REB Volume 8 (1): , 2015 ISSN DETERMINAÇÃO DE COLIFORMES TERMOTOLERANTES E TOTAIS PRESENTES NAS MÃOS DE PESCADORES AMADORES

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1 138 REB Volume 8 (1): , 2015 ISSN DETERMINAÇÃO DE COLIFORMES TERMOTOLERANTES E TOTAIS PRESENTES NAS MÃOS DE PESCADORES AMADORES DETERMINATION OF TOTAL AND THERMOTOLERANT COLIFORMS PRESENT IN THE HANDS OF ANGLERS Nicacia Monteiro Oliveira 1 Marcos Paulo Gonçalves Rezende 2 Israel Luz Cardoso 3 1. Bióloga formada pela Universidade Federal do Mato Grosso do Sul; Mestrando em Zootecnia na Universidade Estadual do Mato Grosso do Sul. Contato: nicaciamon@yahoo.com.br 2. Graduando em Zootecnia na Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal do Mato Grosso do Sul; Mestrando no Programa de Pós- Graduação em Zootecnia na Universidade Estadual do Mato Grosso do Sul. Contato: marcos_re_z@hotmail.com 3. Biólogo formado pela Universidade Federal do Mato Grosso do Sul; Especialista em Licenciamento Ambiental e Mestrando em Zootecnia na Universidade Estadual do Mato Grosso do Sul. Contato: israelcardoso2008@hotmail.com RESUMO Durante a prática de pesca um individuo na maioria dos casos não realiza higienização de suas mãos adequadamente, estando exposto a diversos fatores de contaminação, exemplo as diversas iscas. Objetivou-se determinar a quantidade de coliformes termotolerantes (CTE) e totais (CTO) presentes nas mãos de pescadores em um trecho do rio Aquidauana, Pantanal. Abordaram-se 6 grupos de pescadores, analisando em cada grupo, aleatoriamente as mãos de um dos integrantes, os CTE e CTO presentes nas

2 139 mãos de acordo com a Associação Brasileira de Normas Técnicas. Constatou-se presença de coliformes termotolerantes e totais nas mãos dos pescadores amadores, e mesmo após a higienização de suas mãos, ainda pode encontrar resquícios de contaminação. Sugerem-se projetos de extensão para divulgar a importância da prática de higienização das mãos aos pescadores, evitando possíveis doenças decorrentes dos coliformes termotolerantes e totais. Palavras-chave: contaminação; higienização; microorganismos; pesca. ABSTRACT During fishing practice an individual in most cases does not perform properly sanitizing your hands, being exposed to various contamination factors, eg the various baits. This study aimed to determine the amount of fecal coliform (CTE) and total (CTO) present in the hands of fishermen in a stretch of river Aquidauna, Pantanal. Boarded up six groups of fishermen, analyzing in each group, randomly hands of one of the members, the CTE and CTO present on the hands according to the Brazilian Association of Technical Standards. It found the presence of thermotolerant coliforms in the hands of anglers, and even after cleaning your hands, you can still find traces of contamination. We suggest extension projects to promote the importance of practicing hand hygiene fishermen, preventing possible diseases resulting from thermotolerant and total coliforms. Keywords: pollution; sanitation; microorganisms; fishing. 1. INTRODUÇÃO A parte superficial das mãos dos seres humanos possui grande capacidade de abrigar micro-organismos. Através da higienização das mãos, pode ser evitado ou reduzido os níveis de infecção por bactérias (OLIVEIRA & SILVA, 2008; OLIVEIRA et al., 2010). Entre os principais micro-organismos que podem ser encontrados nas mãos ou alimentos, cita-se coliformes totais e termotolerantes, podendo causar intoxicação alimentar estafilocócica (MURRAY et al., 2000).

3 140 Comumente a pesca por amadores é praticada como lazer, e ao entrarem em contato com diversos fatores que podem abrigar micro-organismos, como por exemplo as variadas iscas, os mesmos podem-se tornarem vulneráveis a contaminação. Para agravar essa situação, alimentos são levados para consumo durante a pesca, sendo as mãos por sua vez, não higienizadas adequadamente. Germano & Germano (2003) reportam que o contato das mãos sem higienização adequada contamina o alimento, e os micro-organismos passarão a ser desenvolvidos no trato intestinal do indivíduo. O controle higiênico sanitário tanto do alimento como de que quem está manipulando, é preponderante para prevenção das doenças de origem alimentar (KUHN et al., 2012) e caso não haja higienização adequada das mãos a todo o momento em que a pessoa for ingerir algum tipo de alimento, pode ocorrer contaminação, agravando em possíveis casos clínicos. Esse estudo portanto torna-se importante para subsidiar informações fundamental para o direcionamento de trabalhos de extensão com enfoque na conscientização da importância da higienização das mãos. Objetivou-se analisar por meio de contagem, a quantidade de coliformes termotolerantes e coliformes fecais presentes nas mãos de pescadores amadores em um pequeno trecho rio Aquidauana, (Aquidauana/ MS). 2. MATERIAL E MÉTODOS Em um trecho do rio Aquidauana, localizado na área urbana do município de Aquidauana/MS, abordaram-se 6 grupos de pescadores, avaliando-se os coliformes totais e termotolerantes presentes em suas mãos de acordo com as normas estabelecidas pela Associação Brasileira de Normas Técnicas (ABNT). Para coleta das amostras foram utilizados sacos plásticos esterilizados contendo 200 mililitros de água salina peptonada 0,1%. Cada pescador mergulhou as duas mãos (toda a superfície) no saco plástico em loco duas vezes, uma antes de lavar as mãos com sabão neutro e outra após a lavagem. Inseriram-se as amostras em caixa isotérmicas de gelo em gel e transportou-se ao laboratório da Universidade Federal do Mato Grosso do Sul para investigação da presença de coliformes totais e termotolerantes.

4 141 Realizou-se a investigação utilizando 35,52 gramas de EC médium, 51,24 gramas de Lauryl sulfate broth e 60 gramas de Brilliant Green bile broth 2%. A fim de obter-se a diluição foi empregado somente às diluições 10-1, 10-2, 10-3 nas análises das amostras. Utilizou-se a metodologia proposta por Silva et al. (2001) que foi a técnica dos tubos múltiplos pelo número mais provável (NMP/g). Para a determinação de Coliformes totais utilizou-se a técnica de tubos múltiplos pelo número mais provável (NMP/g). Foi feito a diluição 10-1, homogeneizando-se cada amostra de água coletada antes e após a lavagem das mãos de cada pescador com 225mL de água peptonada a 1% e as diluições seriadas (10-2, 10-3), semeou-se 1mL de cada diluição, em triplicata. O meio utilizado foi Caldo Lauril Sulfato broth e incubouse a 35 C durante 24 e 48 horas. A partir da leitura da combinação entre os tubos positivos (com crescimento e produção de gás nos tubos de Durham) e negativos foi determinado o NMP/g para coliformes totais. Fez-se a confirmação com Caldo Verde Brilhante Bile 2% nas mesmas condições de tempo e temperatura preconizados pela American Public Health Association (APHA, 1992). Os coliformes termotolerantes foram quantificados utilizando-se a técnica dos tubos múltiplos, com Caldo Escherichia coli (EC). Dos tubos positivos para Coliformes totais, fizeram-se as repicagens da cultura, para tubos com Caldo EC. Após a semeadura incubou-se a 44,5oC por 24 e 48 horas, em banho Maria, com séries de três tubos para cada diluição preconizada pela American Public Health Association (Apha, 1992). A partir da leitura da combinação entre os tubos positivos (com crescimento e produção de gás nos tubos de Durham) e negativos foi determinado o NMP/g para coliformes termotolerantes. Após a conclusão da interpretação dos valores dos microorganismos presente nas mãos dos pescadores, elaborou-se uma planilha onde cada grupo de pescador recebeu uma letra para identificação (A, B,.., F). Realizou-se a análise estatística descritiva da contagem dos coliformes por meio de distribuições absoluta e relativa conforme Sampaio (1998). Analisou-se variância para verificação de possíveis diferenças entre a presença e ausência de coliformes nas mãos dos pescadores antes e após a lavagem das mãos.

5 RESULTADOS E DISCUSSÕES Na tabela 1, estão expressas pelo número mais provável (NMP/g) às diluições 10-1, 10-2 e 10-3 das análises realizadas nas amostras (pescadores). Tabela 1. Contagem de coliformes termotolerantes na mão dos pescadores. Trat. Col. Termotolerantes NMP Col. Totais NMP 1mL 10-1 ml 10-2 ml1000ml 1mL 10-1 ml 10-2 ml 1000mL A AL APL B AL APL C AL APL D AL APL E AL APL F AL APL Trat.: tratamento; Col.: coliformes; AL: Antes da lavagem da mão do pescador; APL: Após a lavagem da mão do pescador. Observou que o grupo A apresentou menos de 30 coliformes termotolerante em suas mãos, sendo essa quantidade a menor comparada aos demais pescadores. Em consonância, o grupo A, apresentou valor inferior também para os coliformes totais. Tanto o grupo B como o C apresentou uma quantidade que excede 24 mil coliformes termotolerantes e totais nas mãos, não mudando essa situação após a lavagem das mãos. Esse mesmo fator foi observado no grupo D para os coliformes totais. Essa observação pode ser justificada, devido alguns microrganismos serem de difícil remoção e as suas colônias possuem mecanismos de defesa contra ações mecânica e/ou por agentes químicos (ROTTER, 1997).

6 143 Oliveira et al. (2008) estudando condição higiênico-sanitárias na mão de manipuladores de carne, observou que os coliformes totais e termotolerantes apresentaram-se presença elevada. Outro fator que sugere-se como interferência na eficaz da lavagem da mão dos pescadores do B, C e D, pode estar associado a algum tipo de lesão por contato com anzol ou outro tipo de material cortante, pois lesões cutâneas podem servir como locais de criação de colônias. Não observou diferença significativa (p<0,05) entre a presença e ausência de coliformes termotolerantes e totais antes e após a lavagem das mãos. Nesse sentido, presume-se que mesmo após a lavagem, as mãos podem conter micro-organismos, sugerindo portanto uma higienização com maior atenção. CLSI (2008) evidenciou que através da higienização das mãos, a uma redução nas taxas de infecção. Houve maior valor de coeficiente de variação (CV: 143,66%) entre as amostras oriundas do analise da presença de coliformes termotolerantes após a lavagem das mãos dos pescadores e menor nas amostras de coliformes totais antes da lavagem das mãos (CV: 56,64%), mas no geral, pode-se dizer que em todos os casos o coeficiente de variação foi alto, devido a grandes oscilações da quantidade de coliformes nas mãos dos pescadores. 4. CONSIDERAÇÕES FINAIS Constatou-se presença de coliformes termotolerantes e totais nas mãos dos pescadores amadores, e mesmo após a higienização de suas mãos, ainda pode encontrar resquícios de contaminação. Sugerem-se projetos de extensão para divulgar a importância da prática de higienização das mãos aos pescadores, evitando possíveis doenças decorrentes dos coliformes termotolerantes e totais. 5. AGRADECIMENTOS Adriana de Barros técnica do laboratório de Hidrologia Ambiental da UFMS, pelo suporte prático para análise microbiológico das amostras. REFERÊNCIAS 1. ABNT. Associação Brasileira de Normas Técnicas Disponível em: < Acesso em: 22/04/ 2013.

7 APHA. American Public Health Association. Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 1. ed. Washington: APHA, p. 3. CLSI. Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing: Eighteenth Informational Supplement. CLSI document M 100-S18, GERMANO, P. M. L.; GERMANO, M. I. S. Higiene e Vigilância Sanitárias de Alimentos. 1. Ed. São Paulo: Livraria Varela, p. 5. KUHN, C.R; GANDRA, E.A.; FERREIRA, L.R.; BARTZ, J.; GONZÁLES, A.P.; GAYER, C.F. Qualidade microbiológica de lanches comercializados na cidade de Pelotas RS. Global Science and Technology, v.5, n.3, p.01-10, MURRAY, K. et al. Use of ground beef model to assess the effect of the lactoperoxidase system on the growth of Escherichia coli O 157: H7, Listeria monocytogenes and Staphylococcus aureus in red meat. International Journal of Food Microbiology, v.57, n.2-3, p , OLIVEIRA, M.M.M.; BRUGNERA, D,F,; MENDONÇA, A.T; PICCOLI, R.H. Condição higiênico-sanitárias de máquinas de moer carne, mãos de manipuladores e qualidade microbiológica da carne moída. Ciência e Agrotecnologia, v.32, n.6, p , OLIVEIRA, A.C.; SILVA, R.S. Desafios do cuidar em saúde frente à resistência bacteriana: uma revisão, Revista Eletrônica de Enfermagem, v.10, n.1, p , OLIVEIRA, D.G.M.; SOUZA, P.R.; WATANABE, E.; ANDRADE, D. Avaliação da higiene das mãos na perspectiva microbiológica. Revista Panam Infectol, v. 13, n. 3, p.28-32, ROTTER, M. L. Hand Washing, hand disinfection, and skin disinfection - Prevention and control of nosocomial infeccions. 3 ed. London: BioMed Central Ltd, p SAMPAIO, I. B. M. Estatística aplicada à experimentação animal. 1. ed. Belo Horizonte: Fundação de Ensino e Pesquisa em Medicina Veterinária e Zootecnia, p.

8 SILVA, N.; JUNQUEIRA, V. C. A.; SILVEIRA, N. F. A. Manual de métodos de análises microbiológicas de alimentos. 1. ed. São Paulo: Livraria Varela, p.