EFEITO DA PIPERAZINA E IVERMECTINA NO TRATAMENTO DE CAMUNDONGOS MUS MUSCULUS NATURALMENTE INFECTADOS COM ASPICULURIS TETRAPTERA E SYPHACIA OBVELATA

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1 EFEITO DA PIPERAZINA E IVERMECTINA NO TRATAMENTO DE CAMUNDONGOS MUS MUSCULUS NATURALMENTE INFECTADOS COM ASPICULURIS TETRAPTERA E SYPHACIA OBVELATA PIPERAZINE AND IVERMECTINE EFFECT ON THE TREATMENT OF RATS MUS MUSCULUS NATURALLY INFECTED WITH ASPICULURIS TETRAPTERA AND SYPHACIA OBVELATA Aleksandro Schafer da Silva 1, Régis Adriel Zanette 1, Silvia Gonzalez Monteiro 2, Douglas Luis Mattia 3, Silvandro Antonio Noal 4. RESUMO Animais de laboratório são de grande importância à experimentação biológica e biomédica. A incidência de parasitos em colônias convencionais destes animais é freqüente, o que pode acarretar problemas na criação e experimentação alterando resultados esperados ao interferir no desenvolvimento e comportamento dos hospedeiros. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia da piperazina e ivermectina no combate a infecções por Aspiculuris tetraptera e Syphacia obvelata em camundongos. O estudo foi realizado utilizando se 50 famílias de camundongos Mus musculus em reprodução, isto é machos, fêmeas e filhotes não desmamados e 10 famílias não tratadas do grupo controle. Os animais foram tratados com piperazina (2,1 mg/ml) nas primeiras duas semanas e com ivermectina (0,007 mg/ml) na terceira semana, ambos medicamentos diluídos em 250 ml de água fornecidos aos animais por cinco dias, com intervalo de dois dias entre as semanas. O tratamento administrado durante três semanas teve eficácia de 100% na eliminação dos parasitos. Palavras - Chave: tratamento, camundongo, biotério, Syphacia, Aspiculuris. ABSTRACT Laboratory animals are of great relevance for the biomedical and biologic experimentation. The incidence of parasites in conventional colonies of these animals is 1 Bolsista de Iniciação Cientifica, Medicina Veterinária UFSM. 2 Prof. Adj. Dpto Microbiologia e Parasitologia, UFSM. sgmonteiro@uol.com.br. 3 Acadêmico, Técnico em Agropecuária, Colégio Agrícola de Santa Maria. 4 Médico Veterinário.

2 149 Efeito da piperazina... common and it may bring about problems in the creation and experimentation by changing expected results when interfering on the development and behavior of the hosts. The objective of the present work was to evaluate the effectiveness of the piperazine and invermectine against the infections for Aspiculuris tetraptera e Syphacia obvelata in rats. The study was accomplished by using 50 families of rats Mus musculus in reproduction or, in other words, males, females and non weaned nestlings besides 10 non treated families of the control group. The animals have been treated with piperazine (2.1mg/ml) in the first two weeks and with invermectine (0,007mg/ml) in the third week, being both medicines diluted in 250 ml of water and offered to the animals during 5 days with an interval of two days between the weeks. The treatment managed during three weeks has presented an effectiveness of 100% in the parasites extermination. Key words: Treatment, rat, biotery, Syphacia, Aspiculuris. INTRODUÇÃO O monitoramento das condições sanitárias de animais de laboratório deve ser efetivo para que testes biológicos não sofram interferências, embora as espécies de endoparasitos encontradas sejam consideradas pouco patogênicas, acarretando infecção assintomática com retardo no desenvolvimento do hospedeiro (LUCA et al., 1996). Parasitando o ceco principalmente, mas também o colón de camundongos há o nematóide oxiurídeo Syphacia obvelata, seus ovos são facilmente identificados em exames de flutuação fecal, pois são alongados e encurvados em forma de D, com uma massa embrionária homogênea ocupando todo o espaço interno. Outro oxiurídeo alojado no intestino grosso de camundongos é o Aspiculuris tetraptera, seus ovos são elipsóides e contêm uma massa de blastômeros visíveis, mas incontáveis no centro do ovo (SCOTT & GIBBS, 1986; ANIMAL CARE & USE, 2005). Segundo GONSALVES et al. (1998) a competição por nutrientes é que estabelece o local de ocorrência preferencial para os parasitos. De acordo com FLYNN (1973) e JACOBY & FOX (1984), a infecções com S. obvelata geralmente acontecem em animais jovens, já que os animais adultos parecem ser mais resistentes aos parasitos. Já as infecções por A. tetraptera afetam roedores mais velhos, pois estes perdem à resistência adquirida da mãe após as primeiras semanas do nascimento (PANTER, 1969; TAFFS, 1976). Ivermectina é uma lactona macrocíclica usada em ruminantes, eqüínos, suínos e em caninos, para o controle de

3 Silva, A.S. da et al. 150 endo e ectoparasitas, apresenta ação inibidora do GABA, promovendo hiperpolarização do neurônio e conseqüentemente inibe a transmissão nervosa (LYNN, 1999; Sartor & Bicudo, 1999 apud SPINOSA et al., 1999). Segundo ANDRADE (2002), estudos recentes sugerem que o fármaco interfere principalmente na inibição da absorção de nutrientes em nematóides. Já a piperazina interfere na atividade neuromuscular do parasito, promovendo a abertura dos canais de cloro ligados ao receptor GABA localizado nas células musculares, resultando numa paralisia flácida do helminto (SPINOSA et al., 1999). O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia da piperazina e ivermectina no combate a infecções naturais por Aspiculuris tetraptera e Syphacia obvelata em camundongos de biotério. MATERIAL E METODOS O trabalho foi realizado em salas de experimentação de biotério, onde foram avaliadas 50 famílias de camundongos Mus musculus em reprodução (machos, fêmeas e filhotes não desmamados) de duas linhagens, uma isogênica, isto é, animais com características uniformes e variabilidade genética eliminada (grupo A) e outra heterogênica, onde os animais diferem geneticamente entre si (grupo B), além de 10 famílias heterogênicas do grupo controle (não tratados), alojados em salas separadas (grupo C). Os animais estavam abrigados em gaiolas contendo um macho, duas fêmeas e mais filhotes em número variado, sendo mantidos em sala com temperatura controlada de 20ºC. Os animais apresentavam sinais clínicos de parasitose e os filhotes desmamados estavam morrendo, apesar de serem alimentados com ração à vontade e tratados há 15 dias com albendazole diluído em água na dose 3,75 mg/kg. Para avaliar a eficiência dos medicamentos testados foi realizada uma coleta de fezes no dia que iniciou o experimento (dia 0) e três coletas de fezes com intervalo de sete dias durante os tratamentos. A última coleta de fezes foi realizada 30 dias após os tratamentos. Foram utilizadas 25 famílias de cada linhagem e mais 10 famílias do grupo controle. Foram coletadas fezes frescas de cada gaiola semanalmente, as mesmas foram processadas pelo método de centrífugo-flutuação (HOFFMAN, 1987). A leitura das amostras e identificação dos ovos foi realizada em microscópio óptico seguindo a classificação de HOFFMAN (1987).

4 151 Efeito da piperazina... O grau parasitário foi classificado de acordo com o número de ovos encontrados por lâmina (PINTO et al., 1994), sendo infecção leve (1 50 ovos/lâmina), moderada ( ovos/lâmina) e elevada (mais de 101 ovos/lâmina). Os tratamentos antiparasitários foram feitos por três semanas, sendo a piperazina administrada nas duas primeiras semanas de tratamento na concentração de 2,1 mg/ml. Na terceira semana administrou-se ivermectina na concentração de 0,007 mg/ml. Cada medicamento foi diluído em 250 ml de água e oferecido diariamente aos animais por cinco dias. No sexto e sétimo dia de cada semana os camundongos ingeriram somente água. Os dados foram submetidos à análise de variância utilizando o GLM do pacote estatístico SAS (SAS, 1998) considerando como fator os diferentes grupos e como bloco os diferentes dias de contagem de ovos. As médias da variável dependente foram comparadas, nos diferentes grupos, por meio de contrastes, adotando-se como nível de significância 5%. como Aspiculuris tetraptera e Syphacia obvelata, sendo que todos os animais dos grupos A, B e controle apresentavam infecção leve. Depois da primeira semana de tratamento observou-se redução no número de ovos de A. tetraptera e S. obvelata no grupo A e B. Na segunda semana de tratamento verificou-se que não houve diferença significativa nos dois grupos tratados, sendo verificado ainda infecção baixa por A. tetraptera e S. obvelata. Após a terceira semana de tratamento na qual se utilizou a ivermectina encontrou-se raros ovos de A. tetraptera e S. obvelata nos grupos A e B (TABELA 1). RESULTADOS Os parasitos encontrados na primeira coleta de fezes foram identificados

5 Silva, A.S. da et al. 152 Tabela 1: Eficácia do tratamento a base de piperazina e ivermectina em camundongos infectados naturalmente por Aspiculuris tetraptera e Syphacia obvelata Parasitas Grupos Número de ovos de parasita por lâmina no decorrer do tratamento. Dia 0 Dia 7 Dia 14 Dia 21 Dia 51 A 26,84 a 15,72 a 7,6 a 0,64 a 0 a Aspiculuris B 29,64 a 15,28 a 7,68 a 0,68 a 0 a C 26 a 25,9 b 26,5 b 26,3 b 27,1 b A 27,08 a 18,68 a 11,8 a 6,28 a 0 a Syphacia B 27,28 a 18,08 a 12,2 a 6,12 a 0 a C 24 a 24,8 b 24,3 b 25,1 b 25,8 b Obs; Médias seguidas por letras iguais na mesma coluna para cada parasita avaliado não diferem estatisticamente diferentes entre si, à nível de significância de 5%. Legenda: A: Camundongos Isogênicos tratados; B: Camundongos Heterogênicos tratados; C: Controle (não tratados) As amostras de fezes analisadas 30 dias após o final do tratamento apresentaram resultado negativo para parasitas, sendo eficaz em 100% para controle de A. tetraptera e S. obvelata. Após 51 dias o início do experimento, observou-se grande queda na mortalidade dos filhotes e as famílias de camundongos tratadas apresentavam aparência saudável com pêlo brilhante. O grupo controle manteve a infecção leve pelos dois parasitos em questão, sendo que no decorrer do trabalho observou-se mortalidade de filhotes (TABELA 1). Para cada gênero de nematóide avaliado nos grupos testados, observou-se uma redução significativa no número de ovos de parasitas dos grupos tratados (A e B) em relação a grupo controle (C) a partir da primeira semana de tratamento, a qual se manteve até o final do experimento (TABELA 1). DISCUSSÃO GILIOLI et al. (2000) aplicaram um questionário sobre as condições de saúde de animais criados em biotério que foi respondido por estas instituições com o intuito de obter informações sobre a existência de barreiras contra infecções e programa de fiscalização sanitária de suas colônias, o qual mostrou que a maioria dos biotérios analisados não possui um sistema de barreira sanitária eficiente capaz de manter animais sob condições saudáveis, sendo detectados nos animais os gêneros Syphacia obvelata e Aspiculuris tetraptera em 86,6% e 60% dos animais, respectivamente. Os animais avaliados no presente estudo, apresentavam infecção

6 153 Efeito da piperazina... leve pelos dois parasitos citados anteriormente, possivelmente devido ao tratamento com albendazole não ser eficaz. HUERKAMP et al. (2000) relataram que o fenbendazole apresentou eficiente no combate a Syphacia muris em um período de tratamento de nove semanas. Uma combinação oral de piperazina e ivermectina associado a uma higiene do ambiente foi usada por ZENNER (1998) em um período de seis semanas para tratar três colônias de ratos infectadas com Syphacia obvelata, Syphacia muris e Aspiculuris tetraptera. As colônias foram tratadas com piperazina na mesma dose deste estudo durante duas semanas, com ivermectina na mesma concentração deste trabalho durante a terceira e quarta semana e retornou com o tratamento com piperazina nas duas semanas seguintes. O autor obteve eficácia de 100% na erradicação dos parasitos, mesma eficiência antiparasitária observada no presente estudo realizado durante três semanas. SUETA et al. (2002) em seu experimento combateram A. tetraptera e S. obvelata a partir da aspersão de solução de ivermectina a 0,1% diluída em água sobre as gaiolas com ratos uma vez por semana durante três semanas sucessivas, sendo o tratamento repetido depois de duas semanas de intervalo. O mesmo trabalho teve erradicação completa dos parasitos durante pelo menos um ano, obtendo melhora no desenvolvimento reprodutivo dos animais. Apesar da forma de administração do fármaco ser diferente da utilizada neste estudo, observamos que a eficiência no tratamento foi à mesma. A droga em questão tem ação ovicída, tendo como objetivo o trabalho de SUETA et al. (2002) combater ovos e larvas dos parasitos no ambiente. GARGILI et al. (1998) testaram a eficácia de Moxidectin a 0,2 mg/kg em ratos no combate à parasitas dos gêneros A. tetraptera e S. muris, o tratamento foi realizado via subcutânea e após sete semanas observou-se que o produto e a dose administrada aos animais foi 100% eficaz na eliminação do A. tetraptera, mas ineficaz contra a S. muris. A ivermectina testada no presente trabalho manteve a redução da infecção por A. tetraptera e S. obvelata que já estava ocorrendo no tratamento com a piperazina. A combinação de medicamentos foi eficaz no combate aos helmintos e no controle da infecção, pois 30 dias após última dose dos fármacos os camundongos mantiveram-se livres de infecção. A erradicação de 100% de S. obvelata em hamster foi descrita por UNAY & DAVIS (1980) na dose de 10 mg de citrato de piperazina diluído em água e oferecido em duas fases de tratamento

7 Silva, A.S. da et al. 154 durante sete dias e com intervalo de cinco dias, já neste estudo uma dose reduzida apresenta a eficácia do tratamento. CONCLUSÃO O tratamento via oral à base de piperazina e ivermectina nas concentrações utilizadas eliminou em 100% dos parasitos Aspiculuris tetraptera e Syphacia Obvelata em camundongos, após três semanas. REFÊRÊNCIAS ANIMAL CARE; USE. Pinworms of the Rat and Mouse, Disponível em: Acesso em: 20 maio FLYNN, R.J. Parasites of Laboratory Animals. The Iowa State University Press, Ames, p. GARGILI, A.; TUZER, E.; GULANBER, A.; EFIL, I.; KELES, V.; ULUTAS, M.; TOPARLAK, M. Efficacy of Moxidectin Against Aspiculuris tetraptera and Syphacia muris in Naturally Infected Rats. Journal of Veterinary and Animal Science, v. 22, p , GILIOLI, R.; ANDRADE, L.A.G.; PASSOS, L.A.C.; SILVA, F.A.; RODRIGUES, D.M.; GUARALDO, A.M.A. Parasite survey in mouse and rat colonies of Brazilian laboratory animal houses kept under differents sanitary barrier conditions. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v. 52, n. 1, p , GONSALVES, L.; PINTO, R.M.; VICENTE, J.J.; NORONHA, D.; GOMES, D.C. Helminth parasites of conventionally maintained laboratory mice - II. Inbred strains with an adaptation of the anal swab technique. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, v. 93, p , HOFFMAN, R.P. Diagnóstico de Parasitismo Veterinário. Porto Alegre: Sulina, p. HUERKAMP, M.J.; BENJAMIN, K.A.; ZITZOW, L.A.; PULTIUM, J.K.; LOID, J.A. THOMPSON, W.D.; WEBB, S.K.; LEHNER, N.D. Fenbendazole treatment without environmental decontamination eradicates Syphacia muris from all rats in a large, complex research institution. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science, v. 39, n. 3, p. 9-12, JACOBY, R.O.; FOX, J.G. Biology and diseases of mice. In JG Fox, BJ Cohen, FM Loew (eds), Laboratory Animal Medicine, Academic Press Inc., London, 1984 p

8 155 Efeito da piperazina... LUCA, R.R.; ALEXANDRE, S.R.; MARQUES, T.; SOUZA, N.L.; MOUSSE, J.L.B.; NEVES, P. Manual para Técnicos em Bioterismo. 2ed. São Paulo: Winner Graph, p. LYNN, R.C. Antiparasitic drugs. In: BOWMAN, D.D. Parasitology for veterinarians. 7. ed. Philadelphia: W. B. Saunders, p SPINOSA, H.S.; GORNIAK, S.L.; BERNARDI, M.M. Farmacologia aplicada à veterinária. 2.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan p. SUETA, T.; MIYOSHI, I.; OKAMURA, T.; KASAI, N. Experimental eradication of pinworms (Syphacia obvelata and Aspiculuris tetraptera) from mice colonies using ivermectin. Experimental Animal, v. 51, n. 4, p , PANTER, H.C. Studies on host-parasite relationships: Syphacia obvelata in the mouse. Journal Parasitology, v. 55, p , PINTO, R.M. et al. Helminth parasites of conventionally maintained laboratory mice. Memórias do Intituto Oswaldo Cruz, v.89, n.1, p.33-40, TAFFS, L.F. Pinworm infections in laboratory rodents: a review. Laboratory Animal Science, v. 10, p. 1-13, UNAY, E.S.; DAVIS, B.J. Treatment of Syphacia obvelata in the Syrian hamster (Mesocricetus auratus) with piperazine citrate. American Journal Veterinary Research, v. 41, n.11, p , SAS. User s guide: statistics version 5. Cary: SAS Institute, CD-ROM. 10 arquivos, bytes. SCOTT, M.E.; GIBBS, H.C. Long-term population dynamics of pinworms (Syphacia obvelata and Aspiculuris tetraptera) in mice. Journal Parasitology, v. 72, p , ZENNER, L. Effective eradication of pinworms (Syphacia muris, Syphacia obvelata and Aspiculuris tetraptera) from a rodent breeding colony by oral anthelmintic therapy. Laboratory Animal, v. 32, n.3, p , 1998.