Redução do número de camundongos utilizados na obtenção de formas infectantes de Trypanosoma cruzi através de imunossupressão com ciclofosfamida
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- Ricardo Morais Garrau
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1 BREVE COMUNICAÇÃO ISSN Redução do número de camundongos utilizados na obtenção de formas infectantes de Tryanosoma cruzi através de imunossuressão com ciclofosfamida Gabriel Melo de Oliveira 1 RESUMO A infecção exerimental elo Tryanosoma cruzi no Laboratório de Biologia Celular/ IOC é realizada através da obtenção da forma infectante (triomastigotas sanguíneas) em camundongos. Em 2005, foram utilizados cerca de 250 animais or semana ara alcançar o volume de 70x10 arasitas/ml. De acordo com os rincíios éticos descritos rotocolo de imunossuressão com ciclofosfamida. Nosso objetivo foi estabelecer um rotocolo ara redução do número de camundongos utilizados, mantendo a quantidade de arasitas obtidos. A alicação de 200 mg/kg de ciclofosfamida dois dias aós a infecção reduziu o número de animais or semana em até 7%, mantendo o ico de arasitemia 1 Laboratório de Biologia Celular, Instituto Oswaldo Cruz/FIOCRUZ, Rio de Janeiro Autor ara corresondência: Gabriel Melo de Oliveira gmoliveira@ioc.fiocruz.br Recebido ara ublicação: 30/0/2011 Aceito ara ublicação: 28/11/2011 alicação de novos rotocolos que visem o bemestar animal e rincialmente a redução do número de animais. Nossos resultados demonstram a redução de até camundongos or ano e a manutenção da quantidade das formas triomastigotas infectantes em 25 arasitas x 10 Palavraschave: Tryanosoma cruzi. Ciclofosfamida. Ética. Camundongos. 1 Introdução O Laboratório de Biologia Celular do Instituto Oswaldo Cruz (LBC/IOC) é resonsável or número considerável de ublicações de artigos laboratório utiliza o modelo exerimental camundongo ara o estudo de vários asectos da infecção elo Tryanosoma cruzi Os diversos ensaios realizados in vivo exigem a manutenção semanal, bem como aquisição de formas infectantes (triomastigotas sanguineos) de T. cruzi total de animais utilizados em nosso laboratório animais foram direcionados ara a manutenção e obtenção de formas infectantes de T. cruzi foi utilizado na infecção de outros camundongos ara ensaios in vivo ou em exerimentos de cultura de células (in vitro O uso ético de animais em ensaios biomédicos do uso desses animais ara benefício rório e dos seres humanos 1, o conduta baseadas em escolhas morais feitas à luz 92 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1,. 929, jan./fev./mar. 2012
2 Gabriel Melo de Oliveira feitas com consciência lena e total resonsabili 3 discute que questões éticas surgem em nossa vida de desenvolvimento ético e humanitário das técni de laboratório Através dos resultados de trabalhos anteriores, observamos que o uso de imunossuressores, como a ciclofosfamida, na infecção elo T. cruzi arasitas sistema imune de camundongos, deendendo da dose e do temo de administração 8 tem como objetivo estabelecer um rotocolo de redução do número de camundongos utilizados ara a obtenção de formas infectantes de T. cruzi, mantendo a quantidade de formas triomastigotas rotocolo baseado na técnica de imunossuressão or ciclofosfamida em camundongos utilizados na manutenção e aquisição da forma infectante do T. cruzi. 2 materiais e métodos Neste trabalho utilizamos camundongos da adultos, fornecidos elo Centro de Criação de animais foram mantidos em nosso laboratório conforme os adrões internacionais ara as condições ambientais e sanitárias avaliados e autorizados sob a licença da Comissão infectados elo T. cruzi (cea Y) com o inóculo estudado or ser o rotocolo estabelecido ara a obtenção e manutenção do arasita em nosso tantes de T. cruzi, um gruo de camundongos foi eutanasiado em câmara com ambiente saturado de CO gruo submetido à imunossuressão foi inoculado IP e a imunossuressão foi induzida no segundo ciclofosfamida (CY Genuxal circulantes or meio do método descrito or Pizzi macrófagos eritoneais, realizada aós a eutanásia dos animais em câmara com ambiente saturado de CO, foi coletada através de lavagem da cavidade horas (h) as culturas foram lavadas e infectadas com as formas triomastigotas de T. cruzi numa as culturas também foram lavadas ara retirar os T Student e MannWhitney (não aramétrico) ara determinar de arasitas obtidos aós imunossuressão or camundongo em comaração com animais não imunossurimidos e a caacidade infectiva de 3 resultados Inicialmente comaramos a cinética de arasitemia ara os camundongos que receberam tratamento de CY dois dias aós a infecção (G1) e o gruo RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1,. 929, jan./fev./mar
3 Redução do número de camundongos utilizados na obtenção de formas infectantes de Tryanosoma cruzi através de imunossuressão com ciclofosfamida de animais que não receberam nenhum tratamento Assim, ara obter o número necessário de arasitas de camundongos tratados com a CY, nenhuma alterou o modelo de infecção; ambos os gruos deo número de camundongos versus número de ara na, então, cada animal aresenta um rendimento os macrófagos infectados mostraram números semelhantes de arasitas internalizados, infectados = = = Figura 1 Cinética de arasitemia em camundongos tratados com Cy (G1) e não tratados (G2) durante o curso da infecção elo T. cruzi. A: Parasitemia entre os dias 5 e 15 B: Número médio de arasitas sanguíneos no 7 ( = 0,005) Tabela 1 Categoria / ano arasitas x 10 / ml 1.17 arasitas x 10 / ml 25 arasitas x 10 / ml 25 arasitas x 10 / ml RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1,. 929, jan./fev./mar. 2012
4 Gabriel Melo de Oliveira Tabela 2 Número de arasitas em macrófagos eritoneais Categoria / ano 24h 48h 72h G ± 1.2 G ± ± discussão tigotas sanguíneos obtidos em nosso laboratório foi realizada, utilizando o modelo exerimental T. cruzi (cea ml em cada animal (IP), observamos o ico de de arasita exige um novo gruo de camundongos oção ara aumentar o número de arasitas era o descreveram que o uso de CY modula a intensidade da miocardite e da carga arasitária e está diretamente relacionada à dosagem e aos antes da infecção, aresentaram um ico de arasitemia semelhante entre os gruos tratados e os não di mostrou um aumento constante na arasitemia em comaração aos animais que não foram imunossurimidos da CY está diretamente relacionada com as células do sistema imunológico dos camundongos e não interfere com a infectividade do arasita ara obtermos a quantidade média de arasitas ml) or semana odemos usar aroximadamente novo rotocolo técnico ara a obtenção de formas infectantes do T. cruzi meio desse rotocolo, mesmo com o aumento do volume de ensaios e a necessidade de aumentar o nosso objetivo é reduzir ainda mais o número de animais utilizados na manutenção e aquisição de formas infectantes de T. cruzi em camundongos, usando uma assagem semanal em cultura de mo, veremos o rincíio ético de reduzir não só o número de camundongos utilizados, mas também 5 conclusão no número de arasitas ocorreu durante o ico de visem ao bemestar animal e rincialmente à dos arasitas internalizados nos macrófagos eritoneais em ambos os gruos não mostraram diferença or ano e a manutenção da quantidade das formas / RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1,. 929, jan./fev./mar
5 Redução do número de camundongos utilizados na obtenção de formas infectantes de Tryanosoma cruzi através de imunossuressão com ciclofosfamida Reducing the number of mice used to obtain infective forms of Tryanosoma cruzi by immunosuression with cyclohoshamide ABSTRACT Tryanosoma cruzi Keywords: Tryanosoma cruzi. REFERêNCias drugs as a tool to exlore exerimental acute and subacute animais ara o estudo in vivo da 9 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1,. 929, jan./fev./mar. 2012
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