Obesidade materna aumenta a regulação das vias de sinalização da inflamação e expressão de citocinas na placenta de ovelhas na metade da gestação

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1 Faculdade de Veterinária Departamento de Clínicas Veterinária Obesidade materna aumenta a regulação das vias de sinalização da inflamação e expressão de citocinas na placenta de ovelhas na metade da gestação Ismael Mateus Cavazini Samanta Regine Fensterseifer Orientação: Josiane de Oliveira Feijó Pelotas, 02 de maio de 2012

2 Placenta 31 (2010)

3 INTRODUÇÃO

4 INTRODUÇÃO

5 INTRODUÇÃO Tecido Adiposo Funções

6 INTRODUÇÃO Células: macrófagos, fibroblastos, pré-adipocitos e adipocitos Adipocinas: Função imunológica Cardiovascular Metabólica Endócrina Tecido Adiposo TFNα IL-6 SC B, C3 e D (adipsina) (Costa & Duarte, 2006) Obesidade leva a baixo grau de inflamação no tecido adiposo. Obesidade estimula tanto o sistema imune quanto o próprio tecido adiposo a produzir mediadores pró-inflamatórios. (André & Tofalini, 2008)

7 INTRODUÇÃO Vias de sinalização da resposta inflamatória Obesidade Materna AGL circulação mãe NF-κB: Núclear fator kappa B JNK: c-jun N-terminal expressão de citocinas pró-inflamatórias AGL circulação feto Ácidos Graxos Impulsiona o processo inflamatório via NF-κB e JNK TLR4

8 INTRODUÇÃO...hipótese A obesidade materna aumenta a concentração de lipídios na circulação fetal e a expressão de moléculas sinalizadoras da inflamação no tecido placentário de ovelhas na metade da gestação

9 MATERIAIS E MÉTODOS

10 MATERIAIS E MÉTODOS 20 Ovelhas Multíparas 3-4 Anos Peso e ECC Semelhantes - 60d Concepção 75d

11 MATERIAIS E MÉTODOS Avaliação do peso semanalmente ECC 1-9 (mensalmente) ajuste de dieta - 60d Concepção 75d Necropsia Anestesia: Infusão de cetamina IV (22,2 mg/kg PV) Anestesia geral inalatória isoflurano (0,5-2,5%)

12 MATERIAIS E MÉTODOS Necropsia Coleta de sangue das ovelhas: n=5 de cada grupo tubos refrigerados com EDTA plasma foi congelado a -80ºC Laparotomia médioventral: localização útero grávido abertura útero Coleta de sangue dos fetos: Punção venosa cordão umbilical AGL Colesterol TAG

13 MATERIAIS E MÉTODOS Coleta de tecido placentário cotiledonar: 6 fêmeas 4 machos Placentomas do tipo A com tamanho similar associados com as membranas da placenta de cada feto Congelados em nitrogênio líquido e armazenados a -80ºC RT-PCR

14 MATERIAIS E MÉTODOS Western blotting TR-PCR RNAm expressão: CD11b, CD14, CD68, IL-6, IL-8, IL-18, TLR2, TRL4, TNF-α

15 RESULTADOS E DISCUSSÃO

16 RESULTADOS E DISCUSSÃO Peso Corporal e ECC Ovelhas OB C P Peso Corporal 98,5 ± 3,1 73,9 ± 4,2 P < 0,01 ECC 7,9 ± 0,2 5 ± 0,5 P < 0,01 Fetos OB C P Peso Corporal 234,4 ± 6,61 185,7 ± 6,89 P < 0,05

17 RESULTADOS E DISCUSSÃO Análises Sanguíneas dos Fetos OB C P Ácidos Graxos Livres (mm) 0,61 ± 0,03 0,49 ± 0,03 0,008 Triglicerídeos (mg/dl) 48,0 ± 1,8 38,8 ± 1,8 0,006 Colesterol (mg/dl) 42 ± 2,4 34 ± 2,4 0,050 Obesidade Materna AGL circulação mãe AGL circulação feto

18 RESULTADOS E DISCUSSÃO Receptores do tipo Toll2 e Toll4 Expressão mrna Tecido Placentário Cotiledonar OB C *: P < 0.05; : P = 0.06

19 RESULTADOS E DISCUSSÃO CD11b, CD14 e CD68 Expressão mrna Tecido Placentário Cotiledonar OB C *: P < 0.05; : P = 0.06

20 RESULTADOS E DISCUSSÃO CD11b Marcador de ativação de monócitos CD14 CD68 Marcadores de diferenciação e maturação de macrófagos

21 RESULTADOS E DISCUSSÃO TNFα, IL-6, IL-8, IL-18 Expressão mrna Tecido Placentário Cotiledonar OB C **: P < 0,01 *: P < 0.05; : P = 0.06

22 RESULTADOS E DISCUSSÃO TNF-α Secretado por macrófagos, linfócitos e monócitos; age em células endoteliais; hipotálamo IL-6 Liberada por linfócitos T, linfócitos B ativados, fibroblastos, monócitos, macrófagos e células endoteliais; Considerada marcadora de ativação sistêmica das citocinas pró-inflamatórias. IL-8 IL-18 Atrai neutrófilos, basófilos, linfócitos T e promovem a angiogênese até o foco infeccioso. Secretada pelos macrófagos, promove a secreção do INF-γ; estimula a resposta inflamatória de células NK.

23 RESULTADOS E DISCUSSÃO IL-6 e TNF-α Ativação NF-κB citocinas pró-inflamatórias (Wellen & Hotamisligil, 2005) Internalização glicose sensibilidade insulina expressão dos GLUTs na superfície celular Modulam a sinalização intracelular da tirosina dos IRS (substratos de receptor de insulina) Fosforilação da porção serina Resistência à insulina IRS fracos interações protéicas translocação GLUTs (Paschoal; Naves; Fonseca, 2007)

24 EXPERIMENTOS NUPEEC Qual é a relação com os experimentos em andamento???????

25 EXPERIMENTOS NUPEEC Resistência à Insulina em ruminantes e sua relação com hipomagnesemia e hipocalcemia A hipótese é que em ruminantes, o aumento da resistência à insulina devido ao alto grau de adiposidade ao parto, predispõe à hipomagnesemia e consequentemente à hipocalcemia O objetivo geral deste estudo é avaliar a relação da resistência à insulina, com a hipomagnsemia e hipocalcemia em vacas no periparto

26 ...voltando para RESULTADOS E DISCUSSÃO

27 RESULTADOS E DISCUSSÃO Phos-IkB kinase α/β (Ser 176/180) NF-κB e Phos-p68 (Ser536) OB C **: P < 0,01 *: P < 0.05;

28 RESULTADOS E DISCUSSÃO Phos-IkB kinase α/β (Ser 176/180) NF-κB e Phos-p68 (Ser536) OB C **: P < 0,01 *: P < 0.05;

29 RESULTADOS E DISCUSSÃO Phos-JNK (Thr183/Tyr185) Phos-c-Jun (Ser63 e Ser73) OB C **: P < 0,01 *: P < 0.05;

30 RESULTADOS E DISCUSSÃO Phos-JNK (Thr183/Tyr185) Phos-c-Jun (Ser63 e Ser73) OB C **: P < 0,01 *: P < 0.05;

31 RESULTADOS E DISCUSSÃO

32 ...resumindo

33 RESULTADOS E DISCUSSÃO

34 CONCLUSÃO A obesidade materna causa up-regulation das vias de sinalização da inflamação NF-kB e JNK e reforça a expressão de citocinas; Aumenta os níveis de TLR4 no tecido placentário cotiledonar das ovelhas OB; Como um receptor ativado por ácidos graxos, a up-regulation do TLR4 pode favorecer uma ligação potencial entre a obesidade materna e a inflamação da placenta.

35 Obrigado pela atenção!