CHROMABOND. QuEChERS MACHEREY-NAGEL. Soluções convenientes para sua análise de pesticidas SPE. Cromatografia
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- Gabriella Fagundes Eger
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1 MACHEREY-NAGEL CHROMABOND QuEChERS Soluções convenientes para sua análise de pesticidas SPE Be the early bird Catch them with the right mix! O consagrado CHROMABOND Diamino (PSA) preparado no mix para QuEChERS Cromatografia
2 QuEChERS metodologia Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe estas são as demandas para a preparação da análise moderna de alimentos. O QuEChERS (pronounciado como catchers ) método, desenvolvido por Anastassiades et al. em 2003, [1] e o subsequente desenvolvimento de misturas prontas para o uso atendem a estas demandas. QuEChERS tornou-se ométodo da escolha na preparação de amostraspara a análise de pesticidas e drogas em frutas,vegetais e outros produtos alimentícios. Vantagens do QuEChERS em comparação com métodos clássicos de purificação: Fácil manipulação e economia de tempo Dispensável a utilização de vidrarias Baixo consumo de solventes Sem a necessidade de solventes clorados Grande quantidade de pesticidas podem ser analisados Rigoroso método com elevada proporção de recuperação Melhora na produtividade laboratorial Nossos produtos ajudam você a manter um olhar próximo nos alimentos! H 3 C O O CH 3 P O N S CH H 3 2
3 Ready! Set! Go! Seus benefícios Pronto para o uso. 3
4 QuEChERS procedimento* É simples e consiste em dois passos: Passo 1 Extração e salting-out 1. A amostra é homogeneizada, e.x., com gelo seco em um liquidificador. 5. Adicione a mistura de extração ao tubo para centrífuga. Opcional: verifique e ajuste o ph entre com 5 mol/l de solução de NaOH. 2. Pese 10 g da amostra em um tubo para centrífuga. 6. Agite vagarosamente por 1 min. 3. Adicione 10 ml de acetonitrila e padrão interno. IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII 7. Centrifuge por 5 min a > 3000 g. Para a determinação de pesticidas com grupos ácidos, o extrato bruto deve ser analisado diretamente (preferível por LC/MS ESI neg.). 4. Agite vagarosamente por 1 min. *Procedimento descrito de acordo com o método EN 15662:
5 Passo 2 Clean-up dspe 1. Transfira uma alíquota do sobrenadante em um tubo para centrífuga contendo o mix de purificação. Esta fase sólida dispersiva do mix de extração (dspe) remove componentes da matriz como óleos, esteróides e pigmentos. 3. Centrifugue por 5 min a > 3000 g. 2. Agite por 30 s. 4. Transfira o sobrenadante para um vial acidificado com 5 de ácido fórmico em acetonitrila (10 µl/ml extrato) e analise a amostra por LC/MS ou CG/MS. 5
6 Selecione o correto produto QuEChERS para sua amostra! Para cada um dos passos, nós provemos as misturas CHROMABOND apropriadas. Os conteúdos são pré-pesados e misturados de acordo com método padronizado: Passo 1 Extração e salting-out Método Peso da amostra Solvente Conteúdo da mistura Mist. No. 10 g 10 ml acetonitrila 4 g MgSO 4, 1 g NaCl, 15 g 15 ml 1 ácido EN 15662:2008 Mix I Citrato tamponado [2] 0.5 g Na 2 H citrato 1.5 H 2 O, 1 g Na 3 citrato 2 H 2 O AOAC g MgSO 4, 1.5 g Na acetato Mix II Acetato tamponado [3] acético em acetonitrila Original 10 g 10 ml acetonitrila 4 g MgSO 4, 1 g NaCl Mix XII Não tamponado [1] Amostras com menos de 80 de conteúdo de água requerem a adição de água fria suficiente. A quantidade de água necessária é listada na tabela abaixo [2]. Tipo de amostra Peso da amostra Adição de água Nota Frutas e vegetais > 80 conteúdo de água Frutas e vegetais conteúdo de água 10 g Cereais 5 g 10 g 10 g x g x = 10 g menos a quantidade de água na amostra Frutas secas 5 g 7.5 g Água pode ser adicionada durante o passo de fragmentação Mel 5 g 10 g Condimentos 2 g 10 g Referências [1] M. Anastassiades, S. J. Lehotay, D. Stajnbaher, F. J. Schenck, J. AOAC Int. 86 (2003), [2] EN 15662:2008 Foods of plant origin Determination of pesticide residues using GC-MS and/or LC-MS/MS following acetonitrile extraction/ partitioning and clean-up by dispersive SPE QuEChERS method. [3] AOAC Official Method , Pesticide Residues in Foods by Acetonitrile Extraction and Partitioning with Magnesium Sulfate. 6
7 Passo 2 Clean-up por dspe Propriedade da amostra Conteúdo da mistura EN AOAC Baixo conteúdo de gordura MgSO 4 maçã pera Diamino (PSA) damasco abacaxi aspargo morango brócolis Mix III Mix XX Conteúdo moderado de clorofila e carotinóides cenoura alface café chá MgSO 4 Diamino (PSA) Carbon (GCB) Mix IV Mix XVII Alto conteúdo de clorofila e carotinóides pimenta espinafre amora framboesa MgSO 4 Diamino (PSA) Carbon (GCB) Mix V Alto conteúdo de gordura MgSO 4 abacate cereais noz carne vermelha frango carne de porco produtos diários solo óleos papinha Diamino (PSA) C 18 ec Mix VI Mix XIX Adsorventes e suas aplicações MgSO 4 NaCl CHROMABOND Diamino (PSA) (Amina primária e secundária) CHROMABOND C 18 ec (sílica modificada fase reversa) CHROMABOND Carbon (GCB) (Carbono Grafilizado Preto) Remover excesso de água Separação de fases Remover ácidos e gorduras orgânicas, açúcares e pigmentos antocianina Reter compostos não polares e.x., lipídios Remover pigmentos e esteróides Nota: pesticidas planares também são removidos 7
8 Aplicações Maça MN Appl. No / Nesta aplicação nós descreveremos o uso com sucesso do CHROMABOND QuEChERS Misturas I e III para a análise da classe de 25 multiplos pesticidas residuais em maçã* que foram compradas em um armazém local. Subsequente análise por LC/MS/M realizada com a nova NUCLEODUR C 18 Gravity-SB (condições veja na próxima página). Azeite de oliva MN Appl. No / Esta aplicação descreve o uso das misturas de CHROMABOND QuEChERS para a análise da classe de 25 multiplos pesticidas residuais em azeite de oliva* (comprado em um armazém local). A extração e purificação realizadas com sucesso com as Misturas II and XIX. Subsequente análise por LC/MS/MS foi realizada com a nova NUCLEODUR C 18 Gravity-SB (condições veja na próxima página) min min Pré-tratamento da amostra: Pese 10 g da amostra homogeneizada em um tubo para centrífuga com capacidade para 50 ml (REF ) Adicione 9,2 ml de acetonitrila, adicione 0,8 ml da solução padrão do pesticida (1 µg/ml de cada composto em acetonitrila) Agite a mistura por 1 min Agite a amostra com o Mix I e centrifugue (5 min a 4500 rpm, 5 C) Transfira 6 ml do sobrenadante em um tubo para centrífuga com capacidade para 15 ml, o qual é pré-preenchido com CHROMABOND QuEChERS Mix III, agite por 1 minuto e centrifugue novamente (5 min a 4500 rpm, 5 C) O sobrenadante é analisado por LC/MS/MS Pré-tratamento da amostra: Pese 3 g de amostra em um tubo para centrífuga vazio com capacidade para 50 ml (REF ) Adicione 7,0 ml de água, adicione 9,2 ml de acetonitrila (0,25 em ácido fórmico) e 0,8 ml da solução padrão do pesticida (1 µg/ml de cada composto em acetonitrila) Agite a mistura por 1 minuto Agite a amostra com o Mix II e centrifugue (5 min a 4500 rpm, 5 C) Transfira 6 ml do sobrenadante em um tubo para centrífuga com capacidade para 15 ml, o qual é pré-preenchido com CHROMABOND QuEChERS Mix III, agite por 1 minuto e centrifugue novamente (5 min a 4500 rpm, 5 C) O sobrenadante é analisado por LC/MS/MS RSD RSD Acefato 85 2 Ometoato 90 1 Atrazina 92 3 Fosalona Azoxistrobina Fosmete 92 3 Carbaril Tebuconazol 90 4 Clorpirifós Tiaclopride 83 6 Coumafós Propizamida Ciprodinil 96 3 Mevinfós Diazinona Fenazaquina Dimetoato Clofentezina 94 3 Ethion Tebufenozida Etoprofós Miclobutanila 88 4 Metamidofós 88 3 Imidacloprida 89 6 Metomil Acefato Atrazina Azoxistrobina Carbaril Clorpirifós Coumafós Ciprodinil Diazinona Dimetoato Ethion Etoprofós Metamidofós Metomil RSD RSD 85 4 Ometoato Fosalona Fosmete Tebuconazol Tiaclopride Propizamida Mevinfós Fenazaquina Clofentezina Tebufenozida Miclobutanila Imidacloprida * Os alimentos foram fortificados com padrão de pesticida. 8
9 Papinha MN Appl. No / Esta aplicação descreve o uso do CHROMABOND QuEChERS Misturas para a análise da classe de 25 múltiplos pesticidas resíduais em alimento infantil* o qual foi comprado em um armazém local. A extração e a extração e purificação foi realizada com sucesso com as misturas I e VI. Análise subsequente realizada com LC/MS/MS foi realizado com a nova coluna NUCLEODUR C 18 Gravity-SB. Espinafre MN Appl. No / Nesta aplicação descrevemos o uso do CHROMABOND QuEChERS Mis - turas I and V para análise da classe de 25 múltiplos pesticidas residuais em espinafre* o qual foi comprado em um armazém local. Análise subsequente realizada com LC/MS/MS foi realizada com a nova coluna NUCLEODUR C 18 Gravity-SB min Pré-tratamento da amostra: análigo ao procedimento realizado em maçãs Extração: Mix I Purificação: Mix VI RSD RSD Acefato 78 1 Ometoato 84 2 Atrazina 95 2 Fosalona 75 2 Azoxistrobina Fosmete Carbaril Tebuconazol 85 2 Clorpirifós 58 4 Tiaclopride 99 2 Coumafós 74 2 Propizamida 98 2 Ciprodinil 62 1 Mevinfós Diazinona 92 3 Fenazaquina 42 4 Dimetoato 97 2 Clofentezina 73 2 Ethion 77 4 Tebufenozida 99 6 Etoprofós 99 1 Miclobutanila Metamidofós 80 8 Imidacloprida 99 2 Metomil 97 1 Limite de quantificação (LOQ) µg/kg Limite de detecção (LD) µg/kg extrato bruto após extração após limpeza extrato bruto após extração após limpeza Acefato Atrazina Azoxistrobina Carbaril Clorpirifós Coumafós Ciprodinil Dimetoato Ethion Etoprofós Metamidofós Metomil Ometoato Fosalona Fosmete Tebuconazol Tiaclopride Propizamida Mevinfós Clofentezina Tebufenozida Miclobutanila Imidacloprida min Pré-tratamento da amostra: análigo ao procedimento realizado em maçãs Extração: Mix I Acefato Atrazina Azoxistrobina Carbaril Clorpirifós Coumafós Ciprodinil Diazinona Dimetoato Ethion Etoprofós Metamidofós Metomil Purificação: Mix V RSD RSD Ometoato Fosalona Fosmete Tebuconazol Tiaclopride Propizamida Mevinfós Fenazaquina Clofentezina Tebufenozida Miclobutanila Imidacloprida Análise subsequente por HPLC 250 µl QuEChERS extrato é avolumado para 1 ml com Eluente A, a mistura é filtrada com o filtro para seringa CHROMAFIL Xtra PET-20/13 (REF ) antes da realização da injeção Condições HPLC Coluna: 100 x 3 mm NUCLEODUR C 18 Gravity-SB, 3 µm, (REF ) Eluente: A) 5 mmol/l formato de amônio em água B) 5 mmol/l formato de amônio em metanol (dissolva o formato de amônio em 5 ml de água e avolume para 1L com metanol) Gradiente: B em 10 min, 90 B por 5 min Vazão: 0.5 ml/min Temperatura: 30 C Injeção: 10 µl Deteção: MS 9
10 Informações para compra Misturas para extração Tubo para centrífuga com capacidade para 15 ml com tampa rosca Método Mist. No. Conteúdo da mistura Volume Quantidade REF EN Mix I 4 g MgSO 4, 1 g NaCl, 0.5 g Na 2 H citrate 1.5 H 2 O, 1 g Na 3 citrate 2 H 2 O 15 ml AOAC Mix II 6 g MgSO 4, 1.5 g NaOAc 15 ml Original Mix XII 4 g MgSO 4, 1 g NaCl 15 ml Misturas para purificação 15 ml tubo para centrífuga com tampa rosca 2 ml tubo para centrífuga com tampa Método Mist. No. Conteúdo da mistura Volume Quantidade REF EN Mix III 0.90 g MgSO 4, 0.15 g CHROMABOND Diamino EN Mix IV 0.90 g MgSO 4, 0.15 g CHROMABOND Diamino, 15 mg CHROMABOND Carbon EN Mix V 0.90 g MgSO 4, 0.15 g CHROMABOND Diamino, 45 mg CHROMABOND Carbon EN Mix VI 0.90 g MgSO 4, 0.15 g CHROMABOND Diamino, 150 mg CHROMABOND C 18 ec AOAC Mix XVII 0.15 g MgSO 4, 50 mg CHROMABOND Diamino, 50 mg CHROMABOND Carbon AOAC Mix XIX 0.15 g MgSO 4, 50 mg CHROMABOND Diamino, 50 mg CHROMABOND C 18 ec AOAC Mix XX 1.20 g MgSO 4, 0.40 g CHROMABOND Diamino 15 ml ml ml ml ml ml ml
11 Serviços especiais para necessidades especiais Misturas customizadas estão disponíveis sob demanda. Misturas de adsorventes para extração: MgSO 4 NaCl Na 2 H citrato 1.5 H 2 O Na 3 citrato 2 H 2 O Na acetato outros Misturas de adsorventes para purificação: MgSO 4 CHROMABOND Diamino (PSA) CHROMABOND C 18 ec CHROMABOND Carbon (GCB) NaCl Alox N Florisil CaCl 2 NaHCO 3 outros Tamanhos (da esquerda para a direita): 2 ml 15 ml 50 ml Embalagens de alumínio 11
12 Do you need products for subsequent analyses? MACHEREY-NAGEL provides everything from one source for your competitive advantage.... we Meet your Needs Seu distribuidor local: Carvalhaes Produtos para Laboratório Ltda. Av. Presidente Getúlio Vargas, 8806 Distrito Industrial CEP: Alvorada - RS Tel.: Fax: vendas@carvalhaes.net Traduzido por: Carvalhaes rev.00 MACHEREY-NAGEL GmbH & Co. KG Neumann-Neander-Str Düren Germany Germany and international: Tel.: Fax: info@mn-net.com Switzerland: MACHEREY-NAGEL AG Tel.: Fax: sales-ch@mn-net.com France: MACHEREY-NAGEL EURL Tel.: Fax: sales-fr@mn-net.com USA: MACHEREY-NAGEL Inc. Tel.: Fax: sales-us@mn-net.com
Aluna do curso de Graduação em Engenharia Química da UNIJUÍ, bolsista iniciação científica
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