Tratamentos químicos na sanitização de morango (Fragaria vesca L) Chemical treatments in the sanitation of strawberries (Fragaria vesca L)

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1 Braz. J. Food Technol., Campinas, v. 13, n. 1, p , jan./mar DOI: /BJFT Chemical treatments in the sanitation of strawberries (Fragaria vesca L) Autores Authors Maristela da Silva do NASCIMENTO Instituto de Tecnologia de Alimentos Centro de Ciência e Qualidade de Alimentos Laboratório de Microbiologia Av. Brasil, 2880, Jd. Chapadão CEP: Campinas/SP - Brasil mnascimento@ital.gov.sp.br Neusely da SILVA Instituto de Tecnologia de Alimentos Centro de Ciência e Qualidade de Alimentos Laboratório de Microbiologia Autor Correspondente Corresponding Author Recebido Received: 02/02/2009 Aprovado Approved: 08/03/2010 Resumo A sanitização de frutas visa a redução da carga microbiana inicial e a eliminação de patógenos. Os compostos à base de cloro são os mais empregados para esse fim no âmbito industrial e doméstico, porém, em função das controvérsias sobre sua toxicidade, outros sanitizantes têm despertado cada vez mais o interesse do setor de alimentos. O objetivo deste estudo foi comparar a eficiência de diferentes sanitizantes com o hipoclorito de sódio sobre a microbiota de morangos frescos. As amostras foram imersas por 15 min em soluções sanitizantes (ácido acético 2 e 4%, ácido peracético 80 mg.l 1, dicloroisocianurato de sódio 200 mg.l 1, hipoclorito de sódio 200 mg.l 1 e vinagre 6, 25 e 50%). A contaminação inicial nas amostras de morango in natura foi de 5,95 log UFC.g 1 para aeróbios mesófilos, 5,55 log UFC.g 1 para bolores e leveduras e <1,35 log UFC.g 1 para coliformes totais. Não foi detectada a presença de Salmonella spp. e a contagem de Escherichia coli permaneceu abaixo do limite de detecção (1 log UFC.g 1 ) em todas as amostras analisadas. Devido à baixa contaminação inicial por coliformes totais, todos os tratamentos reduziram a contagem abaixo do limite de detecção. O ácido acético 4% apresentou o melhor desempenho com reduções de 2,43 e 2,54 log UFC.g 1 para aeróbios mesófilos e bolores e leveduras, respectivamente. As menores reduções foram obtidas com vinagre 6%, 0,77 log UFC.g 1 para aeróbios mesófilos e 1,04 log UFC.g 1 para bolores e leveduras. Com base na atividade antimicrobiana, todos os sanitizantes testados apresentaram eficácia semelhante (p > 0,05) ou superior (p < 0,05) ao hipoclorito de sódio na redução da carga microbiana inicial de morangos frescos. Palavras-chave: Morango; Sanitizante; Cloro; Ácido acético; Ácido peracético. Summary The aim of fruit sanitation is to reduce the initial microbial count and eliminate the pathogens. Chlorine compounds are the most commonly used for this purpose in industrial and household environments, but due to controversy concerning their toxicity, other sanitizers have been arousing the interest of the food industry. The objective of the present study was to compare the effectiveness of various other sanitizers with that of sodium hypochlorite on the microbial flora of fresh strawberries. The strawberry samples were sanitized by immersion for 15 min in the following solutions: 2 and 4% acetic acid, 80 mg.l 1 peracetic acid, 200 mg.l 1 sodium dichloroisocyanurate, 200 mg.l 1 sodium hypochlorite and 6, 25 and 50% vinegar. The initial contamination of the fresh strawberry samples was 5.95 log CFU.g 1 for aerobic mesophilic microorganisms, 5.55 log CFU.g 1 for yeasts and moulds and <1.35 log CFU.g 1 for total coliforms. Salmonella was not detected and the E. coli counts were below the detection limit for all the samples analyzed. Due to the low initial contamination of total coliforms, all the treatments reduced the count to below the detection limit. The treatment with 4% acetic acid showed the best results with reductions of 2.43 and 2.54 log CFU.g 1 for aerobic mesophilic microorganisms and yeasts and moulds, respectively. The smallest reductions were obtained with 6% vinegar, being 0.77 log CFU.g 1 for aerobic mesophilic microorganisms and 1.04 log CFU.g 1 for yeasts and moulds. Based on their antimicrobial activity, all the sanitizers tested showed the same (p > 0.05) or greater (p < 0.05) efficiency than sodium hypochlorite in reducing the initial microbial counts in fresh strawberries. Key words: Strawberry; Sanitizer; Chorine; Acetic acid; Peracetic acid.

2 1 Introdução O morango (Fragaria vesca L.) é considerado fonte de vitaminas, minerais e antioxidantes naturais (AYALA ZAVALA et al., 2004). A produção brasileira anual está em torno de 38 mil toneladas (IEA, 2007) e os principais estados produtores são Minas Gerais, Rio Grande do Sul e São Paulo. Entretanto, sua vida de prateleira é limitada, entre 5 e 7 dias, devido especialmente à alta atividade microbiana e respiratória (AGUAYO et al., 2006). Sob o aspecto de saúde pública, o morango já foi identificado como fonte de surtos de hepatite A, Norovírus, Cyclospora cayatanensis e Staphylococcus aureus (NOTERMANS et al., 2004; SIVAPALASINGAM et al., 2004). A lavagem em água corrente de boa qualidade pode reduzir em até 90% a carga microbiana dos vegetais (BEUCHAT et al., 2006). Porém, não é suficiente para manter a contaminação em níveis seguros, sendo essencial a aplicação de uma etapa de sanitização com agentes antimicrobianos reconhecidos como GRAS (Generally Recognized as Safe) (FDA, 1995). O cloro, principalmente o hipoclorito de sódio, é o composto mais utilizado na sanitização de frutas, porém apresenta o risco de formação de compostos indesejáveis, como os trihalometanos, originados pela reação com matéria orgânica e considerados potenciais carcinógenos. Em alguns países da Europa como Alemanha, Holanda, Dinamarca, Suíça e Bélgica, o uso de cloro em alimentos frescos foi proibido. Em função disto, várias alternativas para sanitização de hortifrutícolas estão surgindo no mercado, como ácido acético, ácido peracético, ozônio, radiação, superóxido, óxido nitroso, luz ultravioleta (ARTÉS et al., 2009). Contudo, as soluções aquosas ainda são alternativas economicamente viáveis que garantem bom desempenho. Muitos dos estudos disponíveis sobre a sanitização de morango foram realizados com produto artificialmente contaminado (MAHMOUD et al., 2007; YUK et al., 2006; YU et al., 2001), utilizando-se diferentes microrganismos e condições de aplicação nem sempre comparáveis. Em função disso, verificou-se a necessidade de estudos mais aprofundados da eficiência de sanitizantes nas condições reais de uso, trabalhando-se com produtos disponíveis no mercado nacional com frutas que tivessem sua microbiota natural inalterada. Portanto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência de diferentes desinfetantes na sanitização de morango comercializado no mercado varejista de Campinas, São Paulo. 2 Material e métodos 2.1 Material Foram utilizados para os testes 10 lotes de morango (Fragaria vesca L.) in natura, adquiridos no mercado varejista de Campinas, São Paulo. Cada lote era constituído por 3 kg de morango. As coletas foram realizadas quinzenalmente no período de junho a setembro de 2001 e Sanitização das amostras De cada lote, foram separadas três porções aleatórias de 100 g para determinação da contaminação microbiana inicial. Em seguida, o restante do lote foi lavado em água corrente para remoção do excesso de matéria orgânica e então, dividido em 27 porções de 100 g. Destas 27 foram novamente separadas três porções aleatórias para determinação da ação da lavagem em água corrente sobre a microbiota presente na amostra. As demais 24 porções, submetidas aos tratamentos de sanitização em triplicata para cada tratamento, foram mergulhadas separadamente nas seguintes soluções sanitizantes: vinagre de vinho tinto 50, 25 e 6% (v/v); ácido acético 4 e 2% (v/v); ácido peracético 80 mg.l 1 ; hipoclorito de sódio 200 mg.l 1 ; dicloroisocianurato de sódio 200 mg.l 1. Os teores de ácido acético, cloro ativo e ácido peracético foram determinados nas soluções antes do início de cada experimento, utilizando metodologia recomendada por Baccan et al. (1979), Greenberg et al. (1985) e Almed (1998), respectivamente. Nenhum neutralizante foi adicionado às soluções testes, seguindo metodologia descrita por Beuchat et al. (1998). Após 15 min de imersão nas soluções sanitizantes, as amostras foram transferidas assepticamente para recipientes estéreis, onde permaneceram por 5 min para drenagem do excesso de líquido. Foram realizadas 10 repetições do experimento. 2.3 Análises microbiológicas Vinte e cinco gramas (25 g) de morango, antes e após os tratamentos, foram transferidos para bolsas esterilizadas e homogeneizados em 225 ml de solução aquosa de peptona 0,1% (Merck), durante 2 min em stomacher Lab-Blender 400 (Seward Medical). Em seguida, foram realizadas diluições decimais seriadas em solução aquosa peptonada 0,1% (Merck). Para a contagem de aeróbios mesófilos totais, foi utilizado semeadura em profundidade em Ágar Padrão para Contagem (PCA, Difco), com incubação a 35 C por 48 h (MORTON, 2001). Para a contagem de bolores e leveduras foi utilizado semeadura em superfície em Ágar Dicloran Rosa de Bengala Cloranfenicol (DRBC, Difco), com incubação a 25 C por 5 dias (BEUCHAT e Braz. J. Food Technol., Campinas, v. 13, n. 1, p , jan./mar

3 COUSIN, 2001). Para contagem de coliformes totais e E. coli, foi utilizado Petrifilm 6404 (3M Company) com incubação a 35 C por 48 h (HORWITZ e LATIMER, 2005). Para pesquisa de Salmonella spp., foi realizado pré-enriquecimento de 25 g de amostra em 225 ml de água peptonada tamponada (BPW, Merck), com incubação a 35 C por 18 h, seguido por enriquecimento em caldos Rappaport Vassiliadis (RV, Difco) e Tetrationato (TT, Difco), incubados a 35 C por 24 h e semeadura por estrias de esgotamento em ágar Sulfito de Bismuto (BS, Difco), ágar Entérico de Hecktoen (HE, Difco) e ágar Xilose Lisina Desoxicolato (XLD, Difco), com incubação a 35 C por 24 h. As colônias suspeitas foram submetidas a provas bioquímicas e testes sorológicos para confirmação de Salmonella spp. (ANDREWS et al., 2001). 2.4 Interpretação dos resultados e análise estatística Para a contagem total de aeróbios mesófilos, bolores e leveduras, coliformes totais e Escherichia coli, foi determinado o logaritmo da contagem microbiana após a lavagem em água corrente (média de três repetições), o logaritmo da contagem após a sanitização (média da triplicata) e a diferença entre esses valores (número de reduções decimais). No caso de Salmonella spp., foi comparada a capacidade dos tratamentos em eliminar a população, quando inicialmente presente na amostra. A análise de variância paramétrica (ANOVA) e a comparação de média pelo teste de Tuckey ao nível de significância de 95% foram realizadas com o auxílio do programa SAS System (SAS Institute, Cary, NC). 3 Resultados e discussão 3.1 Contaminação inicial das amostras analisadas A contaminação microbiana inicial das amostras de morango analisadas foi de 5,95 (±0,69) log UFC.g 1 para microrganismos aeróbios mesófilos e de 5,55 (±0,33) log UFC.g 1 para bolores e leveduras, condizendo com os achados de Brackett (1994) que relatou contaminação microbiana em vegetais de até 6,0 log UFC.g 1. Porém superior à contaminação de aeróbios mesófilos (entre 3 e 4 log UFC.g 1 ), obtida por Nakamura et al. (2007), e de bolores e leveduras (4,38 log UFC.g 1 ), observada por Moraes (2005) em morangos frescos fatiados produzidos no Brasil. Quanto aos coliformes totais, das 10 amostras analisadas, 7 apresentaram contaminação por esse grupo, com contagens entre 1,00 e 2,04 log UFC.g 1, semelhante à contaminação encontrada por Moraes (2005). Notermans et al. (2004) obtiveram contaminação abaixo de 3 log UFC.g 1. Não foi detectada a presença de Salmonella em nenhuma das amostras analisadas e a contagem de E. coli ficou abaixo do limite de detecção (<1,0 log UFC.g 1 ), estando de acordo com os padrões estabelecidos pela legislação vigente (ANVISA, 2001) e condizendo com os resultados observados por Calvo et al. (2004) e Mukherjee et al. (2004). A baixa contagem de coliformes totais (média de <1,35 log UFC.g 1 ) e a ausência de E. coli e Salmonella nas amostras de morango podem ser atribuídas ao emprego de boas práticas agrícolas, em especial ao uso de água de boa qualidade microbiológica. Além disso, a presença de ácidos orgânicos na composição do morango, principalmente ácido cítrico, confere a este um ph ao redor de 3-3,5, condição esta inóspita ao desenvolvimento da maioria dos microrganismos, incluindo os do grupo coliforme (ICMSF, 2000; JAY, 2005; MATTIUZ et al., 2004). Gunes et al. (1997) e Calvo et al. (2004) já haviam mencionado que o tipo de microbiota de frutas depende do ph de cada uma, sendo estas mais susceptíveis a bactérias resistentes à acidez e a fungos. 3.2 Efeito dos tratamentos de sanitização Devido à interferência da matéria orgânica sobre a ação antimicrobiana dos sanitizantes, optou-se por avaliar a atuação destes sobre a microbiota de morango após a lavagem em água corrente para remoção de seu excesso. Esta lavagem promoveu redução da contaminação microbiana inicial de aeróbios mesófilos e bolores e leveduras próxima a um ciclo logaritmico, confirmando os relatos de Beuchat et al. (2006), Johnston et al. (2006) e Nascimento et al. (2003). Com relação aos coliformes totais, após a lavagem em água corrente, apenas 4 amostras apresentaram contaminação, ao redor de 1,1 log UFC.g 1. Por se tratar de uma baixa contagem, todos os sanitizantes testados foram capazes de reduzir a população abaixo do limite de detecção (1,0 log UFC.g 1 ) (dados não mostrados). Reis et al. (2008) também não detectaram presença de coliformes totais e termotolerantes em morango minimamente processado, após o emprego de solução sanitizante e mesmo após a imersão em água. Neste estudo, todos os tratamentos avaliados apresentaram desempenho estatisticamente semelhante (p > 0,05) ou superior (p < 0,05) ao do hipoclorito de sódio, conforme Tabela 1. Em uma conferência da Organização Mundial de Saúde, Beuchat (1999) enfatizou o potencial dos ácidos orgânicos na redução da contaminação microbiana em vegetais. Neste estudo, as maiores reduções foram obtidas utilizando o ácido acético 4% que, proporcionou reduções de 1,18 e 1,34 log UFC.g 1 para aeróbios mesófilos bolores e leveduras, superiores (p < 0,05) às obtidas com o uso do hipoclorito de sódio 200 mg.l 1. O desempenho das soluções de vinagre esteve diretamente relacionado à concentração do ácido acético Braz. J. Food Technol., Campinas, v. 13, n. 1, p , jan./mar

4 Tabela 1. Efeito da ação dos sanitizantes, após lavagem em água corrente, sobre a microbiota presente em amostras de morango. Tratamento Aeróbios mesófilos (log UFC.g 1) Bolores e leveduras (log UFC.g 1) Contagem após tratamento Redução decimal Contagem após tratamento Redução decimal Água (controle) 4,94* (±0,60 ** ) a*** - 4,61 (±027) a - Vinagre 6% 4,17 ( ±0,81) ab 0,77 3,57 (±0,55) b 1,04 Hipoclorito de sódio 200 mg.l 1 3,69 (±0,39) bc 1,25 3,41 (±0,26) b 1,20 Vinagre 25% 3,64 (±0,67) bc 1,30 2,60 (±0,29) c 2,01 Ácido peracético 80 mg.l 1 3,59 (±0,76) bc 1,35 3,27 (±0,45) b 1,34 Dicloroisocianurato de sódio 200 mg.l 1 3,39 (±0,54) bcd 1,55 3,23 (±0,41) b 1,38 Vinagre 50% 3,09 (±0,69) cd 1,85 2,24 (±0,33) cd 2,37 Ácido acético 2% 3,04 (±0,76) cd 1,90 2,27 (±0,31) cd 2,34 Ácido acético 4% 2,51 ( ±0,68) d 2,43 2,07 (±0,17) d 2,54 *Contagem microbiana média de 10 repetições avaliadas separadamente em triplicata; **desvio padrão; e ***dados seguidos por letras diferentes são significativamente diferentes entre si (p < 0,05). nas soluções. A solução de vinagre 50% apresentou reduções semelhantes às do ácido acético 2%, ao redor de 2 log UFC.g 1. Enquanto que o vinagre 6% promoveu reduções inferiores às obtidas com o hipoclorito de sódio 200 mg.l 1, mas estatisticamente não significativas, 0,77 e 1,04 log UFC.g 1 para aeróbios mesófilos e bolores e leveduras, respectivamente. Chesca (2002) reportou reduções de aeróbios mesófilos em alface maiores que 3,0 log UFC.g 1 utilizando ácido acético 2 e 4 e vinagre 50%, enquanto hipoclorito de sódio 200 mg.l 1 promoveu reduções menores que 2,6 log UFC.g 1. Já Yu et al. (2001) não observaram diferença significativa na redução de E. coli O157:H7 artificialmente inoculada em morangos, utilizando ácido acético 5,0% e hipoclorito de sódio 200 mg.l 1. Porém, Lang et al. (2000), utilizando hipoclorito de sódio em alta concentração ( mg.l 1 ), obtiveram maior eliminação de E. coli O157:H7 inoculada artificialmente em sementes de alfafa quando comparado ao ácido acético 5,0%. O ácido peracético é atualmente um dos sanitizantes de maior aplicação na indústria de alimentos, devido à alta eficácia em baixa temperatura, à ausência de toxicidade e por não provocar alterações sensoriais nos alimentos (ARTÉS et al., 2007). A Agência Nacional de Vigilância Sanitária do Ministério da Saúde (ANVISA, 2004), através da RDC n. 2 de 2004, aprovou a utilização deste composto na lavagem de ovos, carcaças, peixes e hortifrutícolas em quantidade suficiente para obter o efeito desejado, sem deixar resíduos no produto final. Na comparação de desempenho do ácido peracético 80 mg.l 1 ao do hipoclorito de sódio 200 mg.l 1, não foi observada diferença significativa (p>0,05), com reduções de aproximadamente 1,2-1,3 log UFC.g 1 para aeróbios mesófilos totais e bolores e leveduras. Wisniewsky et al. (2000) avaliaram o efeito de ácido peracético e dois compostos de cloro sobre Escherichia coli O157:H7 artificialmente inoculada em maçãs, tendo observado que o ácido peracético foi mais eficiente que o dióxido de cloro, apresentando eficiência similar à solução de cloro em tampão fosfato. Contudo, outros autores demonstraram a superioridade do ácido peracético frente ao hipoclorito de sódio, como Silveira et al. (2007) que, comparando a atuação do ácido peracético (68 mg.l 1 ) ao hipoclorito de sódio (150 mg.l 1 ) sobre a contagem de psicrotróficos e mesófilos em melão Gália fatiado, obtiveram redução de 2 e 1 log UFC.g 1 com ácido peracético. Já, comparando o desempenho de diferentes ácidos, Wright et al. (2000), obtiveram maiores reduções (3,0 log UFC.g 1 ) utilizando ácido acético 5,0% em comparação ao ácido peracético 80 mg.l 1 em maçãs contaminadas com E. coli O157:H7. O dicloroisocianurato de sódio (NaDCC) é um composto clorado orgânico comercializado na forma de pó ou comprimido efervescente. Por atender a um processo de fabricação específico para uso em alimentos, não libera metais pesados e trihalometano quando hidrolisado (REIS et al., 2008). Tanto o dicloroisocianurato de sódio 200 mg.l 1 quanto o hipoclorito de sódio 200 mg.l 1 promoveram reduções ao redor de 1,2-1,5 log UFC.g 1 para aeróbios mesófilos totais e bolores e leveduras, discordando de Porto (2001), que obteve maior eficiência com o dicloroisocianurato de sódio na eliminação de Listeria monocytogenes artificialmente inoculada em vegetais. O desempenho apresentado pelos compostos à base de cloro condizem com os relatos de outros autores (BURNETT e BEUCHAT, 2000; YUK et al., 2006) que afirmam que o cloro não reduz mais que 2 ciclos logarítmicos a população microbiana de hortifrutícolas, nas concentrações recomendadas para essa finalidade. Em geral, foram observadas neste estudo reduções microbianas ao redor de 1,5 log UFC.g 1, com exceção de alguns tratamentos à base de ácido acético (vinagre 50% e ácido acético 2 e 4%), reduções estas menores que as obtidas por Lang et al. (2000) em Braz. J. Food Technol., Campinas, v. 13, n. 1, p , jan./mar

5 semente de alfafa, Annous et al. (2001) em maçã e Nascimento et al. (2003) em alface. A menor eficiência de atuação dos sanitizantes sobre a microbiota presente no morango pode estar relacionada à característica da fruta que apresenta superfície irregular e inúmeros aquênios, os quais funcionariam como sítio de proteção para os microrganismos. Carmichael et al. (1999) e Yuk et al. (2006) relataram que as microestruturas dos tecidos vegetais, ranhuras, fendas, cavidades e outras irregularidades da superfície do vegetal podem afetar o contato da solução sanitizante com os microrganismos alvos e consequentemente, a eficiência do processo. 4 Conclusões Com base na atividade antimicrobiana, o ácido acético 4% apresentou as maiores reduções decimais, porém todos os sanitizantes testados poderiam ser utilizados como alternativa na sanitização de frutas frescas, uma vez que apresentaram desempenho similar ou superior ao hipoclorito de sódio 200 mg.l 1, preconizado como sanitizante padrão para hortifrutícolas. Para isso, no entanto, são necessários estudos que avaliem o efeito sobre a qualidade sensorial dos produtos submetidos a esses tratamentos, além de um levantamento de custos que verifique a viabilidade financeira dessas opções. Agradecimentos Ao CNPq e à FAPESP pelo apoio financeiro. Referências AGUAYO, E.; JANSASITHORN, R.; KADER, A.A. Combined effects of l-methylcyclopropene, calcium choride dip, and/ or atmospheric modification on quality changes in fresh-cut strawberries. Postharvest Biology and Technology, Pullman, v. 40, n. 3, p , ALMED INDÚSTRIA E COMÉRCIO DE DETERGENTE LTDA (São Paulo). Determinação quantitativa de peróxido de hidrogênio e ácido peracético por titulação: Manual Técnico. São Paulo, p. ANDREWS, W. H.; FLOWERS, R. S.; SILLIKER, J.; BAILEY, J. S. Salmonella. In: DOWNES, F. P.; ITO, K. (Eds.). Compendium of methods for the microbiological examination of foods. 4 th ed. Washington, D. C: American Public Health Association, P Cap. 37. ANNOUS, B. A.; SAPERS, G. M.; MATTRAZZO, A. M.; RIORDAN, D. C. R. Eficacy of washing with a commercial flatbed brush washer, using conventional and experimental washing agents, in reducing populations of E. coli on artificially inoculated apples. Journal of Food Protection, Des Moines, v. 64, n. 2, p , AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILANCIA SANITÁRIA - ANVISA. Resolução RDC nº 12, de 02 de janeiro de Aprova regulamento técnico sobre padrões microbiológicos para alimentos. Diário Oficial da União, Brasília, DF, 10 de janeiro de AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILANCIA SANITÁRIA - ANVISA. Resolução RDC nº 02, de 08 de janeiro de Aprova o uso do ácido peracético como coadjuvante de tecnologia na função de agente de controle de microrganismos na lavagem de ovos, carcaças e ou partes de animais de açougue, peixes e crustáceos e hortifrutícolas em quantidade suficiente para obter o efeito desejado, sem deixar resíduos no produto final. Diário Oficial da União, Brasília, DF, 09 de janeiro de ARTÉS, F.; GÓMEZ, P.; ARTÉS-HERNANDEZ, F.; AGUAYO, E.; ESCALONA, V. Improved strategies for keeping overall quality of fresh-cut produce. Acta Horticulturae, Leuven, v. 33, n. 746, p , ARTÉS, F.; GÓMEZ, P.; AGUAYO, E.; ESCALONA, V.; ARTÉS- HERNANDEZ, F. Sustainable sanitation techniques for keeping quality and safety of fresh-cut plant commodities. Postharvest Biology and Technology, Pullman, v. 51, n. 3, p , AYALA-ZAVALA, J. F.; WANG, S. Y.; WANG, C. Y.; GONZÁLEZ- AGUILAR, G. A. Effect of storage temperatures on antioxidant capacity and aroma compounds in strawberry fruit. Swiss Society Food Science and Technology, Zurich, v. 37, n. 6-7, p , BACCAN, N. E. S.; BARONE, J. S. Química analítica quantitativa elementar. Campinas: Ed. UNICAMP, p. BEUCHAT, L. R.; NAIL, B. V.; ADLER, B. B.; CLAVERO, M. R. S. Efficacy of spray application of chlorinated water in killing pathogenic bacteria on raw apples, tomatoes and lettuce. Journal of Food Protection, Des Moines, v. 61, n. 10, p , BEUCHAT, L. R. Surface decontamination of fruits and vegetables eaten raw: a review. In: BEUCHAT, L. R. Congressional Register Disponível em: who a.html. Acesso em: 10 mar BEUCHAT, L. R.; COUSIN, M. A. Yeasts and Molds. In: DOWNES, F. P.; ITO, K. (Eds.). Compendium of methods for the microbiological examination of foods. 4 th ed. Washington, D. C: American Public Health Association, Cap. 20, p BEUCHAT, L. R.; FARBER, J. M.; GARRET, F. H.; HARRIS, I. J.; PARISH, M. E.; SUSLOW, T. V.; BUSTA, F. K. Standardization of a method to determine the efficacy of sanitizers in inactivating human pathogenic microorganisms on raw fruit and vegetables. Journal of Food Protection, Des Moines, v.64, n.7, p , jul./2001. BRACKETT, R. E. Minimally processed refrigerated fruits and vegetables. New York: Chapman & Hall, p BURNETT, S. L.; BEUCHAT, L. R. Human pathogens assiciated with raw produce and unpasteurized juices and difficulties in Braz. J. Food Technol., Campinas, v. 13, n. 1, p , jan./mar

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