ESTUDO DO POTENCIAL ANTIOXIDANTE E ANTIMICROBIANO DE EXTRATO NATURAL DE FOLHAS DE OLIVEIRA EM VEGETAIS (VMP s)

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1 ESTUDO DO POTENCIAL ANTIOXIDANTE E ANTIMICROBIANO DE EXTRATO NATURAL DE FOLHAS DE OLIVEIRA EM VEGETAIS (VMP s) Rauschkolb, Jean 1 ; Dacroce, Dorli 2 ; Dalla Rosa, Andréia 1 ; Fronza, Nei 1, Vargas Junior, Álvaro 1 ; Bortolini Foralosso, Fabiana 1 1 Instituto Federal Catarinense, Concórdia/SC; 2 Epagri, Chapecó/SC INTRODUÇÃO As propriedades sensoriais dos alimentos tem sido uma das maiores exigências dos consumidores. Têm-se a busca por alimentos menos industrializados com poucos conservantes, com características de frescor, que sejam seguros e de fácil manuseio. Entretanto, os consumidores desejam associar tais atributos a valores nutricionais adequados às necessidades humanas e as propriedades funcionais. Com isso, novas tecnologias e aplicações de diferentes estratégias a fim de controlar o crescimento microbiano e as reações de oxidação enzimática estão sendo estudadas, podendo ser destacados compostos naturais que liberam substâncias capazes de inibir e/ou diminuir uma reação ou processo indesejável. A substituição de aditivos sintéticos por naturais aplicados em alimentos tem fomentado a crescente pesquisa dos extratos vegetais, através da caracterização de matérias-primas e identificação de novos compostos (DEL RÉ; JORGE, 2012). Diversas plantas são de grande interesse por apresentarem compostos com potencial efeito na inibição enzimática e microbiológica, sendo mais relevantemente ainda quando a origem da matéria prima é proveniente de subprodutos, que são economicamente baratos e acessíveis. A oliveira é uma das plantas com potencial para esta aplicação, através da utilização de extratos provenientes das folhas oriundas da poda das plantas. Em adição, evidências científicas têm mostrado que além do azeite, as folhas e ramos de oliveira apresentam propriedades antioxidantes e físico-químicas. Estudos revelam que o chá da folha 1 Curso de Bacharelado em Engenharia de Alimentos Trabalho financiado com apoio do CNPq

2 de oliveira apresenta potente ação moduladora de radicais livres, ação anticancerígena, e antimicrobiana (MAISTRO, 2012). Neste contexto, pesquisas com uma maior contribuição tecnológica, direcionadas ao desenvolvimento e aperfeiçoamento da aplicação destes compostos alternativos podem trazer resultados importantes para a indústria de alimentos e para os consumidores, bem como agregação de valor a um subproduto agrícola. Por ser uma técnica promissora para a conservação de alimentos, com perspectivas de interesse industrial, este trabalho objetiva estudar o potencial antimicrobiano e antioxidante desse extrato com propriedades ativas para aplicação em vegetais minimamente processados. MATERIAL E MÉTODOS Preparação do extrato As folhas foram coletadas na unidade experimental da Epagri em Chapecó-SC, secas em estufa 45ºC por 24 horas e posteriormente trituradas. Na sequência, 10g do triturado foi misturado a uma solução hidroalcoólica (41:59) e submetido a ultrassom por 25 minutos. Completada esta etapa, o extrato foi filtrado em sistema de filtragem a vácuo e concentrado em rotavapor até a remoção completa do álcool. Posteriormente congelado e liofilizado por 48 horas em liofilizador até a obtenção pó. Preparo da solução de extrato de folha oliveira O extrato seco de folha de oliveira (500 mg) foi dissolvido em metanol, transferido quantitativamente para um balão volumétrico de 100 ml e o volume final foi completado com metanol. Uma alíquota de 40 ml desta solução foi filtrada com membrana 45µm e acondicionada em tubos de falcon. Posteriormente foram realizadas diluições estoque contendo 5000 a 250 mg/ml para a realização das analises. Determinação dos compostos Fenólicos totais (FT) O teor de fenólicos totais do extrato etanólico das folhas de oliveiras foi medido em triplicata utilizando-se um espectrofotômetro na região do visível (760 nm). Os resultados são expressos em miligrama de ácido gálico por grama de amostra após construção de curva de calibração com padrão de ácido gálico. 2

3 Determinação de Flavonóides totais O teor de Flavonóides totais do extrato etanólico das folhas de oliveiras foi medido em triplicata utilizando-se um espectrofotômetro na região do visível (510 nm). Os resultados são expressos em miligrama de ácido gálico por grama de amostra após construção de curva de calibração com padrão de ácido gálico. Determinação da atividade antimicrobiana A atividade antimicrobiana foi testada pelo método de difusão em disco (NCCLS, 2003) utilizando-se como microorganismos cepas Gram positiva de Staphylococcus aureus ATCC e Gram negativa de Escherichia coli ATCC Preparo dos vegetais minimamente processados, aplicação do extrato e acompanhamento da vida-de-prateleira Os VMP (batata rosa) foram higienizados, sanificados e cortado em discos de 1 cm e imersos por 5 minutos em 3 tratamentos diferentes: 1) Controle; 2) solução de metabissulfito de potássio (MK) 0,03% (m/v) e 3) extrato liofilizado ressuspenso em água destilada 0,03% (m/v). Em seguida, as amostras foram embalados em filme PVC e mantidos sobre refrigeração a 7ºC para avaliação da vida-de-prateleira nos tempos: zero, 4, 8, 12, 16 e 20 dias de armazenamento. Determinação do efeito antioxidante (EAE) A determinação dos parâmetros de cor foi realizada através da medida instrumental por colorímetro (Minolta Color Reader, modelo CR200), com fonte de luz padronizada, usandose as coordenadas L*, a*, b*. Atividade de água (aw) A atividade de água de cada amostra foi determinada em triplicata à temperatura de 25 C, utilizando-se o instrumento Novasina Labmaster Stand. Contagem de microorganismos psicrotróficos para estimativa da vida de prateleira dos produtos As análises foram realizadas em triplicata, conforme metodologia proposta pelo Compendium of Methods for the Microbiological Examinations of Food (APHA, 2001). 3

4 RESULTADOS E DISCUSSÃO Os resultados obtidos na determinação dos fenólicos totais (FT), teor de flavonoides totais, concentração de antioxidante no extrato fenólico em relação ao BHA e atividade de sequestrante de radical livre em porcentagem (% ASRL) são apresentados na Tabela 1. Tabela 1: Resultados obtidos para extrato de folha de oliveira Fenólicos (mg EGAL.g -1 *) Flavonóides (mg ECAT.g -1 *) [ ] padrão BHA (mg.g -1 ) DPPH % ASRL em BHA y = 0,009x - 0,122 y = 0,0017x - 0,0132 y = -0,0004x + 0,5806 %ASRL= ((Ac-At)/Ac)*100 R² = 0,9861 R² = 0,9978 R² = 0, ,74±6,44 229,33± 9, ± 12,5 41,2% mg EGAL.g -1 *: mg de equivalentes de acido gálico por g de extrato. mg ECAT.g -1 *: mg de equivalentes de catequina por g de extrato. Os resultados obtidos na determinação do efeito antioxidante, contagem de microorganismos psicrotróficos para estimativa da vida de prateleira e atividade de água dos VMP nos tempos 0, 4, 8, 12, 16 e 20 dias para os tratamentos controle, MK e com a adição de extrato são reportados na Tabela 2. Tabela 2: Efeito antioxidante, Aw e contagem de microrganismos psicrotróficos durante o armazenamento dos VMP. Analise EAE/Tempo (dias) Média± dp Controle Média± dp Extrato Média± dp MK 0 43,72±4,12 38,38±1,03 42,96±3, ,84±3,30 41,27±5,20 39,77±3, ,05±3,69 38,35±2,80 41,59±2, ,25±7,30 39,69±4,64 38,96±4, ,3±2,40 42,96±2,86 46,26±1, ,72±9,74 39,77±2,70 49,57±5,35 Analise Aw/Tempo (dias) Média± dp Controle Média± dp Extrato Média± dp MK 0 0,97±0,00 1±0,00 1±0,00 4 0,98±0,00 0,97±0,00 0,98±0,00 8 0,98±0,00 0,98±0,00 0,98±0, ,97±0,01 0,98±0,00 0,98±0, ,98±0,00 0,98±0,00 0,98±0, ,98±0,00 0,98±0,00 0,98±0,00 MO'sUFC.g -1 /Tempo (dias) Média Controle Média Extrato Média MK x x x x x x x x x x x x x x x x x x

5 A variação de cor e contagem psicotróficos para os tratamentos nos tempo zero e 20 horas foram respectivamente, controle: (43,72 a 41,71 e 6,0 x 10 1 a 2,4 x 10 4 UFC/g); MK (38,38 a 39,77 e 1, a 3,6 x 10 4 UFC/g); extratos ressuspensos: (42,96 a 49,57 e 1, a 4, UFC/g). Segundo dados reportados na literatura o processo de liofilização apresenta efeito negativo na liberação de compostos bioativos em folhas de oliveiras, justificando o baixo desempenho do extrato como agente antioxidante e antimicrobiano. O Uso do extrato não alterou a Aw do VMP em relação aos tratamentos controle e com o uso do MK. CONCLUSÕES Concluiu-se que o extrato de folhas de oliveira na concentração de 0,03% em batata minimamente processada, não apresentou o efeito antioxidante e antimicrobiano desejado. Trabalhos futuros poderão ser desenvolvidos para avaliar seu potencial testando-se novas concentrações do extrato, bem como outras formas de extração e aplicação em outros vegetais. REFERÊNCIAS APHA - American Public Health Association. In Downes & Ito (Eds.). Compendium for the Microbiological examination of Foods (4 th ed.) Washington. 676 p DEL RÉ, P.V.; JORGE, N. Especiarias como antioxidantes naturais: aplicações em alimentos e implicação na saúde. Revista Brasileira de Plantas Medicinais, vol. 14 nº 2, MAISTRO, L. C., MIYA, N. T. N.; SANT ANNA, A. S.; PEREIRA, J. L. Microbiological quality and safety of minimally processed vegetables marketed in Campinas, SP Brazil, as assessed by tradicional and alternative methds. Food Control, v. 28, p , NCCLS. The National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests; Approved Standard Eighth Edition. NCCLS document M2-A8 [ISBN ]. NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania USA,