AVALIAÇÃO DE HELICOBACTER PYLORI EM UTENSÍLIOS COMPARTILHADOS

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1 AVALIAÇÃO DE HELICOBACTER PYLORI EM UTENSÍLIOS COMPARTILHADOS 1. INTRODUÇÃO A Helicobacter pylori (H. pylori) é uma bactéria gram-negativa, microaerofílica, em forma de espiral, de múltiplos flagelos, que apresenta crescimento lento, tendo como característica bioquímica fundamental a produção de grandes quantidades de uréase e catalase (Bonamigo et al., 1999). Isolada pela primeira vez em 1983 pelos australianos Barry Marshall e Robin Warren, é uma das poucas bactérias que coloniza a mucosa gástrica humana devido sua capacidade de produzir amônia o que permite que sobreviva no ambiente ácido estomacal (Demiray et al., 2006). Essa bactéria é uma das grandes responsáveis por problemas estomacais tais como a gastrite, úlcera péptica, e já é relacionada por ser um dos agentes causais de carcinomas estomacais e linfomas (Oliveira, 2013). Estudos indicam que as principais formas de contaminação ocorrem por meio de contato interpessoal, podendo ser por via fecal-oral ou oral-oral, ocorrendo principalmente em grupos socioeconômicos mais vulneráveis (Moraes e Silva, 2003). Cerca de 50% da população mundial convive com a H. pylori tendo em vista que a maior proporção está em países menos desenvolvidos (Agostinho Júnior, 2003). Uma vez contaminada a mucosa gástrica pela bactéria provavelmente ela irá acompanhar seu hospedeiro por toda a vida, ou por um longo período (Oliveira et al., 2014). Como já mencionado as úlceras gástricas podem estar diretamente ligadas ao câncer de estômago. Um estudo realizado por Thomazini et al. (2006) com quarenta e dois pacientes diagnosticados com câncer gástrico (CG), demonstrou a presença de H. pylory em 85,7% das amostras em análises histológicas, enquanto que a análise genética evidenciou a presença de genes relacionados à espécie em 95%, sendo que, em 54,7% dos pacientes também havia a presença do gene caga (associado à citotoxina gene A e relacionada ao aparecimento de tumores). No Brasil de acordo com a estimativa de incidência dos tipos de câncer que mais acometeram a população em 2016/2017, o câncer de estômago aparece nas cinco primeiras posições de incidência por cada região, sendo que na região Sul é a quarta colocada entre os homens e a quinta colocada entre as mulheres (INCA, 2015). A incidência de H. pylori é relacionada a diversos fatores, como demonstrado por Queiroz et al., (2012) que apontou uma forte influência entre as condições socioeconômicas e a taxa de infecção em crianças de uma comunidade da região nordeste brasileira, o que pode estar associado à contaminação oral-oral e oralfecal. No Rio Grande do Sul, uma das hipóteses para o alto índice pode estar relacionado a hábitos alimentares e fatores culturais, como o hábito de ingerir alimentos e bebidas quentes, dentre eles o chimarrão (Firme e Gallon, 2010; Baú e Ruth, 2011). Andreolla et al., (2016) relataram uma associação entre o consumo de chimarrão e a prevalência do patógeno, onde 45,3% dos pacientes diagnosticados eram consumidores da bebida. O chimarrão também pode contribuir com a maior incidência desta infecção no estado do Rio Grande do Sul, por ser um veículo de

2 transmissão do patógeno de forma oral-oral devido à rotatividade da bomba de chimarrão entre os consumidores, hipótese levantada neste trabalho. Portanto, objetivou-se com este estudo avaliar a influência do uso de utensílios compartilhados na transmissão de H. pylori, analisando a sua presença em bombas de chimarrão. 2. METODOLOGIA Para avaliar a presença de H. pylori em utensílios compartilhados foi realizada uma coleta em oito bombas de chimarrão de voluntários anônimos que foram devidamente informados e conscientizados sobre o intuito da pesquisa, e disponibilizaram prontamente seus objetos. O material de análise foi coletado da superfície do bocal das bombas de chimarrão com o auxílio de um swab, colocado em solução salina a 0,85% e imediatamente enviada para o laboratório de análises microbiológicas da Universidade Federal do Pampa Campus Itaqui. O procedimento de semeadura, meio de cultura utilizado e forma de incubação foi realizado conforme descrito em PENA (2010), com pequenas alterações, utilizando os meios Ágar Columbia Sangue de Cavalo 7% (ACSC) e meio de cultura para desenvolvimento da H. pylori (meio HP), este foi suplementando com quatro tipos de antibióticos. As colônias caraterísticas foram isoladas e submetidas aos testes de identificação por coloração de Gram, atividade ureática e teste de catalase. 3. RESULTADOS e DISCUSSÃO As semeaduras de todas as amostras coletadas se desenvolveram em meio ACSC. No entanto, apenas 50% cresceram no meio seletivo para HP, ambas incubadas em anaerobiose por um período de quatro dias conforme tempo de incubação descrito por Coelho (2013), este tempo de incubação vária conforme alguns estudos podendo levar uma média de três a cinco dias (Figura 1). O meio seletivo é composto por quatro de tipos de antibióticos que visam inibir o crescimento de outros micro-organismos, mas é bem tolerado por bactérias como a H. pylori, que tem como característica de ser uma bactéria que resiste a antibióticos devido ao uso exacerbado de medicamentos de forma indiscriminada (Pontes, 2014). Figura 1: a: Total de amostras que apresentaram crescimento em meio ACSC; b: Amostras que apresentaram crescimento em meio HP; c: Total de amostras isoladas em meio HP que foram submetidos aos testes bioquímicos ureáse e catalase.

3 Desta forma o crescimento neste meio, é um forte indicativo que a bactéria encontrada pertença à espécie H. pylori, visto que diversos estudos indicam que a bactéria é tolerante ao uso vancomicina, e dependendo do caso a amoxilina, por exemplo, diferente de bactérias que também podem estar no ambiente, mas que em meio de cultura não cresceriam, por serem mais sensíveis ao antibiótico, como, Staphylococcus sp e Enterococcus sp (Guia Antimicrobianos, 2012). No entanto, são necessários testes bioquímicos adicionais, que geralmente são confirmados através da atividade da uréase e catalase além da análise morfológica e de coloração Gram, onde as colônias apresentam-se transparentes e com aspecto puntiforme e quando visualizadas no microscópio são bastonetes curvos, com flagelos múltiplos (Tortora, Funke e Case, 2012). Desta forma, as colônias características que apresentaram crescimento em meio seletivo para HP, foram submetidas aos testes bioquímicos, onde das quatro amostras testadas três apresentaram características bioquímicas e morfológicas similares a H. pylori, conforme demonstrado na figura 1. A bactéria H. pylori apresenta atividade ureática positiva, o que é um dos fatores que contribuem para o seu crescimento no ambiente ácido do estomago, visto que converte a ureia em bicarbonato e amônia, o que provoca a alcalinização da mucosa gástrica permitindo a vida da bactéria na região estomacal (Picoli, 2012). A maioria dos dados sobre H. pylori é oriunda de pesquisas com tecidos humanos, geralmente associados a biópsias gástricas, onde os tecidos são avaliados quanto a sua anatomia e alterações patológicas relacionadas à presença da bactéria, também são utilizados testes não invasivos para diagnostico (teste respiratório da uréase e o teste do antígeno fecal) ou por meio de testes invasivo sendo o exame mais realizado à endoscopia (KRUMEL, 2014). No entanto, estudos feitos com a H. pylori em utensílios, tanto domésticos, hospitalares e em alimentos são recente e escasso, pois a detecção desta bactéria é de difícil análise, manipulação, além de ser uma análise de alto custo, por isso pouco trabalhada fora do âmbito dos diagnósticos em biópsias gástricas, devido à sensibilidade que este microrganismo apresenta ao ambiente externo. Este trabalho evidenciou que a bactéria pode estar presente em objetos compartilhados e pode ser favorecida por hábitos como o uso de um mesmo utensílio, no caso a bomba de chimarrão, pois mesmo sendo a bactéria sensível ao ambiente externo, o objeto é utilizado em um curto espaço de tempo por várias pessoas, permitindo a transmissão do microrganismo através da bomba de chimarrão, o que corrobora com os dados de Andreolla et al. (2016) que reportaram uma forte associação entre o consumo de chimarrão com o diagnóstico positivo para H. pylori, através de analises citopatológicas gástricas, teste de uréase respiratória e detecção do gene caga. 4. CONSIDERAÇÕES FINAIS Através deste estudo foi possível verificar que a bomba de chimarrão pode ser um veiculo de transmissão do patógeno H. pylori, visto que em 37,5% das amostras coletadas foi possível realizar o isolamento de uma bactéria com todas as características morfológicas e bioquímicas relacionadas ao patógeno. No entanto, trata-se da primeira etapa de um estudo amplo, cujas próximas etapas serão a coleta de um maior número de amostras e a detecção por métodos moleculares do gene caga, relacionado à patogenicidade do micro-organismo. 5. REFERÊNCIAS

4 AGOSTINHO JÚNIOR, F.de. Soro prevalência e fatores de risco para infecção pelo Helicobacter pylori. Jornal Pediatria, v. 79, n. 1, p. 3-4, ANDREOLLA, H. F.; BONA, L.R.; SANDER, G.B.; MAZZOLENI, L.E.; TAVARES, R.G.; PROLLA, J.C. Lack of association between Helicobacter pylori's virulence and increased serum c-reactive protein levels in functional dyspeptic patients. Arquivos de Gastroenterologia, São Paulo, v. 53, n. 1, p , Mar BAÚ, F.C.; HUTH, A. Fatores de risco que contribuem para o desenvolvimento do câncer gástrico e de esôfago. Revista Contexto & Saúde, v. 11, n. 21, p , BONAMIGO, R.M.; LEITE, C.S.M.; BAKOS, L. Estudo sobre a associação entre Helicobacter pylori e urticária crônica idiopática. Revista da Associação Médica Brasileira, v. 45, n. 1, p. 9-14, COELHO, F. M. M. C. Helicobacter pylori Eficácia da terapêutica f. Dissertação (Mestrado) - Curso de Medicina, Universidade da Beira Interior Ciências da Saúde, Covilhã, Disponível em: < Acesso em: 25 ago DEMIRAY, E.; YILMAZ, Ö.; ŞARKIŞ, C.; SOYTÜRK, M.; ŞIMŞEK, İ. Comparison of invasive methods and two different stool antigen tests for diagnosis of H. pylori infection in patients with gastric bleeding. World Journal of Gastroenterology : WJG, v.12, n. 26, p , Departamento Intersindical de Estatística e Estudos Socioeconômicos. Visão geral dos serviços de água e esgotamento sanitário no Brasil Disponível em: < Acesso em: 24 ago FIRME, L.E.; GALLON, C.W. Perfil nutricional de pacientes com carcinoma esofágico de um hospital público de Caxias do Sul. Revista Brasileira de Cancerologia, v. 56, n. 4, p , Guia Antimicrobianos - Vivianne Vieira de Melo; Izabel de Paula Duarte; Amanda Queiroz 1.ed. - Goiânia, INSTITUNO NACIONAL DO CÂNCER JOSE ALENCAR GOMES DA SILVA INCA. Tipos de câncer. Disponível em: < Acesso em: 12 ago KRUMEL, C.F. Diagnóstico de Helicobacter pylori salivar por espectroscopia FTIR supervisionada por PCR: uma nova tecnologia para a atenção primária f. Dissertação (Mestrado) - Curso de Promoção à Saúde, Universidade de Santa Cruz do Sul, Santa Cruz do Sul, MORAES, M.M.C.; SILVA, G.A.P. Fatores de risco para infecção pelo Helicobacter pylori em crianças. Jornal de Pediatria, v. 79, n. 1, p , 2003.

5 OLIVEIRA, C. S. B. Incidência e prevalência da infeção por Helicobater pylori em utentes do Laboratório de Análises Clínicas Machado e sua relação com fatores de risco do hospedeiro. Diss OLIVEIRA, J.G.de; FERREIRA, C.H.T.; CAMERIN, A.C.S.; ROTA, C.A.; MEURER, L.; SILVEIRA, T.R.da. Prevalência de infecção pelo CAGA-POSITIVO Helicobacter pylori CEPAS entre crianças e adolescentes no sul do Brasil. Arquivos Gastroenterologia, v. 51, n. 3, p , PENA, S. A. ESTUDIO MOLECULAR DE LOS FACTORES DE VIRULENCIA Y DE LA RESISTENCIA A CLARITROMICINA EN LA INFECCIÓN POR Helicobacter pylori f. Tese (Doutorado) - Universidad Complutense de Madrid, Madri, Disponível em: <eprints.sim.ucm.es/11520/1/t32212.pdf>. Acesso em: 14 set PICOLI, S. U. Perfil de sensibilidade de Helicobacter pylori à amoxicilina, claritromicina e ciprofloxacina no Rio Grande do Sul, Brasil f. Tese (Doutorado) - Curso de Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Faculdade de Medicina. Programa de Pós-graduação em Ciências em Gastroenterologia e Hepatologia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Faculdade de Medicina. Programa de Pós-graduação em Ciências em Gastroenterologia e Hepatologia, Porto Alegre, PONTES, R. M. L. A erradicação do Helicobacter pylori na atualidade e o problema da resistência f. Dissertação (Mestrado) - Curso de Medicina, Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar da Universidade do Porto, Porto, Disponível em: < Acesso em: 23 set QUEIROZ, D.M.; CARNEIRO, J.G.; BRAGA-NETO, M.B.; FIALHO, A.B.; FIALHO, A.M.; GONCALVES, M.H. Natural History of Helicobacter pylori infection in childhood: eight-year follow-up cohort study in an urban community in northeast of Brazil. Helicobacter. v.17, p , THOMAZINI, C.M.; PINHEIRO, N.A.; PARDINI, M.I.; NARESSE, L.E.; RODRIGUES, M.A.M. Infecção por Helicobacter pylori e câncer gástrico: frequência de cepas patogênicas caga e vaca em pacientes com câncer gástrico. Jornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial, [s.l.], v.42, n.1, p.25-30, fev TORTORA, GJ, FUNKE, BR, CASE, LC. Microbiologia 10. edição Porto Alegre: Artmed, 2012.