Palavras-Chave Imprint metabolico, obesidade, perfil fenotipico.

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Liliana Almada Caldeira
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EFEITO DA DISPONIBILIDADE AUMENTADA DA AMAMENTAÇÃO DURANTE O CRESCIMENTO E DESENVOLVIMENTO EM UM NÚMERO REDUZIDO DE RATOS Alessandra Hilgemberg (PIBIC/UEPG), José Rosa Gomes (Orientador).

1 EFEITO DA DISPONIBILIDADE AUMENTADA DA AMAMENTAÇÃO DURANTE O CRESCIMENTO E DESENVOLVIMENTO EM UM NÚMERO REDUZIDO DE RATOS Alessandra Hilgemberg (PIBIC/UEPG), José Rosa Gomes (Orientador). Universidade Estadual de Ponta Grossa/Departamento de Ciencias Biológicas Palavras-Chave Imprint metabolico, obesidade, perfil fenotipico. Introdução A ingestão desequilibrada de alimentos pode levar à obesidade (ingestão calórica excessiva comparada com o gasto energético). A obesidade é um problema nutricional com componentes ambientais, comportamentais, socioeconômicos e genéticos, que afeta aproximadamente 1/3 da população adulta no mundo ocidental com prevalência crescente em todo mundo. A obesidade se desenvolve ao longo dos anos e, muitas crianças obesas têm tendência a permanecer como adultos obesos. O problema mais importante é que a obesidade esta associada a um aumento de três a quatro vezes na morbidade por varias complicações decorrentes da obesidade. (PAGE et al. 2004) Vários modelos de obesidade experimental têm sido propostos a fim de investigar aspectos metabólicos e hormonais envolvidos no processo de instalação da obesidade. Os estudos em modelos animais têm sido bastante úteis no estabelecimento das causas e consequências da doença e podem também resultar, no desenvolvimento de procedimentos mais efetivos para prevenção e tratamento. Entre os modelos estabelecidos estão os que interferem no desenvolvimento dos centros de regulação da saciedade em nivel de sistema nervoso central, causando a obesidade hipotalâmica e modelos em que ocorre a manipulação da dieta alimentar com aumento na disponibilidade de alimentos seja na vida adulta ou durante o desenvolvimento.durante o desenvolvimento a indução da obesidade é denominada de programação metabólica (Šefcíková et al. 2011) pelo aumento na disponibilidade de leite durante a amamentação. Nesse modelo ocorre um acúmulo da memória celular positiva ou negativa de uma caracteristica fisiológica que se perpetua através das varias gerações e que pode, em um dado momento, ser incorporado na estrutura genética do indivíduo através de mecanismos epigenéticos. Estudos indicam que essas caracteristicas podem ser obtidas de forma permanente, em animais de laboratório, com no minimo 20 gerações sendo esse um dos objetivos finais desse projeto a ser iniciado nesse plano de trabalho. Entretanto, para se ter um controle do que ocorre durante o crescimento dos animais é necessario se estabelecer o perfil fenotípico com o acompanhamento de vários parametros anatomicos e fisiologicos durante o crescimento dos animais, até a idade adulta e durante as gerações. O estabelecimento de uma linhagem ao menos com 50% de caracteristicas fenotípica de obesidade em ratos adultos, por programação metabólica, no bioterio da UEPG, em muito ajudará pesquisas sobre obesidade que utilizem futuramente esse modelo de estudo. 1

2 Material e Métodos Colonia formadora: Animais heterogenicos: 5 ratos machos e 12 femeas ( 250g) da linhagem Wistar da população de criação do bioterio da UEPG foram mantidos sobre condições de temperatura, luminosidade, alimentação e água controladas. Esses animais foram considerados grupo experimental. A metodologia para obtenção de uma colonia fundadora seguira o já descrito em Šefcíková et al. (2011). Na idade adulta, (250g) os ratos machos e femeas dessas ninhadas foram selecionados para novos cruzamentos Grupo controle: 12 fêmeas foram acasaladas na proporção de 2 femeas para 1 macho alguns acasamentos foram na proporção 3 para 1 macho. Após o nascimento, as ninhadas foram reduzidas para 8 filhotes. Foram obtidas 3 ninhadas resultantes desses acasamentos.todos esses filhotes foram submetidos a avaliação de todos os parâmetros definidos nesse projeto, até a idade adulta e foram considerados grupo controle, sendo mantidos em condiçoes padrao de temperatura, alimentação e água. Grupos experimentais ( G 1): 9 Femeas foram acasaladas e após o nascimento, no cada ninhada foi reduzida para o número de 4 animais por sexo (quando possivel 2 machos e duas femeas) essa ninhada foi denominada de G1. Todos os filhotes seguirãam desenvolvimento normal até a idade adulta quando os irmãos FORAM cruzados entre si para produzir as geraçoes futuras. Todos os animais foram pesados uma vez por semana, e o consumo da ração duas vezes na semana. A pesagem foi estabelecida em 30, 60 e 90 dias assim como o consumo da ração, que era completado sempre para 400 gramas. Parâmetros avaliados: Indice de Lee (IL)- o indice de Lee (Bernardis & Patterson 1968) determina o indice de massa corporal do animal, obtido atraves da relação do massa corporal (g) e o comprimento focinho cauda. O IL foi obtido da razão entre raiz cubica da media do peso pelo comprimento naso anal de todos os ratos de G1 na idade de 90 dias apos terem gerado a ninhada G2. Perfil Lipídico e glicêmico: de colesterol total, HDL-colesterol, triglicerídeos e LDLcolesterol (calculado) nos soro dos sangue coletado de cada animal ao atingirem a idade adulta por punção cardíaca apos terem sido anestesiados. 2

3 Análise dos resultados: Para comparação entre duas amostras foi empregada a análise de variância (ANOVA), segundo os efeitos dos fatores testados. A significância estatística estabelecida foi de p < 0,05. Resultados e discussão Após realizado análise estatística do peso dos grupos Controle, G1 E G2, machos e fêmeas, observou que no grupo Controle comparado com o grupo G1 machos, aumentou o peso, porém não foi estaticamente significativo entre os filhotes de 30 dias com os filhotes 30 dias G1, os filhotes 60 dias com os 60 dias G1, filhotes 90 dias com os filhotes 90 dias G1, e os filhotes de 60 dias com os 30 G1. Entre os Controles e os G1 machos existe diferença entre todos os outros grupos: Filhotes de 30 dias Controle vs 60 dias Controle, Filhotes 30 dias Controle vs G1 60 dias, Filhotes 30 dias controle vs 90 dias controle, Filhotes 30 dias controle vs G1 90 dias, 30 dias G1 vs G1 60dias, 30 dias G1 vs 90 dias Controle, 30 dias G1 vs G1 90 dias, 60 dias vs 90 dias Controle, 60 dias Controle vs G1 90 dias, G1 60 dias vs 90 d controle, G1 60 dias vs G1 90 dias. O que não ocorreu no grupo Controle e G1 de fêmeas, que comparado o grupo Controle 30 dias com o grupo G1 não houve diferença estatisticamente significativa porém ao invés de aumentar o peso do grupo G1 diminuiu sendo que nos machos aumentou, o que também ocorreu com os filhotes fêmeas 60 dias Controle e 60 dias G1 onde os controles ganharam mais peso que os G1, porem nos 90 dias houve um aumento estatístico significativo do grupo G1 comparado com o Controle. Analisando os dados estatísticos do grupo G1 e G2 fêmeas não houve aumento significativo no peso apenas nos 30 dias e 90 dias o mesmo ocorreu para os machos, isso ocorre porque nos primeiros 30 dias eles ainda estão em fase de crescimento pois o metabolismo dos ratos e o seu desenvolvimento ocorre mais rápido, na fase dos 31 dias aos 60 dias o ganho de peso foi muito significante, pois é a fase que eles precisam de reserva energética pois é a fase que ocorre acasalamento, e ocorrem alterações hormonais entre outros fatores. Já nos 90 dias ainda ocorre o ganho de peso mas no final o peso já começa a estabilizar. No consumo de ração do grupo Controle e G1 machos, houve aumento a partir dos G1 60 dias comparados com os Controle 10 dias, 60 G1 dias com os 10 G1 dias, 90 dias Controle com os 60 dias Controle, na ração foi colocado 10 dias pois 20 dias eles estavam em fase de amamentação, por isso o consumo da ração nesses primeiros dias não foi estatisticamente significante. O consumo de ração das fêmeas houve diferença pois a partir dos 60 dias houve aumento significativo do consumo. Na análise sanguínea dos machos e fêmeas dos grupos Controle e G1 foram analisados o colesterol total, HDL, LDL, triglicerídeos, e glicose. Os niveis normais de colesterol total normal, para machos é aproximadamente 98 mg/dl e femeas 99 mg/dl, triglicerídeos deve ser menor que 150 para machos e menor que 100 para femeas, o HDL tanto para macho quanto para fêmeas seria de menor ou igual a 35mg/dl e o LDL maior que 130. A glicemia tanto para machos quanto para fêmeas deve ser aproximadamente 168 mg/dl ( George, 2011). Os únicos índices que apresentaram alteração significativa nos machos foi o HDL que nos controles obteve uma média de 69,8 mg/dl e no grupo G1 ocorreu um aumento 76,25mg/dl 3

4 quando comparado com o valor normal observa-se que em ambos os grupos houve aumento. Nas fêmeas a alteração aumentada em relação ao normal sendo nos triglicerídeos, no grupo controle a média foi de 148,4mg/dl entretanto uma redução dos triglicerídeos nas femeas do grupo G1 abaixo no normal sendo de 49 mg/dl. Conclusão O modelo de imprint metabólico nessas duas gerações mostra uma tendencia a estabilizaçao da obesidade em G2 indicando que pode ter sido acentuada pela o disponibilidade aumentada da amamentação durante o crescimento e após o desmame. Agradecimentos -A UEPG pela oportunidade e pela bolsa fornecida - ao biotério pela disponibilidade - ao professor José Rose Gomes professor e orientador desse projeto. Referências ŠEFC ÍKOVÁ Z., BUJN ÁKOVÁ D, RAC EK L, KMET V,. MOZEŠ S Developmental Changes in Gut Microbiota and Enzyme Activity Predict Obesity Risk in Rats Arising From Reduced Nests Physiol. Res. 60: ,. Von Diemen V, Trindade E N, Trindade M R M. Experimental model to induce obesity in rats. Acta Cirúrgica Brasileira - 21 (6) Suzuki K,Simpson K A, Minnion, J S, Shillito J C, and Bloom S R The role of gut hormones and the hypothalamus in appetite regulation. Endocrine Journal, 57 (5), Bernardis, L.L., Patterson, B.D Correlation between Lee index and carcass fat content in weanling and adult female rats with hypothalamic lesions. J Endocrinol 40, George T, revista brasileira de ciências da saúde, Parâmetros Bioquímicos e Hematológicos de Ratos Wistar e Camundongos Swiss do Biotério Professor Thomas George. volume 15 Número 2 Páginas

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