Estudo de associação de polimorfismos no gene 5-HTT (SLC6A4) com a obesidade Licínio Manco, Helena Dias, Magdalena Muc, Cristina Padez
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1 Estudo de associação de polimorfismos no gene 5-HTT (SLC6A4) com a obesidade Licínio Manco, Helena Dias, Magdalena Muc, Cristina Padez Centro de Investigação em Antropologia e Saúde (CIAS), Departamento de Ciências da Vida, Universidade de Coimbra, Portugal
2 Introdução A prevalência da obesidade tem vindo a aumentar a nível mundial e deve-se essencialmente a fatores ambientais. No entanto, estudos epidemiológicos mostram que a obesidade tem também uma forte componente genética (40-70% da variabilidade inter individual do IMC). Os recentes estudos de associação genómica GWAS (genomewide association studies) identificaram mais de 75 loci associados a pelo menos um parâmetro de obesidade.
3 A associação entre obesidade e genes candidatos relacionados com as funções serotoninérgicas no sistema nervoso central (SNC) tem vindo a ser também explorada. O gene 5-HTT (SLC6A4; chr: 17q11.2) que codifica o transportador da serotonina tem vindo a ser associado a diversos distúrbios psiquiátricos e comportamentais incluindo depressão, ansiedade e suicídio. Alguns estudos recentes mostram que a modulação do sistema serotoninérgico do SNC por polimorfismos no gene 5-HTT pode ser um fator de suscetibilidade à obesidade.
4 Rot et al. CMAJ (2009) 180:305. O transportador da serotonina (5-HTT) é uma proteína membranar localizada nos neurónios pré-sinápticos, sendo responsável pela recaptação do neurotransmissor serotonina (5- HT) para ser reciclado ou degradado.
5 Foram descritos dois polimorfismos no gene 5-HTT que influenciam a sua atividade transcricional : 5-HTTLPR: na região promotora, que consiste numa inserção / deleção de 43 pb com dois alelos comuns, longo (L) e curto (S). STin2: no intrão 2, que consiste num VNTR (variable number of tandem repeat) de 17 pb com dois alelos comuns de 10 ou 12 cópias do elemento de repetição e um alelo raro com 9 cópias. Adaptado de Haddley et al., 2012
6 Objetivo Investigar a associação dos polimorfismos 5-HTTLPR e STin2 do gene 5-HTT com o excesso de peso e a obesidade numa amostra de jovens adultos de naturalidade Portuguesa.
7 Metodologia Amostra de 535 indivíduos : 225 sexo masculino; 310 sexo feminino; idades anos (média 20,8). Recrutados aleatoriamente entre estudantes da Universidade de Coimbra de setembro de 2013 a fevereiro de 2014.
8 Exames antropométricos Peso (Kg) e Estatura (cm) para cálculo do IMC (Peso/Estatura 2 ) e utilizados os intervalos da OMS para definir excesso de peso e obesidade. A percentagem de gordura corporal foi determinada por bioimpedância elétrica. Foram utilizados questionários (IPAQ) para avaliar a atividade desportiva.
9 Genotipagem A extração de DNA foi feita a partir de esfregaço bucal e os polimorfismos foram genotipados por PCR com primers específicos. Os produtos amplificados foram separados por eletroforese em geles de agarose ou acrilamida.
10 Análise Estatística A associação dos polimorfismos com o excesso de peso / obesidade foi feita segundo um modelo caso-controlo, por regressão logística e por testes de qui-quadrado no estudo de haplótipos. O grupo controlo incluiu os indivíduos com IMC<25 Kg/m2 e no grupo casos foram agrupados os indivíduos com excesso de peso e obesidade (IMC 25 Kg/m2). Análise estatística com o software PLINK version 1.07 (
11 Resultados
12 Antropometria Características obtidas para a amostra estudada e comparação entre sexos. Atividade física Parâmetros Total Sexo Feminino Sexo Masculino N (%) (57.9) 225 (42.1) Idade média (anos) (2.65) (2.49) (2.84) Peso (kg) (12.64) (9.37) (12.23) Altura (m) 1.67 (0.09) 1.61 (0.06) 1.74 (0.07) IMC (kg/m 2 ) (3.60) (3.42) (3.66) Gordura corporal (%) (7.50) (5.18) (4.64) Défice de peso (<18.5 kg/m 2 )* 23 (4.3) 18 (5.7) 5 (2.3) Peso normal ( 18.5 to <25 kg/m 2 ) * 402 (75.1) 242 (78.1) 160 (71.1) Excesso de peso ( 25 kg/m 2 to <30 kg/m 2 ) * 88 (16.5) 38 (12.3) 50 (22.2) Obesidade ( 30 kg/m 2 ) * 22 (4.1) 12 (3.9) 10 (4.4) Pratica desporto * (~300 min AF vigorosa/semana) 146 (27.3) 57 (18.4) 89 (39.6) Não pratica desporto * (~80 min AF vigorosa/semana) 389 (72.7) 253 (81.6) 136 (60.4) Dados: média (SD) para variáveis contínuas e N (%) para variáveis categóricas (*).
13 Genótipos do polimorfismo 5-HTTLPR 529 pb 465 pb LL LS LL SS LS M 500 pb 300 pb 200 pb Produtos da amplificação por PCR separados por eletroforese em gel de agarose (2%) mostrando os genótipos comuns do polimorfismo 5-HTTLPR.
14 Genótipos do polimorfismo STin2 500 pb 300 pb 300 pb 266 pb 200 pb 249 pb M Produtos da amplificação por PCR separados por eletroforese em gel de acrilamida (10%) mostrando os genótipos mais comuns do polimorfismo STin2.
15 Frequências genotípicas, alélicas e haplotípicas para os dois polimorfismos, 5-HTTLPR e STin2 na amostra estudada. Polimorfismos Genótipos N (freq) Alelos N (freq) P HWE 5-HTTLPR (N=530) LL: 170 (0.321) LS: 249 (0.470) SS: 111 (0.209) L: S: STin2 (N=523) 12-12: 197 (0.376) 12-10: 233 (0.446) 10-10: 87 (0.166) 12-09: 5 (0.010) 10-09: 1 (0.002) 12: : : Haplotypes 5-HTTLPR/STin2 (N=518) L 12: 252 (0.243) S 12: 371 (0.358) L 10: 319 (0.308) S 10: 88 (0.085) L 09: 6 (0.006)
16 Associação dos polimorfismos 5-HTTLPR e STin2 com o risco de excesso de peso / obesidade. Grupos Locus (N) Alelos Normal N (freq) OB/OW N (freq) OR (95% CI) P a P b Amostra total 5-HTTLPR (530) S L 384 (0.46) 456 (0.54) 87 (0.40) 133 (0.60) 0.78 ( ) STin2 (517) (0.38) 507 (0.62) 98 (0.45) 120 (0.55) 1.32 ( ) Pratica desporto 5-HTTLPR (146) STin2 (139) S L (0.41) 134 (0.59) 82 (0.39) 130 (0.61) 32 (0.48) 34 (0.52) 26 (0.39) 40 (0.61) 1.43 ( ) 1.03 ( ) Não pratica desporto 5-HTTLPR (384) S L 292 (0.48) 322 (0.52) 55 (0.36) 99 (0.64) 0.64 ( ) STin2 (378) (0.38) 377 (0.62) 72 (0.47) 80 (0.53) 1.47 ( ) Valores de OR estimados para o alelo minor e P-values não-ajustados (P a ) e ajustados para a idade e sexo (P b ).
17 Associação dos haplótipos combinando os dois polimorfismos 5-HTTLPR/STin2 com o risco de excesso de peso/obesidade. Grupos Haplótipo Groupo Normal Group OB/OW χ 2 P a χ 2 P b Amostra total S L S L Pratica desporto S Não pratica desporto L S L S L S L P-values obtidos para cada haplótipo (P a ) e para o conjunto dos haplótipos (P b ).
18 Conclusões Foram encontradas evidências de associação entre polimorfismos do gene 5-HTT e o excesso de peso / obesidade, nomeadamente para os alelos 5-HTTLPR (L) e Stin2 (10). O estudo mostrou que a inatividade física acentua a influência dos fatores genéticos 5-HTT no risco da obesidade, evidenciando interação entre genes e ambiente (GXA) no risco para obesidade.
19 OBRIGADO!
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