Imuno-histoquímica - aplicações
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- Beatriz Azeredo Fernandes
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2 Imuno-histoquímica - aplicações diagnóstico diferencial entre neoplasias indiferenciadas pela histopatologia - casos nos quais a morfologia não permite conclusão da diferenciação do tumor Ex.: carcinoma x linfoma x melanoma x sarcoma diagnóstico diferencial entre neoplasias e estados reacionais pela histopatologia - alguns processos inflamatórios (reacionais) podem ter morfologia de difícil distinção com câncer pelo exame histopatológico Ex.: linfadenopatia reacional tipo hiperplasia folicular x linfoma não Hodgkin folicular determinação de tipo / subtipo de linfomas e leucemias - a adequada classificação destas neoplasias permite o tratamento mais eficaz, bem como conhecimento do prognóstico diagnóstico de diversas doenças infecciosas Ex.: Citomegalovírus, Herpes simplex tipos I e II, Hepatites B e C, HSV8 etc
3 Imuno-histoquímica - aplicações determinação / sugestão de sítio primário de adenocarcinoma - importante auxílio para tratamento de pacientes com adenocarcinoma disseminado / metastático sem sítio primário identificado clinicamente determinação de fatores prognósticos de neoplasias - alguns marcadores podem ser utilizados para identificar o provável comportamento de uma determinada neoplasia. Ex.: proteína p53 em diversos carcinomas, antígeno Ki-67 em diversos carcinomas, linfomas, tumores cerebrais etc determinação de fatores preditivos de neoplasias - alguns marcadores imuno-histoquímicos podem ser utilizados para identificar móleculas-alvo para tratamentos modernos e individualizados, beneficiando os pacientes com neoplasias mesmo em estados avançados Ex.: c-erbb2/her-2-neu, EGFR e VEGFR em diversos adenocarcinomas etc
4 Imuno-histoquímica - fixação Formaldeído (formol, formalina): fixador coagulativo utilizado rotineiramente - altera a estrutura terciária das proteínas por causar ligações cruzadas estáveis entre proteínas, que podem ser revertidas. A fixação ideal é obtida com solução de formol tamponado a 10% por horas. Uma fixação mais prolongada ou com ph muito ácido pode diminuir a imuno-reatividade do material e até causar resultado falso-negativo. A demora em colocar o tecido no formol ou a fixação de fragmentos muito grandes também pode ter o mesmo efeito, além de prejudicar a histopatologia devido à autólise.
5 Imuno-histoquímica - fixação Fórmula da solução de formol tamponado 10% : 100 ml formaldeído p.a. (40%) 4,0 g fosfato de sódio monobásico monohidratado p.a. 6,0g fosfato de sódio dibásico anidro p.a. 900 ml água destilada Se não for possível o preparo de formol tamponado, utilize pelo menos a solução de formol-salina a 10%: 100 ml formaldeído p.a. (40%) 900 ml de solução fisiológica 0,09%
6 Diagnóstico diferencial entre adenocarcinoma primário e metastático. Diagnóstico / Anticorpo CK7 CK20 RE/RP WT-1 Outros Ca. seroso de ovário TTF-1+ (até 37%, focal), VIM ±, CA125+ difuso Ca. endometrióide ovário TTF-1 + (até 20%, focal) Ca. endometrióide de endométrio VIM +, CEA, TTF-1 + (até 19%, focal) Ca. mucinoso de ovário + + ± ± catenin -, TTF-1, MUC5AC+ Ca. de cólon catenin +, CA125, CDX2 + Ca. de estômago ± ± - - CA125, CA19.9 +, MUC5AC+ Ca. pancreatobiliar ± ± - - CA125 + focal, CA19.9 +, MUC5AC+ Ca. mama VIM, GCDFP-15+ Ca. endocérvice p16 +, CEA+, TTF-1 + (4%) Ca. renal VIM+, CD10+, RCC+ Ca. pulmão TTF-1+ Ca. bexiga CA125 -, CK5/6+, CA Ca. peritoneal TTF-1+ (<10%), VIM ±, CA125+ Mesotelioma VIM+, HBME1+ calretinina+ CK5/6+, BerEp4-
7 Diagnóstico diferencial entre adenocarcinoma primário e metastático. Caso: paciente feminina, 75 anos. Massas tumorais em ovário direito e cólon direito. IHQ: vimentina negativo, CK7 +, CK20 negativo, CA125 +, WT-1 +, RE negativo, TTF-1 negativo, p53 negativo. Conclusão: adenocarcinoma, compatível com sítio primário em ovário.
8 Diagnóstico diferencial entre adenocarcinoma primário e metastático. Caso: paciente feminina, 56 anos. Massa tumoral ovariana, tumor peritoneal e pólipo no útero. Biópsias do pólipo uterino, ovário e do tumor peritoneal. IHQ: CK7 +, CK20 negativo, vimentina +, CA125 +, RE +, Ki %, CKAP e p63 + multifocal. Conclusão: adenocarcinoma endometrióide de endométrio com áreas de diferenciação escamosa.
9 Diagnóstico diferencial entre adenocarcinoma primário e metastático. Caso: paciente feminina, meia idade. Biópsia de metástase hepática, paciente com carcinomatose peritoneal. Conclusão: adenocarcinoma, compatível com sítio primário em sistema pancreatobiliar
10 Diagnóstico diferencial entre adenocarcinoma primário e metastático. Caso: paciente feminina, 77 anos. Citologia de líquido ascítico. CA125 elevado; ovário normal na TC. Conclusão: adenocarcinoma, compatível com sítio primário em sistema pancreatobiliar ou peritônio. IHQ: Ber-Ep4 + difuso, WT-1 + multifocal, calretinina negativo e RE negativo. Obs: enviado posteriormente cell block para IHQ adicional: CA difuso, MUC5AC + multifocal, CA125 + focal, RE negativo.
11 Diagnóstico diferencial entre carcinoma, tumores do estroma / cordão sexual e tumores germinativos Anticorpo / Diagnóstico CKpan PLAP CD30 AFP BHCG Outros Ca. de ovário T. seio endodérmico TTF-1+ (38%) VIM ±, CA125+ Ca. embrionário ± ± Disgerminoma Coriocarcinoma T. estroma/cordão sexual ± OCT4+ CD117+ inibina+, calretinina+, BerEp4 -
12 Diagnóstico diferencial entre carcinoma, tumores do estroma / cordão sexual e tumores germinativos Caso: paciente feminina, 16 anos. HCG 4870UI e massa anexial, suspeita de gestação ectópica. IHQ: PLAP, CD117, citoqueratinas-coquetel AE1/AE3, CD30, HCG e AFP + multifocal. Conclusão: tumor germinativo misto com componentes de carcinoma embrionário (70), tumor do seio endodérmico (10%) e disgerminoma (20%) e coriocarcinoma (< 5%).
13 Diagnóstico diferencial entre carcinoma, tumores do estroma / cordão sexual e tumores germinativos Caso: paciente intersexo, cariótipo 46 XY, 20 anos. Tumor gonadal bilateral. IHQ: PLAP + ninhos e cordões infiltrativos, inibina + ninhos com padrão inverso ao PLAP, AFP + focal e fraco, HCG + raras células, CK AE1/AE3 + ao redor de alguns ninhos, vimentina + multifocal, Ki-67 > 50%. Conclusão: gonadoblastoma com componente de disgerminoma.
14 Diagnóstico diferencial entre carcinoma, tumores do estroma / cordão sexual e tumores germinativos Caso: paciente intersexo, cariótipo 46 XY, 20 anos. Tumor gonadal bilateral. IHQ: PLAP + ninhos e cordões infiltrativos, inibina + ninhos com padrão inverso ao PLAP, AFP + focal e fraco, HCG + raras células, CK AE1/AE3 + ao redor de alguns ninhos, vimentina + multifocal, Ki-67 > 50%. Conclusão: gonadoblastoma com componente de disgerminoma.
15 Diagnóstico diferencial entre adenocarcinoma de endométrio, adenocarcinoma de endocérvice e alterações epiteliais benignas Anticorpo / Diagnóstico VIM Ki-67 (MIB1) CEA p53 Outros Ca. endometrióide de endométrio + > 10% - ± p16 - Ca. mucinoso de endométrio + > 10% + ± Hiperplasia microgland. endométrio - < 1% - - Ca. de células claras de endométrio + > 5% - + > 25% Reação de Arias-Stella + < 5% - - ou < 25% Ca. endocérvice - > 40% + p53 + Hiperplasia microgland. endocérvice p < 40% - - p16 -
16 Diagnóstico diferencial entre adenocarcinoma de endométrio, adenocarcinoma de endocérvice e alterações epiteliais benignas Caso: paciente feminina, 53 anos. Portadora de adenocarcinoma endometrial com neoplasia no epitélio superficial no canal endocervical. IHQ: CEA + difuso nas glândulas atípicas cervicais e endometriais e negativo nas glândulas endocervicais pequenas sem atipias. Conclusão: adenocarcinoma endometrial infiltrando colo uterino.
17 Diagnóstico diferencial entre carcinoma pouco diferenciado, carcinossarcoma de endométrio (tumor Mülleriano misto maligno) e leiomiossarcoma Anticorpo / Diagnóstico CKpan Desmina Miogenina Ca. pouco diferenciado de endométrio Carcinossarcoma de endométrio + difuso / multifocal + focal comp. heterólogo + comp. heterólogo Actina musc liso - + comp. heterólogo RE/RP - / + - / + Leiomiossarcoma - + / / - + / -
18 Diagnóstico diferencial entre carcinoma pouco diferenciado, carcinossarcoma de endométrio e leiomiossarcoma Caso: paciente feminina, 73 anos. Tumor uterino. IHQ: vimentina, CK AE1/AE3, CK7, desmina, miogenina + multifocal; S100 e neurofilamento + focal e PLAP negativo. Conclusão: carcinossarcoma / tumor Mülleriano misto maligno com componente heterólogo (rabdomiossarcoma).
19 Diagnóstico diferencial entre carcinoma pouco diferenciado, carcinossarcoma de endométrio e leiomiossarcoma Caso: paciente feminina, 73 anos. Tumor uterino. IHQ: vimentina, CK AE1/AE3, CK7, desmina, miogenina + multifocal; S100 e neurofilamento + focal e PLAP negativo. Conclusão: carcinossarcoma / tumor Mülleriano misto maligno com componente heterólogo (rabdomiossarcoma).
20 Diagnóstico diferencial entre tumores musculares e estromais uterinos Anticorpo / Diagnóstico Desmina Actina musc. liso CD10 KI-67 Outros Leiomioma + difuso + difuso - / + focal < 15% Leiomiossarcoma + difuso + difuso - / + focal > 15% caldesmon + p53 - caldesmon + p53+ T. estromal endometrial - - / + focal + difuso variável caldesmon - PEComa variável S100+, HMB45+ Melan A+
21 Diagnóstico diferencial entre tumores musculares e estromais uterinos Caso: paciente feminina, 41 anos. Nódulo em corpo uterino (fevereiro), nódulo no jejuno (agosto) e múltiplos nódulos pulmonares (setembro). IHQ: Desmina + difuso, AML + difuso, CD117 negativo e CD34 negativo; Ki-67 >25%. Conclusão: Leiomiossarcoma.
22 Diagnóstico diferencial entre tumores musculares e estromais uterinos Caso: paciente feminina, adulta. Tumoração friável com 3 cm no corpo / istmo do útero e lesão polipóide parida pela vagina, com 9,5 x 5,0 x 2,0 cm. IHQ: CD10 + difuso e intenso, AML + difuso e moderado, desmina negativo e CK AE1/AE3 negativo. Conclusão: Sarcoma do estroma endometrial.
23 Diagnóstico diferencial entre tumores musculares e estromais uterinos Caso: paciente feminina, adulta. Tumoração friável com 3 cm no corpo / istmo do útero e lesão polipóide parida pela vagina, com 9,5 x 5,0 x 2,0 cm. IHQ: CD10 + difuso e intenso, AML + difuso e moderado, desmina negativo e CK AE1/AE3 negativo. Conclusão: Sarcoma do estroma endometrial.
24 Diagnóstico diferencial entre graus de displasia do colo uterino Imuno-histoquímica com o antígeno Ki-67 normal, NIC1, NIC2 e NIC3. Positividade crescente e ascendente na espessura do epitélio.
25 Patologia e o futuro?
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