Disciplina Laboratório Clínico Veterinário Professor Prof. Dr. Adilson Donizeti Damasceno

Transcrição

1 Disciplina Laboratório Clínico Veterinário Professor Prof. Dr. Adilson Donizeti Damasceno

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3 ENZIMAS

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5 ÓRGÃO Fígado Ductos biliares Músculo esquelético Músculo cardíaco Tecido nervoso Rim Pulmão Ossos Hemácias ENZIMAS ALT (C,G), AST (B), LDH, FAc, FAl, SDH e GDH (B,E) FAl (C), GGT (B,E) ALT (B,E), AST, CK, LDH CK, LDH CK LDH, FAc, GGT LDH FAl AST, LDH, FAc

6 ÓRGÃO Fígado Ductos biliares Músculo esquelético Músculo cardíaco Tecido nervoso Rim Pulmão Ossos Hemácias ENZIMAS ALT (C,G), AST (B), LDH, FAc, FAl, SDH e GDH (B,E) FAl (C), GGT (B,E) ALT (B,E), AST, CK, LDH CK, LDH CK LDH, FAc, GGT LDH FAl AST, LDH, FAc

7 Importância da enzimas em Medicina Veterinária Diagnóstico Prognóstico Monitoramento

8 Conceito Proteínas aceleradoras de reações bioquímicas Alta especificidade pelo substrato Susceptíveis a variação de ph e temperatura Concentração variável nas células

9 Cinética química ENERGIA DE ATIVAÇÃO Reação não catalisada Reação catalisada ANDAMENTO DA REAÇÃO

10 Reação enzimática (catalítica) ENZIMA PRODUTO SUBSTRATO

11 Nomenclatura Nome sistemático (UIB) Nome dos produtos originados Transaminase glutâmica pirúvica (TGP) Transaminase glutâmica oxalacética (TGO) Natureza da reação catalisada Alanina aminotransferase (ALT) Aspartato aminotransferase (AST)

12 Nomenclatura ALANINA PIRUVATO + TGP ALT + CETOGLUTARATO GLUTAMATO

13 Dosagem da atividade enzimática Métodos analíticos quantitativos por fotocolorimetria COFATORES COFATORES + + SUBSTRATO PRODUTO SOLUÇÃO TAMPONADA

14 Dosagem da atividade enzimática Métodos analíticos quantitativos por fotocolorimetria ESPECTROFOTÔMETRO

15 Dosagem da atividade enzimática Métodos analíticos quantitativos por fotocolorimetria LENTE AMPLIFICADOR PRISMA DISPLAY FOTOCÉLULA FONTE DE LUZ FILTRO DE LUZ

16 Dosagem da atividade enzimática Métodos analíticos quantitativos por fotocolorimetria Kits comerciais

17 Cuidados com o espécime clínico Recomendações pré colheita do sangue Jejum de 12 horas Evitar lipemia Material adequado Sistema Vacutainer TM Seringa, agulhas e tubos

18 Cuidados com o espécime clínico Cuidados na colheita do sangue Aspiração do sangue suave e gradativa Evitar hemólise Recomendações pós colheita Separar rapidamente plasma/soro Temperatura ambiente/refrigeração/congelamento (?) Evitar congelamento/descongelamento Degradação da enzima

19 Cuidados com os espécime clínico

20 Escolha da amostra PLASMA SORO X

21 Escolha da amostra Plasma Usar preferencialmente heparinizado Amostra natural Permite rápida separação do plasma Não é agente quelante de Ca ++ e Mg ++ Ideal para dosagem de potássio Armazenar em tubos de plástico

22 Escolha da amostra Soro Separação mais demorada (~ 30 minutos) Sangue coagulado mais estável que o heparinizado Colhidos em tubos de vidro ou plásticos especiais Aderência do coágulo e não retração Maiores as chance de hemólise Principais indicações Ácidos biliares Insulina Testes sorológicos Armazenamento em tubos plásticos

23 Localização celular em hepatócitos ENZIMA FAl GGT AST 1 ALT SDH AST 2 GDH OCT LOCALIZAÇÃO Membrana plasmática Membrana plasmática Citoplasma Citoplasma Citoplasma Mitocôndria Mitocôndria Mitocôndria

24 Localização celular MEMBRANA PLASMÁTICA CONCENTRAÇÃO NO SANGUE CITOPLASMA MITOCÔNDRIA LISOSSOMOS INTENSIDADE DA LESÃO CELULAR

25 Alanina aminotransferase Aspartato aminotransferase Creatina quinase Lactato desidrogenase Fosfatase Alcalina Glutamato desidrogenase Sorbitol desidrogenase Amilase Lipase Tripsina Gama glutamil transferase

26 Alanina aminotransferase Aspartato aminotransferase Creatina quinase Lactato desidrogenase Fosfatase Alcalina Glutamato desidrogenase Sorbitol desidrogenase Amilase Lipase Tripsina Gama glutamil transferase

27 Alanina Aminotransferase (ALT) Enzima citoplasmática Pico: 3 a 4 dias; retorno: 2 semanas Ação Transaminação entre L alanina e 2 oxiglutarato Produto: piruvato e glutamato

28 Alanina Aminotransferase (ALT) Atua no fígado, rim, músculos, coração e eritrócitos Cofator: piridoxal fosfato Hepatodiagnóstica: cão, gato, coelho e rato Aumentos superiores a 3 vezes Conservação 3 dias à temperatura ambiente 2 3 semanas se refrigerada ou congelada

29 Alanina Aminotransferase (ALT) Aumento da atividade sérica por drogas Antiinflamatórios Acetominofeno, fenilbutazona, corticóides Anticonvulsivantes Fenobarbital, primidona Cetoconazol Mebendazol Tetraciclina Aflatoxinas

30 Alanina aminotransferase Aspartato aminotransferase Creatina quinase Lactato desidrogenase Fosfatase Alcalina Glutamato desidrogenase Sorbitol desidrogenase Amilase Lipase Tripsina Gama glutamil transferase

31 Aspartato aminotransferase (AST) Apresenta dois isômeros nos hepatócitos AST 1 : 60 80% mitocondriais AST 2 : 20 40% citosólicas Ação Transaminação entre L alanina e 2 oxiglutarato Produto: oxaloacetato e glutarato Presente no fígado, eritrócitos, músculo e coração

32 Aspartato aminotransferase (AST) Hepatodiagnóstica: grandes animais Avaliar lesão muscular: associar a LDH e CK Deficiência vitamina E e selênio Conservação Usar soro ou plasma Estável à temperatura ambiente

33 Alanina aminotransferase Aspartato aminotransferase Creatina quinase Lactato desidrogenase Fosfatase Alcalina Glutamato desidrogenase Sorbitol desidrogenase Amilase Lipase Tripsina Gama glutamil transferase

34 Creatina quinase (CK) Ação Fosforilação da creatina Produto: fosfocreatina Requer Mg ++ como cofator Possui quatro isoenzimas CK MM (músculo e coração) CK BB (cérebro) CK MB (coração) CK Mt (15% da AS da CK cardíaca)

35 Creatina quinase (CK) ATP + creatina creatinina 2% ao dia creatinaquinase (CK) ADP + fosfocreatina Filtração Secreção tubular

36 Creatina quinase (CK) Atividade sérica aumentada Esforço muscular excessivo Injeções intramusculares Decúbito prolongado Convulsão e tremores musculares Deficiência de vitamina E e selênio

37 Creatina quinase (CK) Conservação Instável em qualquer condição Oxidação do grupo sulfidril CK MB pouco confíavel para lesão cardíaca Meia vida curta

38 Alanina aminotransferase Aspartato aminotransferase Creatina quinase Lactato desidrogenase Fosfatase Alcalina Glutamato desidrogenase Sorbitol desidrogenase Amilase Lipase Tripsina Gama glutamil transferase

39 Lactato desidrogenase (LDH) Estrutura Tetrâmero (H + L) Cinco isoenzimas: Ação Oxidação do piruvato a L(+) lactato LDH 1 e LDH 2 : coração, rins e hemácias LDH 3 e LDH 4 : músculo e pulmão LDH 5 : fígado LDH HHHH, 1, LDH HHHL, 2, LDHHLL, 3, LDHLLL, 4 e LDH LLLL 5

40 Lactato desidrogenase (LDH) Monitoramento de enfermidade musculares Associação a CK e AST Doença do músculo branco Mioglobinúria

41 Lactato desidrogenase (LDH) Conservação LDH 4 e LDH 5 refrigerada e não congelada Dissociação dos protômeros Evitar amostras hemolisadas EDTA e oxalato inibem ação enzimática

42 Lactato desidrogenase (LDH) CQ Magnitude da lesão AST LDH Atividade sérica da CQ e LDH após lesão muscular

43 Alanina aminotransferase Aspartato aminotransferase Creatina quinase Lactato desidrogenase Fosfatase Alcalina Glutamato desidrogenase Sorbitol desidrogenase Amilase Lipase Tripsina Gama glutamil transferase

44 Fosfatase alcalina (FAl) Enzima de membrana plasmática Ação Hidrolisa ésteres de fosfato Máxima em ph 10 Possui isoenzimas Fígado, ductos biliares, ossos e intestino

45 Fosfatase alcalina (FAl) Eliminação renal Elevação indica processo hepatobiliar Hepatopatia Aumentos transitórios Colestase intra/extra hepática Aumento em até 10X Conservação Estável por até 13 meses quando congelada

46 Fosfatase alcalina (FAl) Outros fatores de aumento da AS Animais em crescimento Consolidação de fraturas ósseas Doenças ósseas Osteossarcoma Osteomalácia Hiperparatireoidismo Deficiência de vitamina D

47 Fosfatase alcalina (FAl) Outros fatores de aumento da AS Hiperadrenocorticismo Indução por drogas Corticóides, fenilbutazona Barbitúricos, fenotiazinas, halotano Tetraciclina, cefalosporina Tiabendazol

48 Alanina aminotransferase Aspartato aminotransferase Creatina quinase Lactato desidrogenase Fosfatase Alcalina Glutamato desidrogenase Sorbitol desidrogenase Amilase Lipase Tripsina Gama glutamil transferase

49 Gama glutamil transferase (GGT) Cliva grupo glutamil C terminal glicina Alta concentração nos rins e fígado Aumento no plasma após colestase Lipidose hepática Fasciolose (6 semanas após infecção) Hepatodiagnóstica em felinos Maior sensibilidade e especificidade

50 Gama glutamil transferase (GGT) AS induzida por prednisolona Transferida pelo colostro em bovinos e ovinos Estabilização após 21 dias Conservação Estável por 4 semanas à 30ºC

51 Alanina aminotransferase Aspartato aminotransferase Creatina quinase Lactato desidrogenase Fosfatase Alcalina Glutamato desidrogenase Sorbitol desidrogenase Amilase Lipase Tripsina Gama glutamil transferase

52 Glutamato desidrogenase (GLDH) Ação Conversão do glutamato em 2 oxiglutarato Especificidade Altas concentrações no fígado Caprino, ovino e bovino Aumento da AS nas colestases Pico e retorno mais rápidos que a GGT Conservação Menos lábil que a SDH

53 Alanina aminotransferase Aspartato aminotransferase Creatina quinase Lactato desidrogenase Fosfatase Alcalina Glutamato desidrogenase Sorbitol desidrogenase Amilase Lipase Tripsina Gama glutamil transferase

54 Sorbitol desidrogenase (SDH) Ação Localização: citoplasmática Oxidação do D sorbitol para D frutose Inibida por EDTA e oxalato Cofator: Zn ++ Altas concentrações no fígado Ruminantes, PR e eqüinos

55 Sorbitol desidrogenase (SDH) Características Meia vida curta (24 48 horas) Pico rápido; retorno após 3 dias Conservação Usar plasma heparinizado ou soro Instável à temperatura ambiente Estável por um semana se congelada

56 Alanina aminotransferase Aspartato aminotransferase Creatina quinase Lactato desidrogenase Fosfatase Alcalina Glutamato desidrogenase Sorbitol desidrogenase Amilase Lipase Tripsina Gama glutamil transferase

57 Amilase Distribuição Maior quantidade no pâncreas e duodeno Presente em gl. salivares, cérebro e pulmão Eliminação renal Uso no diagnóstico de pancreatite aguda Para aumentos superiores a 3x ou 4x

58 Alanina aminotransferase Aspartato aminotransferase Creatina quinase Lactato desidrogenase Fosfatase Alcalina Glutamato desidrogenase Sorbitol desidrogenase Amilase Lipase Tripsina Gama glutamil transferase

59 Lipase Presente no pâncreas, fígado e rins Aumento da AS por dexametasona Associada a amilase no diagnóstico da pancreatite

60 Alanina aminotransferase Aspartato aminotransferase Creatina quinase Lactato desidrogenase Fosfatase Alcalina Glutamato desidrogenase Sorbitol desidrogenase Amilase Lipase Tripsina Gama glutamil transferase

61 Tripsina Produzida no pâncreas (tripsinogênio) Convertida em tripsina no intestino Apresentações no plasma Tripsina Tripsinogênio Complexo anti tripsina Imunorreatividade semelhante à tripsina Pancreatite aguda

62 OBRIGADO