O nome do CEMEL deverá constar em todas as publicações originadas de trabalhos nele realizado

Transcrição

1 CEMEL Centro de Microscopia Eletrônica ICB-UFMG - Bloco O 2, sala , Belo Horizonte, MG Coordenação da área: Dawidson Assis Gomes (31) Gregory Thomas Kitten (31) cemel@icb.ufmg.br (031) O pesquisador interessado em utilizar o Centro deverá ter seu projeto aprovado pelos Coordenadores e assumir o compromisso de pagar pelos custos para a execução do projeto conforme valores estipulados (veja Taxa de Uso Tabelas ). Se for tecnicamente capacitado a utilizar os equipamentos e instalações do Centro poderá fazê-lo de forma independe, mediante reserva de horário. O prazo de realização das análises estará vinculado ao funcionamento dos equipamentos. Este formulário. Só após a aprovação dos coordenadores que o projeto poderá ser executado no Centro. O nome do CEMEL deverá constar em todas as publicações originadas de trabalhos nele realizado 1) Considerações Iniciais a) Retirar todas as capas e plásticos que estão protegendo o equipamento 2) Microscópio: a) Chave principal sempre ligada (ON). b) Ligar as duas chaves debaixo da chave principal ( System/PC ON e Componentes ON ). c) Chave do laser sempre ligada (ON). 1

2 d) Ligar as 2 chaves que ficam em cima da caixa dos lasers ( System/PC ON e Componentes ON ). e) Ligar as caixinhas que ficam em cima da caixa do laser: a superior (liga fluorescência) e a inferior (liga o microscópio, deve ficar sempre ligada). 2

3 3) Computador: a) Ligar a CPU do computador. b) Lembrar de levar CD/DVD para gravar as imagens (Não deve ser utilizado drives externos para evitar vírus no sistema). 4) Para Iniciar a Operação: a) Na tela do computador, clicar no ícone do software do programa ZEN. b) Sobre a tela principal aparecerá uma pequena janela, na qual se deve escolher a opção START SYSTEM. c) Software Especificações Ocular Controles do microscópio. Aquisition Onde seleciona-se os settings para aquisição de imagens. Z-Stack Selecionar esta opção quando for realizar reconstruções em 3D Regions Escolher regiões de interesses específicas. Bleaching Esta opção é para fazer experimentos de fotoativação, FRAP, etc... d) Observar se o adaptador da platina está bem encaixado, é importante para conseguir focalizar nas objetivas de maior aumento. 3

4 e) Os filtros para a realização de imagens de campo claro (DIC) neste microscópio deve ser trocado manualmente de acordo com a especificação de cada objetiva. f) Caso opte-se por trabalhar com uma objetiva que exija o uso de óleo de imersão, adicionar uma pequena gota de óleo nas laterais da lente e colocar a lâmina contendo a amostra com a lamínula virada para baixo. g) Para olhar no microscópio: na tela touchscreen, clicar em HOME. Make it visible: para ver no microscópio. TL Illumination: ligar luz branca. h) Tela touchscreen: clicar em MICROSCOPE. OBJECTIVES: escolher objetiva. Para ver fluorescência: ir para FILTERS, escolher, e ligar RL Illumination (liga fluorescência). Olhar campo rapidamente e desligar. i) Para ver na tela do computador ir para AQUISITION, clicar em CONTINUOUS. j) Escolher em LIGHT PATH o caminho que a luz deve fazer. Exemplo: DIC. Escolher a segunda câmera, modo MIRROR, sem cor. Acender a lâmpada, ajustar intensidade da luz. Para ajustar imagem: mexer em pinhole e no ganho (quanto menos ganho, menos ruído). Para analisar outro canal: adicionar mais um TRACK (clicar em +). Para olhar outros canais: começar com o fluorocromo de maior comprimento de onda e ir fazendo em ordem decrescente (do vermelho, pro amarelo, pro verde, pro azul). 4

5 Para DAPI: Ligar laser de 405 em cima e no light path. Começar com intensidade de 10%. Escolher primeira câmera, PLATE, LP420. Se background ficar desajustado, há contaminação por outro fluoróforo: trocar o filtro (por exemplo, escolher segunda câmera, MIRROR, EP ). Também mexer no pinhole, ganho e intensidade para melhorar imagem. k) Para ajustar o background: Embaixo da imagem, escolher range indicator. Display: mudar brilho até background ficar azul. Clicar em dimension para colocar cor de novo. l) Para fazer imagem: selecionar todos os tracks, clicar em SNAP, depois em SPLIT. m) Para salvar: Salvar na barra da extrema direita, embaixo da amostra da imagem. Criar pasta para cada usuário, dentro da pasta do orientador. n) Para fazer camadas: Escolher Z-STACK. Escolher os tracks de interesse. Clicar em START EXPERIMENT. Para salvar: igual ao anterior. 5) Para Finalizar a Operação: a) Salvar no CD. b) Desligar os lasers e esperar 5 minutos para desligar o sistema. c) Fechar o software. d) Desligar o computador. e) Desligar lasers e demais chaves (Não esquecer de esperar 5 minutos para desligar o sistema). 5