Reações enzimáticas. Enzimologia Clínica. Cinética enzimática Saturação dos sítios-ativos. Importância do estudo: 17/03/2018

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1 Reações enzimáticas Enzimologia Clínica Dra. Fernanda M. Tomé E + S <==> [ES] ==> E + P Importância do estudo: Cinética enzimática Saturação dos sítios-ativos Diagnóstico Prognóstico Instituir terapêutica Algumas enzimas como agentes terapêuticos Enzimas são moléculas abundantes e diversificadas Fatores que influenciam a atividade enzimática: Condições: ph Temperatura Tempo de reação: Cada enzima tem um tempo de reação Concentração dos reagentes: Enzima Substrato Cofatores 1

2 Tipos de enzimas Plasma específicas: Ex.: Coagulação Não plasma específicas: intracelulares sem função no plasma. Classificação das enzimas no sangue: Enzimas celulares: Lactato desidrogenase (LDH) Aminotransferases (AST, ALT) Fosfatase Alcalina (FA) *Podem ser encontradas no sangue em baixas concentrações em função da renovação celular. Classificação das enzimas no sangue: Específicas do plasma: Proteases séricas Enzimas fibrinolíticas Quando enzimas intracelulares aumentam no plasma: Necrose celular Aumento da permeabilidade celular Aumento da produção enzimática na célula Aumento do tecido produtor da enzima Classificação das enzimas no sangue: Enzimas secretadas: Lipases Amilases Proteases Colinesterases Fosfatases Entrada no sangue Atividade no soro Eliminação Taxa enzimática no sangue: Dano tecidual Taxa de síntese Aumento da massa tecidual Tempo de meia vida Inativação Clearence 2

3 Taxa enzimática no sangue: Isoenzimas hibridas Ex.: LDH Taxa de entrada no sangue Taxa de inativação ou clearance Enzimas de importância diagnóstica: Distribuição das isoenzimas híbridas: Órgão Figado Coração Pâncreas Próstata Rim Enzimas Alanina aminotransferase (ALT), Aspartato aminitransferase (AST), Gama Glutamil transferase (γ-gt) Alanina aminotransferase (ALT), Creatinino quinase (CK), Lactato desidrogenase (LDH) Amilase, lipase, tripsina Fosfatase ácida Gama Glutamil transferase (γ-gt) e Fosfatase ácida Isoforma LDH 1 (HHHH) LDH 2 (HHHM) LDH 3 (HHMM) LDH 4 (HMMM) LDH 5(MMMM) Tecido Coração e eritrócito Coração e eritrócito Rim, plaquetas e pulmão Músculo esquelético e fígado Músculo esquelético e fígado Múculo Alanina aminotransferase (ALT), Aspartato aminitransferase (AST), Creatinino quinase (CK), Lactato desidrogenase (LDH) Isoenzimas Iso = igual Formas múltiplas que realizam mesma reação bioquímica. Isoenzimas hibridas: associação de subunidades, podem ser: Dímeros Tetrâmeros Seleção de teste enzimático: Distribuição das enzimas nos tecidos Massa do órgão acometido Localização intracelular das enzimas Taxa de depuração enzimática *O resultados devem sempre ser avaliados em conjunto. 3

4 Enzimas como reagente analítico: Fatores que podem interferir: Especificidade ao substrato Dispensa purificação da amostra Preferência por enzimas de alta especificidade Anticoagulante Hemólise Estase venosa Coagulação Lipidemia Análise de enzimas no plasma Anticoagulantes: Distribuição restrita (maior valor diagnóstico) Distribuição tecidual ampla (valor diagnóstico limitado) Anticoagulante Oxalato, citrato e EDTA Oxalato Citrato e Oxalato Heparina Enzimas inibidas Amilase Transaminases Gama GT Lactato desidrogenase Deve ser considerado: Hemólise Proporção de enzimas varia de tecido para tecido. Tempo de elevação da concentração no plasma é variável Enzimas das hemácias extravasam: Fosfatase ácida Lactato desidrogenase 4

5 Estase venosa Espectrofotometria: Garrote por muito tempo Aumenta a permeabilidade Hipóxia Eleva transaminases Eleva LDH Eleva fosfatase ácida Coagulação Desintegração das hemácias, consequentemente acúmulo dos conteúdos das hemácias. Erros de conservação das amostras: Tempo de contato com o coágulo Conservação em geladeira 4ºC Lipemia Imunoensaios ligados a enzimas: Deixam a amostra opaca, impedem a passagem da luz. 5

6 Enzimas como agentes terapêuticos: Estreptoquinase plasminogênio clivagem da fibrina 6