Substâncias pesquisadas quantidade diversidade. Limitações em toxicologia forense tecnologia; NPS e padrões analíticos; limites
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- Luana Cecília Cipriano Sá
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1 Serviço de Química e Toxicologia Forense, delegação Sul do INMLCF, I.P. Substâncias pesquisadas quantidade diversidade Análise toxicológica orientada Análise toxicológica sistemática Limitações em toxicologia forense tecnologia; NPS e padrões analíticos; limites 1
2 Folha de trabalho do processo Série Série: Amostras e controlos (negativos e positivos) 2
3 Habitualmente os métodos analíticos consistem em três etapas: Preparação de Amostras Análise Instrumental Tratamento de Resultados SPE LLE SPME Filtração Purificação Concentração Diluição GC/FID GC/MS LC/MS espetrofotometria Imunoensaios Software Modelos estatísticos Modelos de calibração Preparação da amostra Diluição da amostra Metanol e água Amostra Lavagem Secagem Eluição Análise 3
4 Álcool e Voláteis Cromatograma obtido com um detector FID Métodos de rastreio: Reacções imuno-enzimáticas Simplicidade de execução [ Execução de um elevado número de análises em pouco tempo ] Economia [ Baixo custo por análise ] Sensibilidade [ Menor número possível de falsos resultados negativos ] Os resultados positivos têm que ser confirmados! 4
5 Métodos analíticos de confirmação Métodos que utilize detectores capazes de fornecer informação relevante sobre a estrutura dos compostos. Métodos de Confirmação Qualitativos Identificam inequivocamente a presença de uma substância na amostra Métodos de Confirmação Quantitativos Identificam inequivocamente a presença de uma substância na amostra e indicam a respetiva concentração. A preparação de amostras é comum aos métodos de rastreio, confirmação e quantificação por cromatografia. Confirmação Diluição da amostra Metanol e água Amostra Lavagem Secagem Eluição Análise 5
6 Triagem direccionada Amostra Controlo positivo Confirmação Abundance Time--> Abundance Ion Confirmação Qualitativa Time--> Abundance Ion Time--> Ion Resultado: Positivo / Negativo 6
7 Ion Haloperidol Confirmação Quantitativa 5 Calibradores (mínimo) Controlos negativos: Branco de reagentes Amostra branca Sangue Controlos positivos em duplicado (CB, CM, CA) Replicados das amostras Série conjunto de amostras e de controlos de qualidade Branco de reagentes negativo e sem interferentes Branco de sangue negativo e sem interferentes Controlos positivos com 3 níveis de concentração Confirmação qualitativa Amostras: TR relativo com desvio < 1% rácios iónicos nos intervalos permitidos picos com S/R>3 Abundance Time--> Abundance Time--> Abundance 2 Confirmação quantitativa Curva de calibração: pelo menos 5 pontos (calibradores) 4 linear (r 2 2 >,99) Time--> exata (pelo menos 1 dos controlos com desvios < 2%) Ion Ion Ion Amostras : replicados com diferença inferior ao limite de repetibilidade SGQ 7
8 Triagem Comprova-se a ausência das substâncias alvo na amostra analisada Amostra: Sangue cavidade cardíaca e outras Série: amostras e controlos (negativos e positivos) Resultado: Negativo Análise: metodologia simples, sensível, rápida e menos selectiva (ex: imunoensaio) Confirmação qualitativa Comprova-se a presença da substância na amostra analisada Resultado: Positivo / Negativo Amostra: Sangue Periférico / outra Série: amostras e controlos (negativos e positivos: BR, BS, CB, CM, CA) Análise: muito selectiva (ex: MSD) Confirmação quantitativa Comprova-se a presença da substância na amostra e calcula-se a sua concentração Amostra: Sangue Periférico Série: amostras e controlos (negativos e positivos: duplicados) calibradores (mínimo 5) Resultado: amostras em duplicado xxx ng/ml Análise: muito selectiva, linear, reprodutível, precisa e exata (ex: MSD) 8
9 Resultados do SQTF positivo ou negativo; qualitativo ou quantitativo; interpretação; incerteza Certeza vs Incerteza Controlo de qualidade 9
10 Acreditação A validação de um método analítico é um processo através do qual são determinadas as principais características de desempenho e as limitações do método assim como os fatores com capacidade de influência no próprio método 1
11 Fase pré-analítica Redistribuição post-mortem Acondicionamento Colheita da amostra Condições de armazenamento e transporte 11
12 Fase analítica Volume Padrões Temperatura Curva de calibração Massa Outras fontes Calibração Precisão Recuperação Pureza Temperatura Volume Calibração Repet. Incerteza da medição Ex.:,28 ±,4 g/l Diluição da amostra 12
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