PROGRAMA DE CONTROLE DE QUALIDADE ABH
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- Luiz Farias Campos
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1 PROGRAMA DE CONTROLE DE QUALIDADE ABH SUMÁRIO 1. INSTRUÇÕES GERAIS 1ª RODADA e 2ª RODADA INSTRUÇÕES MODALIDADE TIPIFICAÇÃO HLA Envio de Resultados Tipificação HLA Qualidade da Amostra Critérios de Avaliação e Desempenho da Modalidade Tipificação HLA... 6 a) Baixa e Média Resolução... 6 b) Alta Resolução INSTRUÇÕES MODALIDADE PRA Envio de resultados Modalidade PRA Definição do Consenso para Modalidade PRA Critérios de Avaliação Modalidade PRA... 8 a) Para Screening... 8 b) Para determinação de Especificidades Análise de Desempenho Modalidade PRA INSTRUÇÕES MODALIDADE PROVA CRUZADA Envio de resultados modalidade Prova Cruzada... 9 a) Modalidade Prova Cruzada CDC... 9 b) Modalidade Prova Cruzada Citometria de Fluxo Viabilidade celular Definições do Consenso para Modalidade Prova Cruzada a) Modalidade Prova Cruzada CDC b) Modalidade Prova Cruzada Citometria de Fluxo: Critérios de Avaliação Modalidade Prova Cruzada Analise de Desempenho Modalidade Prova Cruzada Página 1 de 10
2 1. INSTRUÇÕES GERAIS 1ª RODADA e 2ª RODADA TABELA 1 AMOSTRAS DA 1 RODADA DO CQ ABH-2013 TIPIFICAÇÃO HLA PRA PROVA CRUZADA CDC PROVA CRUZADA CITOMETRIA DE FLUXO 5 amostras de sangue em anticoagulante EDTA (nº 63, 64, 65, 66 e 67) 3 amostras de soro (nº 52, 53 e 54) 3 Amostra de soro (nº 52, 53 e 54) e 2 amostras de sangue em anticoagulante ACD (nº 9 e 10) 3 Amostras de soro (nº 52, 53 e 54) e 2 amostras de sangue em anticoagulante ACD (nº 11 e 12) TABELA 2 AMOSTRAS DA 2 RODADA DO CQ ABH-2013 TIPIFICAÇÃO HLA PRA PROVA CRUZADA CDC PROVA CRUZADA CITOMETRIA DE FLUXO 5 amostras de sangue em anticoagulante EDTA (nº 68, 69, 70, 71 e 72) 3 amostras de soro (nº 55, 56 e 57) 3 Amostra de soro (nº 55, 56 e 57) e 2 amostras de sangue em anticoagulante ACD (nº 13 e 14) 3 Amostras de soro (nº 55, 56 e 57) e 2 amostras de sangue em anticoagulante ACD (nº 15 e 16) Página 2 de 10
3 a) Resultados: Todos os resultados do CQABH devem ser preenchidos on-line no site A Identificação (ID) do usuário ( ) e senha é obrigatória. Se você esqueceu sua senha, entre em contato com a Comissão de Controle de Qualidade no qualidade@abh.net.br, no prazo máximo de 72h antes do término do envio de resultados. Siga as instruções no site: O prazo máximo de envio dos resultados : 07 de junho de 2013 às 23h59min. A inclusão tardia dos resultados não será aceita. b) Comentários: Os comentários não serão considerados como parte dos resultados e não serão utilizados na análise de desempenho. c) Correção de erros: Se for detectado erro após os resultados serem enviados, entrar novamente com ID e senha e modificar o que for necessário. As correções serão aceitas somente até o final do prazo de envio de resultados: 07 de junho de 2013 às 23h59min. d) Desempenho: Para avaliação de desempenho, serão consideradas todas as amostras enviadas no ano. Laboratórios com desempenho excelente e/ou bom receberão o certificado conforme a modalidade inscrita. Laboratórios com desempenho insatisfatório não receberão certificado e o Responsável Técnico será informado por carta. e) Questionamentos: Os questionamentos serão aceitos através do qualidade@abh.net.br. Página 3 de 10
4 2. INSTRUÇÕES MODALIDADE TIPIFICAÇÃO HLA O Controle de Qualidade da ABH foi concebido para avaliar o desempenho dos Laboratórios na Tipificação HLA por qualquer método. O Programa consiste em dois (2) embarques anuais, cada um composto de cinco amostras de sangue total em anticoagulante ACD. Os Laboratórios participantes devem utilizar o(s) método(s) que usam em sua rotina. Os resultados devem ser relatados conforme os métodos utilizados para a realização do teste, isto é, métodos moleculares de baixa, média e alta resolução. Para que o Laboratório receba o certificado de desempenho em média resolução todos os campos da coluna Código NMDP devem estar preenchidos Envio de Resultados Tipificação HLA Para inserir os resultados, primeiro selecione a amostra e depois entre com os resultados. A entrada padrão para todos os campos é NT (não testado). Os resultados devem ser inseridos em ordem crescente de dígitos, conforme a lista que aparece no campo do resultado. Selecione a 1ª coluna para inserir resultados de baixa resolução. Se aplicável, os equivalentes sorológicos de tipificação molecular devem ser selecionados nesta coluna. Selecione a 2ª coluna para inserir resultados de média resolução. O código NMDP deve ser digitado. Esta coluna pode ser utilizada quando resultados de alta resolução aparecem na tipificação de média resolução. Selecione a 3ª, 4ª e 5ª colunas para inserir os resultados de alta resolução. Nos resultados de baixa e alta resolução em que forem identificados uma única especificidade ou alelo, a segunda especificidade ou alelo deverá ser registrada como blank (-). Se na média resolução for identificada a mesma especificidade com dois códigos NMDP diferentes, ambos os resultados devem ser registrados. Por exemplo: Se detectado B*44:HREN e B*44:HREP, os dois resultados devem ser registrados. Se detectado B*44:HREN e B*44:HREN, apenas o primeiro grupo alélico deve ser registrado, o segundo deverá ser registrado como blank (-). Para a digitação de alta resolução, nos campos de alta resolução é usada a nova nomenclatura da OMS. Para maiores informações consulte o site Se for identificado um provável novo alelo, selecione "Novo" no campo de alta resolução e descreva os seus comentários no campo especifico. Página 4 de 10
5 Quando o laboratório não puder excluir um alelo ambíguo (ou alternativo) ou quando dois alelos diferirem fora dos exons 2 e 3 para classe I e fora do exon 2 para classe II deve-se usar os sufixos G e P, conforme definido pela Nomenclatura da OMS. Se o método de tipificação não distingue dois alelos que não são do grupo G ou P e que ambos estão especificados na lista dos Alelos Comuns e Bem Documentados, então esta não é uma tipificação de alta resolução. Recomenda-se que em tais casos se insira o resultado como NT, no campo alta resolução e digite os alelos ambíguos nos comentários. (Common and welldocumented HLA alleles: report of the Ad-Hoc committee of the American Society for Histocompatiblity and Immunogenetics. Hum Immunol. 68(5): ,2007). As ambiguidades que envolvem alelos cujas diferenças estão localizadas fora dos exons 2 e 3 para genes de classe I e fora do exon 2 para genes de classe II, mas que afetam sua expressão alelos nulos (N) ou de baixa expressão (L)] devem ser resolvidas nas situações citadas na tabela abaixo. Deve-se excluir o alelo N quando no fenótipo forem detectados os alelos ou grupos alélicos mencionados nesta tabela. Por exemplo, na amostra com tipificação HLA-B*44:03, o resultado HLA-C*04:01:01G não deve ser liberado, são obrigatórias estratégias que excluam o alelo HLA- C*04:09N. Métodos como PCR-SSP alelo especifico ou sequenciamento complementar permitem a diferenciação. Alelo Expresso Alelos/Grupos Alélicos presentes e que Alelo Nulo Comumente Relacionado requerem a resolução da tipificação A*24:09N A*24:02 B*40 ou B*27 B*51:11N B*51:01 A*02, C*15 e DRB1*04 A*02:01, C*15 e DRB1*04:02 C*04:09N C*04:01 B*44 ou principalmente B*44:03 Página 5 de 10
6 2.2. Qualidade da Amostra Para cada amostra é obrigatório indicar a qualidade do espécime: Boa para amostras que obtiveram resultados satisfatórios sem o processamento da mesma ou problemas no teste. Aceitável para amostras que apresentaram dificuldades no processamento ou nos testes, mas a partir das quais resultados confiáveis foram obtidos. Inaceitável é reservada para as amostras cujos resultados não foram confiáveis por problemas da mesma. Neste caso o resultado dever ser NT (não testado) Critérios de Avaliação e Desempenho da Modalidade Tipificação HLA a) Baixa e Média Resolução A análise da tipificação HLA de baixa e média resolução só poderá ser realizada quando os seguintes critérios forem preenchidos: Consenso de 80% entre os laboratórios e; Equivalência entre o resultado do consenso e o resultado da alta resolução do Laboratório de Referência. Se esses critérios não forem cumpridos a análise do desempenho não será enviada aos laboratórios. Desempenho Excelente: concordância de 100% das especificidades ou dos grupos alélicos com o consenso dos laboratórios e o Laboratório de Referência. Desempenho Bom: concordância de 95 a 99% das especificidades ou dos grupos alélicos com o consenso dos laboratórios e o Laboratório de Referência. Desempenho Insatisfatório: concordância menor do que 95% das especificidades ou dos grupos alélicos com o consenso dos laboratórios e o Laboratório de Referência. b) Alta Resolução O desempenho será avaliado em comparação com o resultado do Laboratório de Referência Internacional, American Red Cross - Northeast Division, Dedham, Ma, USA. Desempenho Excelente: concordância de 100% dos alelos com o resultado do Laboratório de Referência. Desempenho Bom: concordância de 90 a 99% dos alelos com o resultado do Laboratório de Referência. Desempenho Insatisfatório: concordância menor do que 90% dos alelos com o resultado do Laboratório de Referência. Página 6 de 10
7 3. INSTRUÇÕES MODALIDADE PRA O Controle de Qualidade da ABH foi concebido para avaliar o desempenho dos Laboratórios na detecção e definição de anticorpos Anti-HLA. O Programa consiste em dois (2) embarques anuais, cada um composto de três amostras de soro. O desempenho só será dado com o mínimo de 10 participantes, por categoria. Os Laboratórios participantes devem utilizar o(s) método(s) que usam em sua rotina. Os resultados devem ser relatados conforme os métodos utilizados para a realização do teste Envio de resultados Modalidade PRA Para inserir os resultados, primeiro selecione a amostra, relate o fabricante, selecione o método, insira o MFI dos controles e o valor de corte ( Cut Off ) quando necessário. Para o resultado do Screening classe I e II selecione positivo ou negativo. Nos resultados de Painel de Fenótipos classe I e II, insira o percentual e para cada especificidade selecione NT (não testado), N - Negativo ou P - Positivo. Para o resultado de Painel de antígenos isolados classe I e II, inserir o percentual calculado utilizando o banco de dados da sua região. Para cada especificidade selecione NT (não testado), N - Negativo ou P - Positivo Definição do Consenso para Modalidade PRA A análise dos resultados de PRA só poderá ser realizada quando os seguintes critérios forem atingidos: Mínimo de 10 participantes; Concordância do resultado de 80 % entre os laboratórios participantes. As especificidades que forem reportadas por mais que 80% dos laboratórios serão consideradas como consenso. As especificidades reportadas por apenas um laboratório serão consideradas discrepantes. Página 7 de 10
8 3.3. Critérios de Avaliação Modalidade PRA a) Para Screening Critério de avaliação para cada amostra de soro requer concordância com o consenso dos laboratórios, sendo avaliado em CONCORDANTE, DISCREPANTE ou SEM CONSENSO. b) Para determinação de Especificidades As especificidades relatadas pelo laboratório devem ser coincidentes com o consenso mínimo em 80%, para serem consideradas CONCORDANTES. Por exemplo: o consenso definiu 10 especificidades, o laboratório que definir no mínimo 8 dessas 10 especificidades (80%), será considerado CONCORDANTE. Caso o laboratório não atinja a concordância de 80% ou reporte mais de três especificidades apenas detectadas por ele, este resultado será considerado DISCREPANTE Análise de Desempenho Modalidade PRA Desempenho Excelente: acerto de 100%. Desempenho Bom: acerto de 80 a 99%. Desempenho Insatisfatório: acerto menor que 80%. 4. INSTRUÇÕES MODALIDADE PROVA CRUZADA O Controle de Qualidade da ABH foi concebido para avaliar o desempenho dos Laboratórios nas Provas Cruzadas por CDC e/ou Citometria de Fluxo. O Programa consiste em dois (2) embarques anuais: CDC - Embarque composto de três amostras de soro (as mesmas utilizadas na modalidade PRA) e duas amostras de sangue total em anticoagulante ACD. Citometria de Fluxo - Embarque composto de três amostras de soro (as mesmas utilizadas na modalidade PRA) e duas amostras de sangue total em anticoagulante ACD. Caso o laboratório esteja inscrito tanto em CDC como em Citometria de Fluxo ele receberá o embarque composto por 3 soros (as mesmas utilizadas na modalidade PRA) e 4 amostras de sangue total com anticoagulante ACD (2 amostras para CDC e 2 para Citometria de Fluxo) Os Laboratórios participantes devem utilizar o(s) método(s) que usam em sua rotina. A tipificação HLA das amostras de sangue enviadas estará disponível no site Os resultados devem ser relatados conforme os métodos utilizados para a realização do teste. Página 8 de 10
9 4.1. Envio de resultados modalidade Prova Cruzada Para inserir os resultados, escolha a combinação soro/célula correspondente. Insira os resultados conforme a técnica utilizada. a) Modalidade Prova Cruzada CDC O Laboratório deve informar no campo comentário se o soro utilizado foi tratado com Dithiotreitol (DTT). b) Modalidade Prova Cruzada Citometria de Fluxo Novidade: O Laboratório HLA Typing Laboratory, Queen Elizabeth II Health Sciences Centre, Halifax, Nova Scotia, Canada, participará do nosso Controle de Qualidade como Laboratório de Referência e como consultor na análise, interpretação e medidas para harmonização dos resultados. Portanto, solicitaremos mais informações do que simplesmente o resultado final. A colaboração de todos participantes será fundamental para harmonização da metodologia. A discussão dos primeiros resultados será apresentada no Congresso ABTO/ABH, em outubro de O laboratório participante deverá realizar o teste com soro puro, diluído 1:2 e diluído 1:4. As diluições devem ser feitas com PBS. Na avaliação do desempenho será considerado o resultado do teste com soro puro. Os valores de Median Channel Fluorescence (MCF) dos soros controle positivo, negativo e teste, o Cut Off utilizado e o resultado do teste devem ser inseridos nos respectivos campos. MCF 1 e MCF 2 referem-se aos valores obtidos em duplicata, cada teste deve ser anotado separadamente. Caso não tenha realizado o teste em duplicata use apenas os campos de MCF 1. Os laboratórios participantes receberão por uma planilha aonde deverão ser preenchidas informações gerais sobre o recebimento e processamento das amostras Viabilidade celular Para cada célula indique a viabilidade: Boa para amostras que obtiveram resultados satisfatórios sem o processamento da mesma ou problemas no teste. Aceitável para amostras que apresentaram dificuldades no processamento ou nos testes, mas a partir das quais resultados confiáveis foram obtidos. Inaceitável é reservada para as amostras cujos resultados não foram confiáveis por problemas da mesma. Neste caso o resultado dever ser NT (não testado). Página 9 de 10
10 4.3. Definições do Consenso para Modalidade Prova Cruzada a) Modalidade Prova Cruzada CDC A análise dos resultados de Prova Cruzada CDC só poderá ser realizada quando os seguintes critérios forem atingidos: - Mínimo de 10 participantes; - Concordância do resultado de 80 % entre os laboratórios participantes. b) Modalidade Prova Cruzada Citometria de Fluxo O desempenho será avaliado em comparação com o resultado do Laboratório de Referência Internacional, HLA Typing Laboratory, Queen Elizabeth II Health Sciences Centre, Halifax, Nova Scotia, Canada Critérios de Avaliação Modalidade Prova Cruzada Critério de avaliação para cada amostra de soro requer concordância com o consenso dos laboratórios, sendo avaliado em CONCORDANTE, DISCREPANTE ou SEM CONSENSO Analise de Desempenho Modalidade Prova Cruzada Desempenho Excelente: acerto de 100%. Desempenho Bom: acerto de 80 a 99%. Desempenho Insatisfatório: acerto menor que 80%. Comissão de Controle de Qualidade Página 10 de 10
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