TÍTULO: EFEITOS DA INGESTÃO DE DIETA HIPERLIPÍDICA NAS CONTAGENS TOTAL E DIFERENCIAL DE LEUCÓCITOS EM RATOS WISTAR MANTIDOS EM AMBIENTE ENRIQUECIDO

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1 TÍTULO: EFEITOS DA INGESTÃO DE DIETA HIPERLIPÍDICA NAS CONTAGENS TOTAL E DIFERENCIAL DE LEUCÓCITOS EM RATOS WISTAR MANTIDOS EM AMBIENTE ENRIQUECIDO CATEGORIA: CONCLUÍDO ÁREA: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E SAÚDE SUBÁREA: FISIOTERAPIA INSTITUIÇÃO: CENTRO UNIVERSITÁRIO CATÓLICO SALESIANO AUXILIUM AUTOR(ES): KELVIN ANEQUINI SANTOS ORIENTADOR(ES): JOSÉ ALEXANDRE CURIACOS DE ALMEIDA LEME COLABORADOR(ES): ANDRÉ ZANOLO

2 RESUMO A dieta tem sido apontada como fator importante para manutenção da atividade adequada do sistema imunológico.todavia, a dieta hiperlipídica é tida como prejudicial ao sistema imunológico. Desta forma, o presente estudo tem por objetivo investigar os efeitos da dieta hiperlipídica (HP) na resposta imunológica em ratos wistar. Para isso, os animais foram distribuídos em grupo controle (8) que receberam a dieta convencional e (8) que receberam a dieta HP (60%). Semanalmente, durante o período experimental de 8 semanas, foram coletadas amostras para as análises global e diferencial de leucócitos e os resultados foram analisados estatisticamente utilizando o teste t de student. Os valores de contagem total dos leucócitos os valores foram reduzidas pela dieta. Nas análises diferenciais de leucócitos, o linfócitos apresentaram aumento e os neutrófilos redução. Desta forma pode ser concluído que a dieta hiperlipídica reduziu as concentração de leucócitos, alterando ainda a contagem diferencial, aumentando o número de linfócitos e reduzindo de neutrófilos. Palavras-chave: Leucócitos, Sistema imunológico, dieta hiperlipídica. INTRODUÇÃO O sistema imunológico é composto por um conjunto de células (leucócitos) e moléculas que atuam na defesa e regeneração do organismo. Estas ações são realizadas basicamente no combate contra microorganismos, na remoção de células mortas e detritos celulares e estabelecendo a memória imunológica (SCHULENBURG et al., 2004). Os leucócitos podem ser agrupados nos granulócitos polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos e basófilos), monócitos e macrófagos e os linfócitos (LEANDRO et al., 2007). A modulação da resposta do sistema imunológico é realizada por vários fatores, sejam estes genéticos ou ambientais. Dentre estes fatores ambientais está a dieta que pode alterar de forma positiva ou negativa no sistema imunológico, isto porque o sistema imune é sensível tanto aos agentes infecciosos quanto às mudanças na homeostase orgânica (WOMACK et al., 2007; LEANDRO, 2007). Os lipídios disponíveis na alimentação podem agir de forma benéfica ou prejudicial sobre o sistema imunológico. Neste sentido, a dieta hiperlipídica aumenta a secreção de leptina, bem como,estimula a produção de citocinas pró inflamatórias que podem alterar as concentrações globais e diferenciais de leucócitos (GERALDO et al., 2008). Alguns estudos têm observado que o comportamento do sistema imune em resposta à dieta hiperlipídica não é linear e pode não promover diferenças significativas ( SANTOS, 2013; SILVA, 2014).

3 Desta forma, ainda existem lacunas a serem descobertas na relação entre lipídios e sistema imunológico. Há carências de estudos que tenham verificado a administração de dietas com alta concentração de lipídios e a resposta das células do sistema imunológico. OBJETIVOS O presente estudo teve por objetivo investigar os efeitos da ingestão de dieta hiperlipídica nas contagens total e diferencial de leucócitos em ratos Wistar mantidos em ambiente enriquecido METODOLOGIA Para desenvolver este estudo, ratos da linhagem Wistar (Rattus Norvegicus Albinus Wistar) com idade em torno de 3 meses foram mantidos em gaiolas coletivas, a temperatura controlada por ar condicionado de 25 ± 1º C e em ciclo claro/escuro de 12/12 horas, com livre acesso a água e ao alimento. O experimento seguira as recomendações das Resoluções Brasileiras de Bioética de Experimentos com Animais (lei federal nº , de 08 de outubro de 2008, Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal- CONCEA). Este projeto foi submetido para apreciação no Comitê de Ética em Experimentação Animal do Centro Universitário Católico Salesiano Auxilium- Unisalesiano. Distribuição do grupos Os animais serão distribuídos aleatoriamente nos seguintes grupos: Dieta convencional (DC) - Animais que receberam dieta convencional; Dieta hiperlipídica (DH) Animais que receberam dieta hiperlipídica (60% de lipídeos)

4 Dieta hiperlipidica A dieta hiperlipídica consistiu de 26,13% de carboidratos, 14,4% de proteínas e 57,6% de lipídios, tendo vitaminas e minerais adicionados de forma balanceada e ajustado pela dieta controle. Esta dieta foi obtida junto à empresa Pragsoluções (Jaú-São Paulo) Análise global de leucócitos No inicio e ao final do período experimental foram coletadas amostras de 25µL de sangue da parte distal da cauda de cada rato utilizando capilar heparinizado, sem a utilização de anestesia. A coleta foi feita por volta das 14 horas da tarde. A amostra coletada foi dispensada em microtubo de 1,5 ml e diluído em 500 µl de solução de Turk. Após suave agitação, a solução será gotejada na câmara de Neubauer e realizada a contagem total de leucócitos em microscópio (OLIVEIRA et al., 2002). Análise diferencial de leucócitos No inicio e ao final do período experimental foram coletadas amostras de uma gota de sangue da parte distal da cauda de cada rato que foi dispensada em lâmina de vidro e, posteriormente, feito o esfregaço desta. Após seca, a lâmina foi mergulhada nos corantes do panótico rápido. Depois de secas, as lâminas serão analisadas em microscópio, com a utilização de óleo de imersão entre a objetiva e o material observado. Foram contadas 50 células em cada lamina sendo diferenciados os tipos de leucócitos entre estas células analisadas (OLIVEIRA et al., 2002). Análise estatística Após o teste de normalidade, os resultados serão analisados estatisticamente utilizando o teste t Student ou Mann-Whitney (para dados não paramétricos) através do software SPSS. RESULTADOS E DISCUSSÃO

5 No presente estudo foram investigadas as possíveis alterações nas contagens totais e diferenciais de leucócitos sanguíneos. Este estudo é resultado de um projeto promoveu a instauração desta técnica no laboratório, tendo sido o trabalho de instauração realizado pelo grupo de discentes envolvidos no presente estudo. O estudo da contagem total (global) de leucócitos no inicio do experimento não apresentou diferenças pelas dietas oferecidas aos animais (Figura 1). Na análise realizada ao final do experimento, os animais que receberam dieta hiperlipídica apresentaram valores maiores que os animais que receberam a dieta controle. Quando realizada a média das semanas (tabela 1) pode ser observado que os animais que receberam a dieta hiperlipídica apresentaram valores menores na contagem global de leucócitos Figura 1. Contagem total de leucócitos (n de células x 10 3 /mm 3 de sangue) dos animais dos grupos DC (dieta controle) e DH (dieta hiperlipídica) mantidos em ambiente enriquecido previa (1) e posteriormente (2) ao período experimental (8 semanas). Teste t Student; p<0,05 n=8 ratos/ grupo. A DC A tabela 2 apresenta os resultados da contagem diferencial de leucócitos nos grupos estudados. A dieta hiperlipídica promoveu aumento nas concentrações de linfócitos e redução nos valores de neutrófilos. Os demais tipos de leucócitos não sofreram alterações promovidos pela dieta hiperlipídica. Tabela 2. Média da contagem diferencial de leucócitos (%) e global (n de células x 10 3 /mm 3 de sangue) realizada semanalmente dos animais dos grupos DC (dieta

6 controle) e DH (dieta hiperlipídica) mantidos em ambiente enriquecido previa e posteriormente ao período experimental de 8 semanas). DC DH Grupos Leucócitos Linfócitos 54,9±7,1 72,1±5,6 a Monócitos 5,4±1 5,6±1 Neutrófilos 23,5±3,3 12,7±4 a Eusinófilos 4,5±2,3 3,1±0,6 Basófilos 6±3 3,7±1,6 Bastonetes 5±2,9 3,3±1,2 Contagem global 11,2±2,2 8,4±1,7 a Teste t Student; p<0,05 n=8 ratos/ grupo. A DC O presente estudo demonstrou que a ingestão da dieta hiperlídica (60%) pode trazer um conjunto de prejuízos ao sistema imunológico. A principio, a redução da concentração sanguínea de leucócitos pode ser um efeito a longo prazo da administração desta dieta. As alterações no tipo de leucócitos também é uma informação relevante. Estudos prévios apresentam resultados constrantes entre si, sendo este contraste resultado da concentração de lipídios na dieta hiperlipídica, tipo de ácidos graxos predominante e idade dos animais (WU et al., 2013; CURI et al., 2001). CONCLUSÕES O presente estudo permite concluir que a ingestão de dieta hiperlipídica (60%) durante 8 semanas em animais adultos induziu redução na contagem global de leucócitos e na contagem diferencial redução de neutrófilos e aumento de linfócitos. Com relação à iniciação científica, deve ser ressaltado que, através do presente estudo, os discentes promoveram a instauração da técnica de contagem global e diferencial de leucócitos no laboratório. REFERÊNCIAS CURI, Rui et al. Entendendo a Gordura-Os Acidos Graxicos. Editora Manole Ltda, GERALDO, J.M.; ALFENAS, R.C.G. Role of diet on chronic inflammation prevention

7 and control: current evidences. Arquivos Brasileiros de Endocrinologia & Metabologia, v. 52, n. 6, p , SANTOS, Ed W.C.O. Estudo da função de macrófagos peritoniais de camundongos submetidos à dieta hipoprotéica e dieta hiperlipídica Tese de Doutorado. Universidade de São Paulo. SILVA, K.M.F. Obesidade induzida por dieta em diferentes tempos: efeitos sobre análises murinométricas, hematológicas e imunológicas de ratas Tese de Doutorado. Universidade Federal de Pernambuco. SCHULENBURG, H.; KURZ, C.L.; EWBANK, J.J. Evolution of the innate immune system: the worm perspective. Immunol Rev. 2004;198: LEANDRO, C. G. et al. Mecanismos adaptativos do sistema imunológico em resposta ao treinamento físico. Rev Bras Med Esporte, v. 13, n. 5, p , DE HEREDIA, F.P.; GÓMEZ-MARTÍNEZ, S.; MARCOS, A. Obesity, inflammation and the immune system. Proceedings of the Nutrition Society, v. 71, n. 02, p , WOMACK, J. et al. Obesity and immune cell counts in women.metabolism, v. 56, n. 7, p , GREENBERG, A.S.; OBIN, M.S. Obesity and the role of adipose tissue in inflammation and metabolism. The American journal of clinical nutrition, v. 83, n. 2, p. 461S-465S, Escribano, B.M et al.. Benefits of moderate training to the nonspecific immune response of colts. Equine Vet J Suppl. 2002: OLIVEIRA, C.A.M.; ROGATTO, G.P.; LUCIANO, E. Efeitos do treinamento físico de alta intensidade sobre os leucócitos de ratos diabéticos. Rev Bras Med Esporte, Niterói, v. 8, n. 6, p , Dec PEDERSEN B.K., et al. Immunity in athletes. J Sports Med Phys Fitness 1996;36: WASINSKI, F. et al. Exercise and caloric restriction alter the immune system of mice submitted to a high-fat diet. Mediators of inflammation, v. 2013, WOODS, J.A.; PENCE, B.D. Physical Activity, Exercise, and the Immune System: Three Lines of Research That Have Driven the Field WU, Dayong et al. Diet induced obesity has a differential effect on adipose tissue and macrophage inflammatory responses of young and old mice.biofactors, v. 39, n. 3, p , 2013.