.5. The fte for purpoe for aalytcal method: A laboratory gude to method valdato ad related topc, EuraChem, 998; 9.6. How to meet ISO 705 requremet for method verfcato: ALACC Gude, AOAC teratoal, 007; 9.7. Offcal joural of the europea commute: Implemetg coucl drectve 96/3/EC cocerg the performace of aalytcal method ad the terpretato of reult, 00; 9.8. Techcal ote 7: Gudele for the valdato of quattatve ad qualtatve method. NATA, 0; Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

18 0 8/ EPA 860B - Volatle orgac compoud by ga chromatography ma pectrometry (GCMS), U.S. Evrometal Protecto Agecy, 996; 9.0. EPA 870D - Semvolatle orgac compoud by ga chromatography ma pectrometry (GCMS), U.S. Evrometal Protecto Agecy, 998; 9.. EPA Meauremet of purgeable orgac compoud water by capllary colum ga chromatography ma pectrometry (CGMS), U.S. Evrometal Protecto Agecy, 009; 9.. EPA Determato of emvolatve orgac chemcal drkg water by old phae extracto ad capllary colum ga chromatography ma pectrometry (CGMS), U.S. Evrometal Protecto Agecy, ANEXOS 0.. Aexo A: Determação da Faxa de Trabalho 0.. Aexo B: Tete de Grubb 0.3. Aexo C: Tete de Cochra 0.. Aexo D: Traformação Poderada 0.5. Aexo E: Tete de Rya-Joer 0.6. Aexo F: Dtrbução t-studet 0.7. Aexo G: Tete de Durb-Wato 0.8. Aexo H: Tete t-studet 0.9. Aexo I: Dtrbução F-Sedecor/Fher 0.0. Aexo J: Exemplo de Avalação de Robutez Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

19 0 9/9 ANEXO A: DETEMINAÇÃO DA FAIXA DE TRABALHO a. Para qualquer método quattatvo, exte uma faxa de cocetraçõe do aalto ou de valore de uma dada propredade a qual o método pode er aplcado. Ea determação é cada pela ecolha de uma faxa prelmar (Etapa do Quadro A.); b. A faxa de trabalho deve cobrr a faxa de aplcação para a qual o eao va er uado, cuja cocetração ma eperada deve, empre que poível, e tuar o cetro dea faxa (Etapa e 3 do Quadro A.); c. No lmte feror, o fator lmtate é o valor do lmte de quatfcação. No lmte uperor, o fatore lmtate depedem do tema de repota do equpameto de medção; d. Detro da faxa de trabalho a repota do al terá uma relação lear com o aalto, ode ua exteão deve er etabelecda durate a avalação dea faxa. Etapa (replcata) Etapa ( 7) Matrz Água ultrapura com adção de cocetraçõe varada do aalto Ob.: Preparar dferete cocetraçõe de modo depedete e ão alíquota da mema olução mãe Procedmeto Objetvo: Idetfcar calmete, por obervação vual, a faxa lear aproxmada e o lmte feror e uperor da faxa de trabalho ) Colocar o exo x a cocetraçõe do aalto e o exo y, ua repectva repota de medção ) Ir para a etapa Etapa ( 7) Dferete cocetraçõe de matera de referêca a faxa lear Objetvo: Determar a faxa de trabalho e cofrmar a leardade ) Colocar o exo x a cocetraçõe do aalto e o exo y, ua repectva repota de medção ) Verfcar vualmete a extêca de dpero que poam terferr a regreão (ate de remover o dpero, fazer determaçõe a proxmdade da cocetraçõe) ) Calcular o coefcete da reta de regreão v) Calcular e fazer o gráfco do valore do reíduo v) Ir para a etapa 3 Etapa 3 ( 7) Água ultrapura com adção de cocetraçõe varada do aalto próxma ao lmte de detecção (LD) Objetvo: Determar o lmte de quatfcação (LQ), que efetvamete forma o lmte ma baxo da faxa de trabalho ) Exprear o LQ como a cocetração ma baxa do aalto que pode er determada com um ível acetável de certeza Quadro A.: Método para determação da faxa lear e faxa de trabalho Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

20 0 0/9 ANEXO B: TESTE DE GRUBBS Procedmeto: a. Colocar o valore em ordem crecete; b. Calcular a méda e o devo-padrão dee valore (Equaçõe 5 e 0); c. Proceder ao tete de Grubb para cada um do valore da extremdade (Equação B.); G calculado Ode: x = valor upeto x = méda da replcata = devo-padrão da replcata = x - x (Equação B.) d. Comparar o valor obtdo com o valor tabelado (Tabela B.); Tabela B.: Valore crítco de Grubb para um ível de cofaça de 95% Valor 3,5,8 5,75 6,887 7,00 8,7 9,5 0,90,355, 3,6,507 5,59 6,586 7,60 8,65 9,68 0,708 30,908 = úmero de amotra e. Decartar o valor upeto e Gcalculado > Gtabelado; f. Recar o procedmeto, executado a etapa aterore. Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

21 0 /9 ANEXO C: TESTE DE COCHRAN Procedmeto: a. Calcular a varâca de cada um do íve de cocetração; b. Proceder ao tete de Cochra (Equação C.); calculado máx C = (Equação C.) 3 = Ode: máx = maor valor de varâca detre o íve de cocetração = = omatóro da varâca de todo o íve de cocetração c. Comparar o valor obtdo com o valor tabelado (Tabela C.); Tabela C.: Valore crítco de Cochra para um ível de cofaça de 95% NC Valor (p=3) 0, ,8709 0, , ,66 7 0,56 8 0, , ,0 NC = úmero de íve de cocetração ou varâca p = úmero de replcata por cocetração d. Se Ccalculado < Ctabelado, etão haverá homocedatcdade etre o íve de cocetração; cao cotráro, a codção erá de heterocedatcdade. Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

22 0 /9 ANEXO D: TRANSFORMAÇÃO PONDERADA Procedmeto: a. Calcular o fator de poderação para cada ível de cocetração (Equação D.); = w = (Equação D.) Ode: w = fator de poderação do ível de cocetração = varâca do ível de cocetração = úmero total de replcata b. Calcular a méda poderada do íve de cocetração (Equação D.); x w = x w = w x (Equação D.) Ode: = méda poderada do íve de cocetração x = ível de cocetração c. Calcular a méda poderada do a aalítco (Equação D.3); Ode: y w = y w = w y (Equação D.3) = méda poderada do a aalítco y = al aalítco de cada replcata do ível de cocetração d. Calcular o coefcete agular poderado (Equação D.); b w = = w x y - x = w x w - x Ode: bw = coefcete agular poderado e. Calcular o coefcete lear poderado (Equação D.5); Ode: aw = coefcete lear poderado w w w w w y w (Equação D.) a = y - b x (Equação D.5) f. Determar a cocetração do aalto a amotra (Equação D.6) y - a x = b Ode: x = cocetração do aalto a amotra y = al aalítco do aalto a amotra w w (Equação D.6) Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

23 0 3/9 ANEXO E: TESTE DE RYAN-JOINER Procedmeto: a. Calcular o reíduo de cada replcata (Equação E.); e = y - ŷ (Equação E.) Ode: e = reíduo correpodete à replcata y = al aalítco meddo ŷ = al aalítco etmado atravé da equação da regreão lear b. Ordear o reíduo em ordem crecete; c. Calcular o quat orma (Equação E.); 3-8 q = + Ode: q = quatl eperado = valor do reíduo ordeado de poção = úmero total de replcata (Equação E.) d. Cotrur um gráfco do valore do reíduo veru o valore do quat etmado para uma dtrbução ormal reduzda (quat orma); e. Calcular o coefcete de correlação crítco para um ível de cofaça de 95% (Equação E.3); 0,88 0,68,3505 rcrítco, (Equação E.3) Ode: = úmero total de replcata f. Comparar o valor obtdo com coefcete de correlação gerado pelo gráfco. Se r > rcrítco, etão há díco de ormaldade do reíduo da regreão lear. Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

24 0 /9 ANEXO F: DISTRIBUIÇÃO T-STUDENT Tabela F.. Valore crítco de t-studet para um ível de cofaça de 95% Grau de lberdade Ulateral Blateral (ν) (α/ = 0,05) (α = 0,05) 6,3,706,90,303 3,353 3,8,3,776 5,05,57 6,93,7 7,895,365 8,860,306 9,833,6 0,8,8,796,0,78,79 3,77,60,76,5 5,753,3 6,76,0 7,70,0 8,73,0 9,79,093 0,75,086,7,080,77,07 3,7,069,7,06 5,708,060 6,706,056 7,703,05 8,70,08 9,699,05,65,960 α = ível de gfcâca Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

25 0 5/9 ANEXO G: TESTE DE DURBIN-WATSON Procedmeto: a. Calcular o valor d (Equação G.); (e - e - ) = d = (Equação G.) e = b. Calcular o lmte crítco di (feror) e ds (uperor) em um ível de cofaça de 95% (Equaçõe G. e G.3);,8607 3,8 6,600 di, (Equação G.) 3,057,386 6,366 ds, (Equação G.3) Ode: e = reíduo correpodete à replcata = úmero total de replcata c. Avalar o reultado com o egute crtéro: Se d etver etre o lmte crítco, etão o tete é cocluvo; Se d < di, etão há díco de autocorrelação de reíduo; Se d > ds, etão há díco de depedêca de reíduo. Nota G.: Se houver autocorrelação de reíduo, etão o modelo matemátco do mímo quadrado ordáro (regreão lear mple) aplcado a correlação etre a medçõe ob dferete íve de cocetração ão é aproprado. Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

26 0 6/9 ANEXO H: TESTES DE F-FISCHER E T-STUDENT Procedmeto: a. Verfcar a homogeeade de varâca de amba a curva aalítca atravé do tete F de Fher (Equação H.); re re F = (Equação H.) Ode: re = maor valor ecotrado de varâca redual re = meor valor ecotrado de varâca redual b. Comparar o valor obtdo com o F-tabelado. Se F < Ftabelado (homocedatcdade), etão proceder ao tete t de Studet, empregado a Equaçõe H., H.3, H. e H.5. Cao cotráro (heterocedatcdade), proceder ao tete t de Studet, empregado a Equaçõe H.6, H.7 e H.8; c. Comparar o valor calculado com o t-tabelado (Aexo F). Se ta e tb< ttabelado, etão a hpótee de efeto da matrz é rejetada (a curva aalítca preparada com a água ultrapura e a matrz ão etattcamete gua). Cao cotráro, a medçõe deverão er realzada com bae a curva aalítca preparada a partr da matrz. t b = S b p xx - b + S p xx (Equação H.) S xx = ( x - x) (Equação H.3) = Ode: x = cocetração de cada replcata correpodete a todo o íve de cocetração x = méda de toda a replcata p = ( - ) + ( - ) re + - re (Equação H.) Ode: b e b = coefcete agulare p = varâca combada Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

27 0 7/9 t a = p = x S a - a xx + p = x S xx (Equação H.5) Ode: a e a = coefcete leare t b = S b re xx - b + S re xx (Equação H.6) t a = re = S xx a x - a + re = x S xx (Equação H.7) ν = re re - re + + re (Equação H.8) Ode: ν = grau de lberdade Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

28 0 8/9 ANEXO I: DISTRIBUIÇÃO F-SNEDECOR/FISHER ν = grau de lberdade para o umerador ν = grau de lberdade para o deomador Quadro I.. Valore para a dtrbução ulateral F de Fher-Sedecor com ível de cofaça de 95% Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()

29 0 9/9 ANEXO J: EXEMPLO DE AVALIAÇÃO DE ROBUSTEZ Dado: a. Elaboração da matrz de expermeto para determação do aalto por cromatografa (Quadro J.); b. Expermeto avalado atravé de replcata com padrõe em 3 íve de cocetração (mg/kg); c. Para cada replcata fo efetuado toda a equêca do método aalítco; d. Devo-padrão poderado = 0,67 mg/kg (ν = 9 grau de lberdade); e. Cálculo do efeto do fatore, bem como da etatítca t para cada um dele; f. Comparação com o valor crítco (t =,833) e cocluão. Idetfcação do fatore Valor do fatore Expermeto Idade da colua ova (A) velha (a) A A A A a a a A Velocdade do fluxo 0,8mL/m (B), ml/m (b) B B b b B B b B Varável magára (erte) + (C) - (c) C c C c C c C C Fae móvel (MeOH/água) 90/0 v/v (D) 95/5 v/v (d) D D d d d d D D Volume de jeção 5 μl (E) 5 μl (e) E e E e e E e E Comprmeto de oda do detector 30 m (F) 330 m (f) F f f F F f f F Temperatura da colua 30 C (G) em foro (g) G g g G g G G G Reultado 5,7 5,33 5,35 5,07,59,75,79 5,09 Quadro J.. Matrz de expermeto para determação do aalto X por cromatografa 5,7 + 5,33 + 5,35 + 5,07,59 +,75 +,79 + 5,09 0,50 Dx A = - = 0,50 = =, 3 0,67 t A efeto gfcatvo Dx B = Dx C = Dx D = Dx E = Dx F = Dx G = 5,7 5,33,59,75 5,35 5,07,79 5,09-5,7 5,35,59,79 5,33 5,07,75 5,09-5,7 5,33,79 5,09 5,35 5,07,59,75-5,7 5,35,75 5,09 5,33 5,07,59,79-5,7 5,07,59 5,09 5,33 5,35,75,79-5,7 5,07,75,79 5,33 5,35,59 5,09 - = -0,0 = -0,0 = 0,3 = 0, = 0 = -0,07 0,0 = = 0,3 0,67 t B ão gfcatvo 0,0 t C = = 0,08 0,67 ão gfcatvo 0,3 t D = =,95 0,67 efeto gfcatvo 0, t E = =,86 0,67 efeto gfcatvo 0,00 = = 0 0,67 t F ão gfcatvo 0,07 t G = = 0,59 ão gfcatvo 0,67 Adrao Ferrera da Cuha Químco Idutral, MSc Eg. Matera adrao.cuha@udo.edu + 55 ()