POQ 6 Determinação do teor de Lípidos Elaboração: RQ Verificação: DT e RDQ Aprovação: DT e RQ Entidade Emissora: RQ POQ 6 E0 (18-10-2013) 1/7
Historial de Versões Edição Data Motivo da Emissão/Alterações 0 18-10-2013 Novo Documento Índice 1 - Domínio de Aplicação e Objetivo 2 Princípio Teórico 3 - Responsabilidades 4 Documentos 4.1 Documentos Aplicáveis 4.2 Documentos de Referência 5 - Definições e Siglas 6 - Método Operacional 6.1 Reagentes 6.2 Material e Equipamentos 6.3 Técnica 6.4 Expressão de Resultados 7 - Diagramas de Fluxo 8 - Observações 8.1 Interferências 8.2 Precauções na Realização do Ensaio 8.3 Condições Ambientais Específicas 1 - Domínio de Aplicação e Objetivo Este documento tem como objetivo descrever a determinação do teor de Lípidos em Géneros Alimentícios. 2 Princípio Teórico A determinação de Lípidos tem por base o tratamento da amostra com ácido clorídrico diluído fervente por forma a libertar as frações lipídicas (Hidrólise ácida), seguida de filtração da massa resultante, secagem e extração com éter de petróleo da matéria gorda retida no filtro. Eliminação do solvente por evaporação, secagem e pesagem do extrato. 3 Responsabilidades A elaboração deste procedimento é da responsabilidade do Responsável pelo Departamento Físico-Químico. POQ 6 E0 (18-10-2013) 2/7
4 - Documentos 4.1 - Documentos Aplicáveis PG22 - Preparação e Limpeza de Material; Controlo da Água Purificada; IT 70 - Preparação de Reagentes e de Soluções Padrão; PG20 - Controlo de Qualidade dos Resultados de Ensaio; Imp1POQ6; Imp2POQ6; 4.2 - Documentos de Referência Norma Portuguesa NP 876. 2001. Alimento para animais. Determinação do teor de matéria gorda bruta. 3ªEdição. Instituto Português da Qualidade. Portugal; Norma Portuguesa NP 1974. 2009. Pescado: Determinação do teor de matéria gorda total. 3ªEdição. Instituto Português da Qualidade. Portugal; Norma Portuguesa NP 1613. 1979. Carnes, derivados e produtos cárneos. Determinação da matéria gorda total. 1ªEdição. Instituto Português da Qualidade. Portugal. Health and Consumers Directorate - General. 2012. Guidance document for competent authorities for the control of compliance with EU legislation. European Commission. Disponível em: ec.europa.eu. consultado a 18 Julho de 2013. 5 - Definições e Siglas Lípidos: os lípidos totais incluindo os fosfolípidos extraídos por meio de éter de petróleo após libertação das frações lipídicas por ácido clorídrico. 6 - Método Operacional 6.1 Reagentes 6.1.1 Ácido Clorídrico concentrado 37% Esta solução poderá ser mantida a 20ºC. 6.1.2 Solvente de extração: Éter de Petróleo Destilado entre 40 C a 60 C Esta solução poderá ser mantida a 20ºC. 6.1.3 Papel indicador 6.2 Material e Equipamentos - Triturador; - Espátula de dimensões adequadas; - Balança sensível a 0,0001g; - Erlenmeyer de 250mL de capacidade; POQ 6 E0 (18-10-2013) 3/7
- Funil de vidro; - Vidro de relógio; - Papel de filtro; - Cartucho de extração em papel de filtro desengordurado; - Algodão desengordurado; - Equipamento de extração automático segundo o método Randall; - Copo de extração; - Placa de aquecimento elétrico; - Exsicador, contendo uma substância desidratante eficaz; - Estufa elétrica regulável a 104 C±1 C. 6.3 Técnica 6.3.1 Preparação da Amostra Géneros Alimentícios: Triturar e homogeneizar a amostra de forma a garantir que não haja separação de nenhum constituinte da mesma. 6.3.2 Operação: 1. Hidrólise ácida: Pesar a amostra preparada para erlenmeyer com a precisão de 0,0001g (ver toma da amostra a pesar na Tabela I); Registar a massa de amostra utilizada no Imp1POQ6; Adicionar 45ml de ácido clorídrico concentrado (6.1.1) e 75ml de água destilada; Tapar com vidro de relógio e levar à ebulição durante 20min; Tabela I Orientações para determinar a toma de amostra. Teor de Lípidos (esperado) Toma de Amostra (g) 50% 0,5 1,0 25% <50% 1,0 2,0 10% <25% 2,0 3,0 5% <10% 3,0 5,0 <5% 5,0 10,0 2. Filtração: Verter o conteúdo quente do erlenmeyer sobre o papel de filtro contido num funil; Lavar o erlenmeyer e o vidro de relógio três vezes com água quente; Lavar o papel de filtro com água quente até que os líquidos de lavagem não se encontrem ácidos, verificar com papel indicador (6.1.3); Colocar o papel de filtro em vidro de relógio e secar durante 1hora em estufa a 104 C±1 C; Deixar arrefecer. POQ 6 E0 (18-10-2013) 4/7
3. Preparação do copo de extração: Colocar o copo de extração 1hora na estufa a 104 C±1 C; Deixar arrefecer em exsicador (cerca de 1hora); Pesar e registar o peso no Imp1POQ6; Repetir o processo até obtenção de massa constante, isto é, até que duas pesagens sucessivas, separadas por 1hora de aquecimento complementar não difiram mais de 0,010g. 4. Extração Técnica de Randall: 4.1 Colocar o solvente no copo de extração Primeira extração do dia: colocar o solvente em cada copo (cerca de 60mL); Extrações seguintes: enroscar o copo por baixo do condensador, abrir a torneira de passagem e deixar o solvente escoar para o copo, retirar o copo e repor as perdas de solvente. 4.2 Imersão/Decocção Enrolar o papel de filtro com a amostra tratada (6.3.2 ponto 2), e introduzi-lo no cartucho de extração; Tapar com algodão; Conectar o anel magnético ao cartuxo de extração, pendurar pelo suporte magnético e levantá-lo; Enroscar o copo com o solvente por baixo do condensador; Ajustar a temperatura: para o Éter de Petróleo (6.1.2) cerca de 150 a 160ºC; Abrir a torneira de refluxo; Abrir a torneira de água corrente de forma a circular nos condensadores; Descer o equipamento para as bases de aquecimento e descer os cartuxos para os copos; Ligar o equipamento, aquecer até ebulição, esperar 20 minutos. 4.3 Lavagem Levantar o cartuxo de extração; As amostras são lavadas pelo condensado que escorre do condensador. Se necessário aumentar ligeiramente a temperatura (por exemplo mais 10ºC) para que o refluxo seja suficiente em todos os condensadores; Esperar 20 a 40 minutos, dependendo da amostra. 4.4 Evaporação Fechar a torneira de refluxo; POQ 6 E0 (18-10-2013) 5/7
Depois de 10 minutos, aproximadamente, a maioria do solvente deverá ter evaporado; este foi recolhido no condensador para que possa ser usado na extração seguinte. 4.4 Secagem Remover o copo de extração; Colocar o copo de extração na hotte até o solvente ter evaporado; Secar durante 1hora na estufa a 104 C±1 C; Arrefecer em exsicador; Pesar até massa constante e registar no Imp1POQ6. 6.4 Expressão de Resultados 6.4.1 Cálculos: Sendo: m a massa da toma para análise, expressa em gramas; m 1 a massa inicial do Copo de extração, expressa em gramas; m 2 a massa do Copo e dos Lípidos após secagem, expressa em gramas; O teor em Lípidos, expressos g/100g é obtido da seguinte forma: 6.4.2 Resultados: Tabela II Expressão dos resultados obtidos. Teor obtido (g/100g) 10 g/100g Apresentação dos resultados À unidade <10g e >0,5g/100g À décima 0,5g/100g <0,5g/100g 6.4.3 Controlo de Qualidade Efetuar as ferramentas do Controlo de Qualidade Interno apresentadas no Imp2POQ6.E0. Preencher as respetivas folhas de registo de duplicados e verificar o cumprimento dos critérios de aceitação definidos. 7- Diagramas de Fluxo Não aplicável. POQ 6 E0 (18-10-2013) 6/7
8- Observações 8.1 Interferências Não aplicável 8.2 Precauções na Realização do Ensaio Ver PG16 - Higiene e Segurança no Laboratório, Gestão de resíduos 8.3 - Condições Ambientais Específicas Não aplicável POQ 6 E0 (18-10-2013) 7/7