EXTRATOS VEGETAIS: ATIVIDADE ANTIMICROBIANA E GENÉTICO SOBRE PLASMÍDIOS DE RESISTÊNCIA A ANTIBIÓTICOS EM MICRORGANISMOS

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1 60 EXTRATOS VEGETAIS: ATIVIDADE ANTIMICROBIANA E GENÉTICO SOBRE PLASMÍDIOS DE RESISTÊNCIA A ANTIBIÓTICOS EM MICRORGANISMOS Andréia Vieira Pereira 1 ; Viviane Araújo da Silva 2 ; Andréia Fernanda Ramos de Freitas 2 ; Maria Do Socorro Vieira Pereira 2 ; Luiz Fernando Annunziata Trevisan 3 ; Maria Regina Macêdo Costa 4 RESUMO - O objetivo deste trabalho é avaliar a atividade antimicrobiana dos extratos de Solanum paniculatum Linnaeus, Punica granatum Linn, Rosmarinus officinalis Linn, Momordica Charantia Linn, Psidium guajava Linn, Lippia sidoides Cham, Myrciaria cauliflora, Anacardium occidentale Linn oriundos do semi-árido sobre amostras de Staphylococcus aureus de origem amostras de origem bovina. Foi realizada a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos extratos vegetais sobre 20 linhagens bacterianas pelo método de difusão em meio sólido. Os resultados demonstram que todas as amostras ensaiadas são sensíveis aos extratos vegetais testados, sendo observado halos de inibição que variaram de 6 a 29mm para as amostras bovinas. Considerando maior atividade nos extratos de S. paniculatum e P.granatum, com formação de halos em todas as diluições utilizadas. A inibição do crescimento apresentou-se homogênea, de acordo com o grau de concentração do extrato da planta. Unitermos: Plantas medicinais, fitoterapia, semi-árido PLANT EXTRACTS: ANTIMICROBIAL ACTIVITY AND GENETIC STUDIES OF RESISTANCE PLASMIDS TO ANTIBIOTICS IN MICROORGANISMS ABSTRACT - The objective of this study is to evaluate the antimicrobial activity of semi-aridum extracts of Solanum paniculatum Linnaeus, Punica granatum Linn, Rosmarinus officinalis Linn, Momordica Charantia Linn, Psidium guajava Linn, Lippia sidoides Cham, Myrciaria cauliflora, Anacardium occidentale Linn on strains of Staphylococcus aureus origin of samples of bovine origin. Was performed to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of plant extracts on 20 bacterial strains by the diffusion method on solid medium. The results show that all samples tested are sensitive to plant extracts tested, being observed inhibition zones ranging from 6 to 29mm for the bovine samples. Whereas greater activity in extracts of S. paniculatum and P.granatum with the formation of halos in all dilutions used. Inhibition of growth presented homogeneous, according to the degree of concentration of the extract of the plant. Uniterms: Medicinal plants, phytotherapy, semi-arido INTRODUÇÃO A multiresistência em S. aureus resulta da presença de plasmídeos, geralmente em múltiplas cópias, o que garante não somente a sua distribuição na divisão celular, mas principalmente permite a transferência em freqüência mais elevada (Lacey, 1974), sem causar na maioria das vezes um custo biológico para a célula bacteriana. Embora em amostras bovinas a resistência múltipla não seja muito freqüente, o envolvimento de plasmídeos de resistência a antibióticos e íons metálicos, tem sido demonstrado (Pereira, 1995). Desde os tempos mais remotos, o homem busca nas plantas a cura de doenças. 1 Aluno(a) do Programa de Pós-Graduação em Zootecnia pela UFCG. Bolsista do CNPq. Av. Universitária, s/n, Bairro Santa Cecília, CEP: , Patos-PB. andreiavet@hotmail.com 2 Unidade Acadêmica de Ciências Biológicas, UFPB. Av. Cidade Universitária - João Pessoa PB, CEP vieirapereira@uol.com.br

2 61 3 Aluno (a), Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária, UFCG, Patos, PB, Av. Universitária, s/n, Bairro Santa Cecília, CEP: , Patos-PB. luiztremsn@hotmail.com 5 Aluno(a) do Programa de Pós-Graduação em Odontologia pela UFRN, Av. Salgado Filho,1787-Lagoa Nova, Natal RN, CEP: mariareginamacedo@hotmail.com O conhecimento e a utilização de algumas plantas e os efeitos das drogas de origem vegetal formam atentamente observados, até a sistematização do seu uso. A utilização das plantas pela população tem como a evidência de sucesso a pesquisa científica, que traz o conhecimento químicofarmacológico e utilização terapêutica (Matos, 1991). No tocante ao estudo de mastites bovinas e outras afecções causadas por S. aureus, também é de grande importância a verificação da existência, ou não, de capacidade antimicrobiana, atividade na cura de resistência a outros antibióticos e na redução da capacidade de transferência de genes, dos extratos de plantas medicinais do semi-árido paraibano. Neste contexto o objetivo deste trabalho é avaliar a atividade antimicrobiana dos extratos de Solanum paniculatum Linnaeus, Punica granatum Linn, Rosmarinus officinalis Linn, Momordica Charantia Linn, Psidium guajava Linn, Lippia sidoides Cham, Myrciaria cauliflora, Anacardium occidentale Linn sobre amostras de Staphylococcus aureus de origem amostras de origem bovina. MATERIAIS E MÉTODOS Coleta das espécies estudadas O presente trabalho foi desenvolvido nos laboratórios de Ciências Químicas e Biológicas da Universidade Federal de Campina Grande UFCG do Centro de Saúde e Tecnologia Rural-CSTR, e Laboratório de doenças infecto contagiosas da UFRPE. O material vegetal das espécies oriundos da região do semi-árido foi coletado no Centro de Saúde e Tecnologia Rural - CSTR, Campus de Patos UFCG, Campus de Patos UFCG, Após a colheita e identificação botânica as amostras foram acondicionadas em sacos de papel comum, aerados e em seguida postas para secagem em estufa de ventilação forçada a 40 C. Após 72 horas a amostra foi moída e acondicionada em reservatórios de vidro estéreis até seu uso. Obtenções dos Extratos Etanólicos Para formulação de todos os extratos foram utilizados 500g de casca do caule de Solanum paniculatum (Jurubeba), Punica granatum (Romã), Rosmarinus officinalis (Alecrim), Momordica Charantia (Melão de São Caetano), Psidium guajava (Goiabeira), Lippia sidoides (Alecrimpimenta), Myrciaria cauliflora (Jabuticabeira) e Anacardium occidentale (Cajueiro) para 1L de etanol, deixando a mistura sob extração por 72h, a determinação e concentração foram realizadas segundo a metodologia de Matos (1997). O extrato foi diluído em: 1:1; 1:2; 1:4; 1:8; 1:16 e 1:32 para a determinação da atividade antimicrobiana da planta testada. Aquisição das amostras de Staphylococcus aureus de origem bovina. Os isolados clínicos foram coletados de bovinos em fase de lactação, infectadas naturalmente, a coleta das amostras foi realizada após lavagem da teta com água e sabão, secagem com papel toalha e desinfecção do óstio do teto, utilizando-se álcool etílico a 70º GL. Coletou-se aproximadamente 5 ml de leite por quarto mamário, de maneira asséptica, com tubo inclinado na posição horizontal (Bouchot et al., 1985). Sendo também coletado material através de swabs das fossas nasais de animais que apresentarão secreção. Estas amostras foram armazenadas em tubos rosqueados estéreis, identificados e enviados sob refrigeração em caixas de material isotérmico, para a realização do exame microbiológico, e identificação do Staphylococcus aureus, além das 20 amostras clínicas de S. aureus de origem bovina, foi também utilizado amostra padrão de ATCC 29213, ATCC e ATCC 6538 no Laboratório de Genética e Microbiologia da Universidade Federal da Paraíba- CCEN, onde foram processadas, como controle positivo utilizou-se os seguintes

3 62 discos impregnados de antibióticos: gentamicina (10 mcg), amoxicilina (10 mcg), ciprofloxacina (5mcg). Para o teste utilizando os extratos etanólicos sobre as linhagens bacterianas, a Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi determinada pela atividade antimicrobiana, com base no diâmetro dos halos de inibição, sendo estes superiores a 11mm, as placas foram incubadas em estufa bacteriológica a 37º C por um período de 24h. (Catão, 2006). Foram feitas cavidades de aproximadamente 6 mm de diâmetro no ágar-base, as quais receberam 50µL da solução do extrato diluído em água destilada, de acordo com as diluições pré-estabelecidas e para o controle negativo utilizou-se água destilada. Os halos foram medidos em milímetros (mm) em relação ao seu diâmetro e a concentração inibitória mínima (MIC), estimada de acordo com a metodologia do NCCLS (2003). A maior atividade antimicrobiana foi dada aos extratos que apresentaram halos superiores a 11. Para a comparação da atividade antimicrobiana entre as diferentes concentrações da substância tânica, foi realizada análise estatística do tipo descritivo, calculando-se as freqüências absolutas e relativas (Sampaio, 1998). RESULTADOS E DISCUSSÃO A determinação da atividade antimicrobiana dos extratos do vegetais sobre as amostras de Staphylococcus aureus estudadas possibilitou a avaliação e determinação da concentração inibitória mínima (CIM), que foi determinada com base nos diâmetros dos halos de inibição. Os resultados percentuais obtidos nas amostras selecionadas estão apresentados nas figuras 1 e 2. Os resultados aqui apresentados demonstram que todas as amostras ensaiadas são sensíveis aos extratos vegetais testados. Observaram-se halos de inibição que variaram de 6 a 29mm para as amostras bovinas. Sendo observada maior atividade nos extratos de S. paniculatum e P.granatum, com formação de halos em todas as diluições utilizadas. A inibição do crescimento apresentou-se homogênea, de acordo com o grau de concentração dos extratos das plantas em estudo. Silva et.al., (2008) investigaram a ação antimicrobiana e a inibição de aderência in vitro do extrato hidroalcoólico de R. officinalis sobre cepas padrão de Streptococcus mitis, Streptococcus sanguinis, Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus e Lactobacillus casei, não havendo inibição de crescimento de S. mitis, e as CIMAs frente a S. mutans e S. sobrinus variaram nas diluições de 1:8, 1:16 e 1:8, nessa ordem. Pereira et. al.(2006) realizaram estudos com o extrato da casca de A. occidentale sobre Staphylococus aureus, Escherichia coli e E. gergoviae onde a análise dos dados indicou que houve moderada inibição contra as diferentes linhagens bacterianas. A ação anti-microbiana de espécies de Anacardium occidentale têm sido investigada. Macêdo (2008) avaliou a atividade antibacteriana in vitro dos extratos do caule e folhas da Myrciaria cauliflora Berg sobre Streptococcus mitis, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguinis, Streptococcus salivarius e Lactobacillus casei microrganismos do biofilme dental, formou halos de inibição que variaram de 10 a 18 mm. Oliveira et al., 2006 que avaliaram a efetividade do óleo essencial da Lippia sidoides Cham. na inibição do crescimento de cepas de Staphylococcus aureus observando grandes halos de inibição do crescimento bacteriano mm. Segundo Alves et.al., (2009) o extrato de P. guajava mostra- se eficazes, inibindo o crescimento S. mutans, S. mitis, S. sanguis, S. sobrinus, L. casei, Candida albicans, Candida tropicalis, Candida stelatoidea e Candida krusei. Pereira et al., (2006) avaliaram o extrato de Punica granatum, usado para inibir o crescimento bacteriano sobre as cepas de Staphylococus aureus, Escherichia coli e Enterobacter gergoviae, observando halos de até 22mm. Em trabalhos realizados por Miguel, et al. (2009) que realizaram avaliações da atividade antimicrobiana de extratos de Solanum paranense, Solanum paniculatum e Solanum pseudocapsicum sobre seis espécies de bactérias (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Aeromonas hydrophila, S. aureus, Listeria e Bacillus subtilis), onde os

4 63 resultados indicaram o potencial antimicrobiano dos extratos destas plantas nativas, particularmente os extratos metanólicos Solanum paniculatum e Solanum pseudocapsicum. Figura 1 - Concentração Inibitória Mínima (halos de inibição em mm) em meio sólido dos extratos vegetais hidroalcoólicos sobre as linhagens de Staphylococcus aureus. Figura 2 - Concentração Inibitória Mínima (halos de inibição em mm) em meio sólido dos extratos vegetais hidroalcoólicos sobre as linhagens de Staphylococcus aureus. CONCLUSÃO Os resultados obtidos indicam a importante significância clínica de se avaliar meios alternativos e economicamente viáveis para o controle de infecções em medicina clínica, como também de se realizar novas pesquisas com outras amostras. Neste contexto, pode-se concluir que os extratos vegetais apresentam potenciais de atividade antimicrobiana in vitro sobre linhagens de

5 64 Staphylococcus aureus de origem bovina, Este resultado provavelmente está associado a presença de compostos fenólicos em sua composição, e confirmam a potencialidade desses extratos para a possível utilização dessa substância em indicações terapêuticas. Os melhores resultados foram obtidos com os extratos de Punica granatum (Romã), Solanum paniculatum (Jurubeba) e Anacardium occidentale (Cajueiro), tendo eles obtido halos de inibição de 20, 17 e 10 mm, respectivamente, na concentração de 1:08, sendo o extrato de Myrciaria cauliflora (Jabuticabeira) o único que não apresentou nenhuma atividade antimicrobiana nessa mesma concentração. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS Alves P. M.; Queiroz L.M.G.; Pereira J. V.; Pereira M.S.V. (2009). Atividade antimicrobiana, antiaderente e antifúngica in vitro de plantas medicinais brasileiras sobre microrganismos do biofilme dental e cepas do gênero Candida. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical. v.42, n.2, p Bouchot, M.C.; Catel, J.; Chirol, C.; Ganiere, J.P.; Menec, L. E.M., (1985). Diagnostic bactériologique des infections mammaries des bovins. Recuell de Medicina Veterinaire, p Catão, R.M.R.; Antunes, R.M.P; Arruda, T.A.; Pereira, M.S.V; Higino, J.S.; Alves, J.A.; Passos, M.G.V.M. & Santos, V.L. (, 2006). Atividade antimicrobiana in vitro do extrato etanólico de Punica granatum linn. (romã) sobre isolados ambulatoriais de Staphylococcus aureus. Revista Brasileira de Análises Clínicas. v. 38, n.2, p Lacey, R. W. & Chopra, I. (1974). Genetic studies of a multiresistant strain of Staphylococcus aureus. Journal of Medical Microbiology, v.7, p Macêdo, M.R.C. (2008). Atividade antibacteriana e antiaderente in vitro dos extratos de Mimosa Tenuiflora (Willd.) Poir. e Myrciaria cauliflora Berg. sobre microrganismos do biofilme. Monografia (Graduação em Odontologia). Universidade Federal da Paraíba, Paraíba-PB. Matos, F. J. A. (1997). Introdução à fitoquímica experimental. UFC Edições. p Miguel C.; Delamare A. P. L.; Andrade L. B.; Laguna S. E.; Swapna, P.L.; Kannabiran, K. ( 2009). Atividade Antimicrobiana de Glicoalcalóides e Extratos de Espécies Nativas de Solanum. XVII Encontro de Jovens Pesquisadores, Universidade de Caxias do Sul, Caxias do Sul. NCCLS. (2003). Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests; Approved Standard Eighth Edition. NCCLS document USA, M2-A8, v.23, n.1. OliveirA, F. P. et al., (2006). Effectiveness of Lippia sidoides Cham. (Verbenaceae) essential oil in inhibiting the growth of Staphylococcus aureus strains isolated from clinical material. Review Brasilian Farmacognosy, João Pessoa, v.16. n.4, p Pereira M. S. V. ; Rodrigues O.G.; Feijó F.M. C.; Athayde A. C.R; Lima E. Q.;Maria Sousa R. Q. (2006). Atividade antimicrobiana de extratos de plantas no Semi-Árido Paraibano. Agropecuária Científica no Semi-árido, v.2, n.1. Pereira, M. S. V. & Siqueira Júnior, J. P., (1995). Atimicrobial drug resistance in Staphylococcus aureus isolated from cattle in Brazil. Letters in Applied Microbiology, 20:

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