PATOGENICIDADE DE BACTÉRIAS ASSOCIADAS A NEMATÓIDES ENTOMOPATOGÊNICOS EM SPODOPTERA FRUGIPERDA (LEPIDOPTERA: NOCTUIDAE)

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1 PATOGENICIDADE DE BACTÉRIAS ASSOCIADAS A NEMATÓIDES ENTOMOPATOGÊNICOS EM SPODOPTERA FRUGIPERDA (LEPIDOPTERA: NOCTUIDAE) SALVADORI, J. D. 1 ; VOSS, M. 2 ; CARLINI, C.R. 1 ; SALVADORI, J.R. 2 1 PPG em Biologia Celular e Molecular da UFRGS, Centro de Biotecnologia, Av. Bento Gonçalves, 9500 Porto Alegre, RS. jusalvadori@cbiot.ufrgs.br 2 EMBRAPA TRIGO, Caixa Postal 451, Passo Fundo, RS. Nematóides entomopatogênicos (NEPs) pertencem aos gêneros Steinernema e Heterorhabditis e apresentam associação simbiótica com bactérias dos gêneros Xenorhabdus e Photorhabdus, respectivamente. Os NEPs têm evidenciado potencial para o controle de pragas devido a características como capacidade de dispersão no solo, busca pelo inseto hospedeiro, morte de insetos-alvo em baixas doses e curto espaço de tempo e facilidade de multiplicação. Invadem o corpo do hospedeiro, atingem a hemocele e liberam as células bacterianas na hemolinfa, as quais matam o inseto. Essas bactérias sintetizam toxinas, proteases e moléculas antibióticas, envolvidas na eliminação de competidores, na colonização do hospedeiro e como fatores de virulência. Foi conduzido ensaio para avaliar a virulência de quatro isolados de NEPs da coleção da Embrapa Trigo (NEPET 5, 15, 32 e 33) em Spodoptera frugiperda, empregando-se unidades experimentais contendo 10 lagartas individualizadas, com oito repetições. Em folhas trituradas de milho depositadas sobre as lagartas (em jejum de 24 horas) foram aplicados 50 JIs de cada isolado e água no controle. Os índices de mortalidade obtidos após 7 dias foram de 23, 67, 70 e 17%, respectivamente. As bactérias dos NEPETs 5 e 15, isoladas e cultivadas em meio nutritivo, foram avaliadas quanto à patogenicidade para S. frugiperda, em unidades experimentais contendo 10 lagartas individualizadas, com quatro repetições. Suspensas em solução salina, as bactérias foram injetadas, com microsseringa, diretamente na hemocele das lagartas, exceto no grupo controle, que recebeu apenas a solução salina. A mortalidade acumulada três dias após foi de 30 e de 100% nas lagartas que receberam bactérias dos NEPETs 5 e 15, respectivamente. Os resultados dos ensaios são convergentes e evidenciam a ação patogênica das bactérias. Estudos relacionados à imunidade celular do inseto e a identificação de moléculas bacterianas envolvidas neste processo contribuirão para elucidar diferenças na mortalidade induzida por diferentes isolados de NEPs.

2 Palavras-chave: NEPs, controle microbiano. Apoio financeiro: Embrapa e CNPq.

3 EFEITO DO NEMATÓIDE Heterorhabditis sp. IBCB N24 NA MORTALIDADE DE Ceratitis capitata E Anastrepha fraterculus EM CAMPO DE CITROS CANESIN, A ngela 2 ; SANTOS, Honório Roberto 2 ; LEITE, Luís Garrigós 1 ; TAVARES, Fernando Martins 1 ; SCHMIDT, Fabio Silber 1 ; WALDER, Julio Marcos Melges 3 ; COSTA, Maria de Lourdes Zamboni 3 ; LOPES, Luis Anselmo 3 ; CRISPIM Bruno Amaral 2 ; BACCARIN, Pedro 4 1 INSTITUTO BIOLÓGICO, CP 70, Campinas, SP, CEP UNIVERSIDADE FEDERAL DA GRANDE DOURADOS, Rua João Rosa Góes, 1761, Dourados, MS, CEP , angelacanesin@ufgd.edu.br 3 ESALQ/USP, CP 9, Piracicaba, SP, CEP CITROVITA AGRO INDUSTRIAL, CP 153, Catanduva, SP, CEP Nematóides entomopatogênicos têm sido considerados como agentes potenciais para uso no controle das moscas-dasfrutas na fase de pupa que ocorre no solo. O ensaio teve por objetivo avaliar o efeito de três dosagens do nematóide Heterorhabditis sp. IBCB n24 na mortalidade das moscas-das-frutas Ceratitis capitata e Anastrepha fraterculus, em campo de citros localizado em área da Citrovita, Itapetininga, SP. Para cada inseto foram considerados quatro tratamentos representados pelo nematóide nas dosagens de 1x10 8, 3,5x10 8 e 1x10 9 JI/ha e pela testemunha. Os tratamentos foram representados, cada um, por uma planta de citros, separados entre si por uma planta não tratada e utilizando uma linha de citros não tratada para separar os tratamentos das duas espécies do inseto. O nematóide foi aplicado sobre o solo, na projeção da copa da planta, com o auxílio de um regador, na vazão equivalente de 2 L/planta. Previamente à aplicação do nematóide, o solo foi descoberto de palhada e de mato com o auxílio de uma enxada e umedecido com 4 L de água/planta. Em seguida, oito envelopes preparados com tela plástica (malha 20 mash) de 20 x 20 cm, fechados nas extremidades com grampos, foram distribuídos na área e enterrados parcialmente em posição vertical, com a extremidade acima do nível do solo permanecendo aberta. Dentro de cada envelope foi colocado cerca de 100g de solo e, em seguida, liberado 10 insetos na fase de pré-pupa. O nematóide foi então aplicado sobre a área delimitada, atingindo o interior dos envelopes. Após a aplicação, as aberturas dos envelopes foram fechadas. A avaliação foi realizada com base no número de adultos emergidos dentro dos envelopes. Para C. capitata, o nematóide proporcionou níveis de mortalidade corrigida variando de 46 a 71%, enquanto que para A. fraterculus, os níveis de mortalidade variaram de 55 a 67%. Palavras-chave: controle biológico, Heterorhabditidae, Tephritidae Apoio financeiro: Citrovita

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5 TESTE DE COMPATIBILIDADE DE STEINERNEMA ARENARIUM COM PRODUTOS SANITÁRIOS VISANDO O CONTROLE DE ALPHITOBIUS DIAPERINUS ALVES, Viviane Sandra 1 ; NEVES, Pedro Manoel Janeiro 2 ; ALVES, Luis Francisco Angeli 3 ; HOLZ, Nicole 4. 1 Bolsista de Pós-Doutorado CNPq; UENP, Departamento de Ciências Biológicas, Campus Centro, Cornélio Procópio, , PR. vivialves21@hotmail.com 2 Bolsista Produtividade CNPq; UEL, Universidade Estadual de Londrina, PR. 3 Bolsista Produtividade CNPq; UNIOESTE, Universidade Estadual do Oeste do Paraná. 4 Bolsista PIBIC; UNIOESTE, Universidade Estadual do Oeste do Paraná. Os nematóides entomopatogênicos apresentam várias vantagens em relação a outros grupos de entomopatógenos, das quais pode-se destacar sua capacidade de ação sinergística com produtos fitossanitários. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de Steinernema arenarium na presença de produtos químicos que são utilizados na desinfecção do aviário visando o controle de Alphitobius diaperinus. Foram avaliados 04 produtos: TH4, Glutasil, Tesaclor e AVT-80. Para o teste de compatibilidade foi utilizada a metodologia de Vainio (1992), modificada por Negrisoli (2005). Os produtos foram preparados com o dobro da concentração recomendada, e 1 ml da solução foi adicionada a um tubo de vidro de fundo chato (a testemunha recebeu apenas água destilada), que posteriormente recebeu também 1 ml de suspensão contendo 2000 Juvenis Infectantes (JIs). O experimento foi avaliado após 48 horas, considerando-se os parâmetros viabilidade e infectividade. Para avaliar a viabilidade dos JIs, estes foram contabilizados com auxílio de estilete para determinação dos indivíduos vivos e mortos. Para a avaliação da infectividade os tubos foram completados com 3 ml de água destilada e deixados decantar por meia hora na geladeira, o sobrenadante foi descartado e a lavagem repetida por três vezes. Após a lavagem, cerca de 100 JIs foram pipetados e aplicados em placas de Petri contendo 10 lagartas de G. mellonella, que após oito dias foram dissecadas e verificada a presença de nematóides. Quanto à viabilidade, apenas o produto AVT-80 foi considerado incompatível para uso em conjunto com nematóides entomopatogênicos. Os demais produtos foram considerados compatíveis, sendo as porcentagens de viabilidade 57, 62 e 73% para TH4, Tecsaclor e Glutasil respectivamente. No que se refere a infectividade, Glutasil foi o produto que mais afetou o nematóide, apresentando apenas 12% de infecção. Os produtos Tecsaclor, TH4 e AVT-80 apresentaram valores de 30, 37 e 92% respectivamente. Palavras-chave: Steinernematidae, avicultura, nematóides entomopatogênicos.

6 Apoio financeiro: CNPq.

7 EFEITO DA CAMA DE AVIÁRIO SOBRE STEINERNEMA ARENARIUM NO CONTROLE DE ALPHITOBIUS DIAPERINUS ALVES, Viviane Sandra 1 ; NEVES, Pedro Manoel Janeiro 2 ; ALVES, Luis Francisco Angeli 3 ; HOLZ, Nicole 3. 1 UENP, Departamento de Ciências Biológicas, Campus Centro, Cornélio Procópio, , PR. vivialves21@hotmail.com 2 UEL, Universidade Estadual de Londrina, PR. 3 UNIOESTE, Universidade Estadual do Oeste do Paraná. O cascudinho, Alphitobius diaperinus é uma das pragas mais importantes em aviários, e cujo controle é dificultado em função dos hábitos crípticos do inseto. Os nematóides entomopatogênicos têm demonstrado potencial de controle para o cascudinho em testes realizados em condições de laboratório, de maneira que o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da cama de aviário sobre a eficiência de controle de Steinernema arenarium, sobre larvas e adultos do cascudinho. No estudo potes plásticos de 20 x 15 x 15 (comprimento x largura x altura) receberam uma camada de algodão hidrofílico (1 cm), e em seguida foram umedecidos com 30 ml de água destilada. Sobre o algodão foi colocado uma folha de papel filtro e em seguida 200 g de solo estéril. Sobre o solo foi inoculado o nematóide (100 Juvenis Infectantes/ cm 2 ), e adicionadas 50 g de cama de aviário, onde foram liberados os insetos (50 insetos/ pote). Foram utilizados insetos adultos com boa mobilidade, e larvas de 5º instar. Cada tratamento foi repetido quatro vezes, e o tratamento testemunha (larvas e adultos) recebeu apenas água destilada. Em seguida os potes foram cobertos com tecido do tipo voal e acondicionados em câmara de germinação a 26±1ºC, fotoperíodo de 12 horas. A cada 3 dias, 30 ml de água foram adicionados a cada pote com auxílio de pipeta, derramando-se a mesma nas bordas do pote. A avaliação foi feita após 7 dias, através da contagem de insetos mortos e vivos e os dados foram submetidos a análise de variância e a teste de médias Skott-Knott. Nos tratamentos com adultos não houve diferença entre a testemunha e o tratamento com nematóides, sendo que ambos apresentaram 0% de mortalidade. Já para os tratamentos com larvas, ouve diferença significativa do tratamento testemunha para o tratamento com nematóides, que apresentou uma média de 42,5% de mortalidade. Palavras-chave: Steinernematidae, cama de aviário, avicultura, nematóides entomopatogênicos. Apoio financeiro: CNPq.

8 EFEITO DE NEMATÓIDES ENTOMOPATOGÊNICOS (RHABDITIDA: HETERORHABDITIDAE, STEINERNEMATIDAE) SOBRE SPODOPTERA FRUGIPERDA (LEPIDOPTERA: NOCTUIDAE) EM CASA-DE-VEGETAÇÃO ANDALÓ, Vanessa; SANTOS, Viviane; MOREIRA, Grazielle Furtado; MOREIRA, Camila; MOINO Jr., Alcides UFLA, Departamento de Entomologia, Lavras, MG, A lagarta-do-cartucho, Spodoptera frugiperda (Smith, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae), é a principal praga da cultura do milho no Brasil. O aumento no plantio do milho safrinha e o uso do sistema de plantio direto favorecem o desenvolvimento da lagarta e dificultam seu controle. O uso de nematóides entomopatogênicos (NEP) apresenta grande potencial no controle desse inseto-praga nesse sistema de plantio, devido ao ambiente favorável a sua multiplicação e à sua alta virulência. Desta forma, teve-se por objetivo avaliar a ação dos NEP Heterorhabditis sp. RSC2 e Steinernema anomali sobre lagartas de S. frugiperda em condições de casa-de-vegetação. A semeadura do milho foi realizada em vasos plásticos de 2 ml, contendo 1,5 kg de solo (latossolo vermelho) coberto com 2,5 cm de palhada de milho e adicionados 200 ml de água. Os vasos foram fechados usando 3 suportes de madeira nas bordas, cobertos com tecido do tipo voil e elástico. Após 7 dias foram adicionados 100 ml de água e inoculados os nematóides, sendo estes aplicados na quantidade de JI/vaso. Em seguida, foram colocadas 40 lagartas (uma lagarta/repetição) e os vasos foram novamente cobertos. Na testemunha não foi aplicada nematóide, apenas água. As avaliações foram realizadas após 4 dias e os dados obtidos submetidos à análise de variância pelo teste Scott-Knott (p<0,05). Os nematóides Steinernema anomali e Heterorhabditis sp. RSC2 causaram mortalidade de 77,5 e 87,5%, respectivamente, diferindo da testemunha que causou 7,5% de mortalidade. Desta forma, os nematóides testados foram capazes de causar mortalidade em S. frugiperda nas condições testadas quando em casa-de-vegetação, sendo observado o potencial para testes posteriores em condições de campo. Palavras-chave: controle biológico, lagarta-do-cartucho, Heterorhabditis, Steinernema

9 EFEITO DE DIFERENTES TEMPERATURAS SOBRE A EFICIÊNCIA DE STEINERNEMA ARENARIUM NO CONTROLE DE ALPHITOBIUS DIAPERINUS (COLEOPTERA: TENEBRIONIDAE) ALVES, Viviane Sandra 1 ; NEVES, Pedro Manoel Janeiro 2 ; ALVES, Luis Francisco Angeli 3 ; HOLZ, Nicole 4. 1 Bolsista de Pós-Doutorado CNPq; UENP, Departamento de Ciências Biológicas, Campus Centro, Cornélio Procópio, , PR. vivialves21@hotmail.com 2 Bolsista Produtividade CNPq; UEL, Universidade Estadual de Londrina, PR. 3 Bolsista Produtividade CNPq; UNIOESTE, Universidade Estadual do Oeste do Paraná. 4 Bolsista PIBIC; UNIOESTE, Universidade Estadual do Oeste do Paraná. O coleóptero Alphitobius diaperinus conhecido popularmente como cascudinho de aviário destaca-se como uma das principais pragas que ocorrem nesse ambiente. Este inseto, além de hospedar vários patógenos nocivos às aves, também é responsável por sérios danos no trato digestivo e ainda provocar queda na conversão alimentar quando trocados pela ração na alimentação dos frangos. Seu controle é dificultado em função dos hábitos crípticos, ficando abrigado na cama das aves, no solo e em orifícios das instalações. Entretanto, nematóides entomopatogênicos têm mostrado potencial de controle em testes de laboratório. Desta forma, este trabalho teve como objetivo avaliar a influencia da variação de temperatura sobre a eficiência de Steinernema arenarium no controle de adultos de A. diaperinus. O experimento foi realizado em cinco diferentes temperaturas: 18, 22, 26, 30 e 34º C, sendo que em cada temperatura foram considerados dois tratamentos: tratado e não tratado com nematóides (testemunha). Cada tratamento consistiu de quatro repetições, correspondentes a uma placa de petri de nove cm de diâmetro, contendo papel filtro duplo, a qual recebeu 2 ml de suspensão (100 Juvenis Infectantes/inseto) e em seguida os insetos (15 insetos adultos/placa). As placas receberam também uma pequena porção de ração para frangos previamente esterilizada, em seguida foram acondicionadas em potes plásticos e armazenadas em câmara de germinação durante cinco dias. Após esse período, foram contabilizados o número de insetos mortos e os dados submetidos a análise de variância e regressão. Observou-se ao final do experimento que nas temperaturas 18, 22 e 26º C a porcentagem de mortalidade causada pelo nematóide foi de 72, 71 e 68% respectivamente, não havendo diferença significativa entre as mesmas. As temperaturas 30 e 34ºC interferiram significativamente nos resultados, de maneira que não houve mortalidade nestes dois tratamentos. Palavras-chave: Pragas Avícolas; Controle Microbiano; Manejo de Pragas; Nematóides Entomopatogênicos. Apoio financeiro: CNPq.

10 DETERMINAÇÃO DA CL 99 DE STEINERNEMA ARENARIUM SOBRE ALPHITOBIUS DIAPERINUS ALVES, Viviane Sandra 1 ; NEVES, Pedro Manoel Janeiro 2 ; ALVES, Luis Francisco Angeli 3 ; HOLZ, Nicole 4. 1 Bolsista de Pós-Doutorado CNPq; UENP, Departamento de Ciências Biológicas, Campus Centro, Cornélio Procópio, , PR. vivialves21@hotmail.com 2 Bolsista Produtividade CNPq; UEL, Universidade Estadual de Londrina, PR. 3 Bolsista Produtividade CNPq; UNIOESTE, Universidade Estadual do Oeste do Paraná. 4 Bolsista PIBIC; UNIOESTE, Universidade Estadual do Oeste do Paraná. Alphitobius diaperinus (Coleotpera: Tenebrionidae) é uma das pragas mais importantes que atacam aviários de corte no Brasil e no mundo. Seu controle é dificultado em função de seus hábitos crípticos, ficando abrigado na cama das aves, no solo e em orifícios das instalações. Entretanto, nematóides entomopatogênicos têm bom potencial de controle em testes realizados em condições de laboratório. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo determinar a CL 99 de Steinernema arenarium sobre insetos adultos de A. diaperinus. Foram utilizadas dez diferentes concentrações: 0, 1, 5, 10, 50, 100, 150, 200, 300 e 400 Juvenis Infectantes (JIs)/ inseto. Cada tratamento foi repetido 4 vezes, sendo que cada parcela consistiu em uma placa de petri de nove cm de diâmetro, contendo papel filtro duplo, a qual recebeu 2 ml de suspensão (com a respectiva concentração) e em seguida os insetos (15 insetos adultos/placa). As placas receberam também uma pequena porção de ração para frangos previamente esterilizada, e em seguida foram acondicionadas em potes plásticos e armazenadas em câmara de germinação durante cinco dias. Após esse período, foi contabilizado o número de insetos mortos sendo os dados submetidos a análise de variância e regressão. Todos os tratamentos que receberam nematóides apresentaram valores significativos de mortalidade. A menor concentração avaliada (1JI/ inseto) causou 17% de mortalidade, valor que cresceu proporcionalmente a medida que a concentração foi aumentada, sendo que a CL 99 foi determinada em 180 JIs/ inseto, ou o equivalente a aproximadamente 50 JIs/cm 2. Palavras-chave: Steinernematidae, Concetrações, Avicultura, Controle Microbiano. Apoio financeiro: CNPq.