ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF HYDROALCOHOLIC EXTRACT OF JATOBÁ-DO- CERRADO (Hymenaea stigonocarpa Mart. ex Hayne) AND BARBATIMÃO (Stryphnodendron

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1 Atividade antibacteriana do extrato hidroalcoólico de Jatobá-do-cerrado... 1 ATIVIDADE ANTIBACTERIANA DO EXTRATO HIDROALCOÓLICO DE JATOBÁ-DO- CERRADO (Hymenaea stigonocarpa Mart. ex Hayne) E BARBATIMÃO (Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville) ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF HYDROALCOHOLIC EXTRACT OF JATOBÁ-DO- CERRADO (Hymenaea stigonocarpa Mart. ex Hayne) AND BARBATIMÃO (Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville) Jaqueline Evangelista Alves 1 Tamara Alves de Souza 1 Guilherme Araújo Lacerda 2 Priscila Maria Andrade de Prince 3 RESUMO A emergência disseminada de cepas bacterianas resistentes aos antimicrobianos constitui um grave problema de saúde pública mundial. Visto que, o uso indiscriminado destes fármacos tem selecionado populações bacterianas resistentes, as plantas de utilização popular constituem uma excelente alternativa para o controle destes micro-organismos. O presente trabalho tem como objetivo analisar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais frente à micro-organismos multirresistentes através da técnica REMA, uma microdiluição em placa que utiliza a resazurina como solução reveladora do crescimento microbiano, visando à utilização desta matéria prima como compostos para novos antimicrobianos. A espécie vegetal S. adstringens apresentou Concentração Inibitória Mínima (CIM) de 1000 μg/ml frente às bactérias S. aureus, S. aureus meticilina resistente (MRSA) e E. faecalis. Evidenciou-se que a partir da técnica REMA pode-se obter resultados bastante satisfatórios em relação à atividade antimicrobiana de extratos vegetais e que as substâncias naturais são uma alternativa viável para solucionar a grande emergência de cepas bacterianas resistentes aos fármacos sintéticos, podendo assim ser utilizadas como matéria prima para síntese de novos antibióticos. Palavras-Chave: Produtos com ação antimicrobiana. Cerrado. Plantas Medicinais. Viabilidade Microbiana. Extratos Vegetais. ABSTRACT The widespread emergence of bacterial strains resistant to antibiotics is a serious public health problem worldwide. Whereas, the indiscriminate use of these drugs has selected resistant bacterial populations, the popular uses of plants are an excellent alternative for the control of these microorganisms. The present work aims to analyze the antimicrobial activity of plant extracts against the multidrug-resistant micro-organisms through the technique REMA, a microdilution plate that uses resazurin as a developing solution of microbial growth, aiming to use this as a raw material for new antimicrobial compounds. The plant species S. adstringens showed Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of 1000 mg/ml on the bacteria S. aureus, methicillin resistant S. aureus (MRSA) and E. faecalis. It was evident that from the MRI technique can obtain good results in relation to the antimicrobial activity of plant extracts and natural substances that are a viable alternative to solve the great emergence of bacterial strains resistant to synthetic drugs, which can then be used as raw material for synthesis of new antibiotics. Keywords: Products with Antimicrobial Action. Cerrado. Medicinal Plants. Microbial Viability. Plant Extracts. 1 Graduandas em Biomedicina, Faculdades Unidas do Norte de Minas - FUNORTE. s: jaquebiomedicina@hotmail.com; thamara_vzp@hotmail.com 2 Núcleo de Estudos em Plantas Medicinais NEPM, Faculdade de Saúde Ibituruna FASI. Departamento de Biologia Geral, Centro de Ciências Biológicas e da Saúde, Universidade Estadual de Montes Claros - UNIMONTES. guilhermebiologia@yahoo.com.br 3 Faculdades Unidas do Norte de Minas - FUNORTE. priscila.a.prince@hotmail.com

2 Atividade antibacteriana do extrato hidroalcoólico de Jatobá-do-cerrado... 2 INTRODUÇÃO A emergência disseminada de cepas bacterianas resistentes aos antimicrobianos constitui um grave problema de saúde pública mundial. Apesar do grande avanço no desenvolvimento de novos antimicrobianos de amplo espectro, o uso indiscriminado deste tipo de medicamento, tem selecionado populações bacterianas resistentes, limitando assim as opções terapêuticas dos processos infecciosos (FERREIRA et al., 2010). Dentre os micro-organismos mais importantes em se tratando de resistência bacteriana encontram-se os Gram-positivos Staphylococcus aureus e Enterococcus faecalis e os Gramnegativos Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa. O S. aureus se destaca por ser um dos patógenos mais importantes, pois atua como agente infeccioso causador de uma série de infecções, variando desde infecções localizadas como os abscessos, a infecções disseminadas como septicemia grave (MAIA et al., 2008). Cerca de 80% das cepas hospitalares de S. aureus adquiriram resistência aos beta-lactâmicos, por exemplo, a meticilina através de alterações no sítio-alvo, uma vez que produzem uma PBP adicional (proteína que se liga à penicilina) que possui menos afinidade aos beta-lactâmicos (MIMS et al., 2005). A E. coli é o mais importante agente causador de infecções no trato urinário, que no decorrer dos anos vem apresentando resistência adquirida aos principais medicamentos utilizados na terapêutica empírica deste tipo de infecção, como as fluoroquinolonas (MENEZES et al., 2009). O gênero Enterococcus já apresenta resistência intrínseca e adquirida a vários medicamentos comumente utilizados no tratamento de infecções enterocócicas, como a ampicilina, por exemplo. Os Enterococcus resistentes à vancomicina têm emergido como importantes patógenos nosocomiais com importância mundial, principalmente nos Estados Unidos. No Brasil, a frequência de isolamento destas cepas nos hospitais também vem aumentando significativamente (CONCEIÇAO et al., 2010; FURTADO, 2005). Além destas bactérias a P. aeruginosa também possui mecanismos naturais e adquiridos de resistência que por diversas vezes frustra a terapêutica moderna, e está entre os agentes infecciosos mais frequentemente isolados em ambientes hospitalares de alta letalidade. É um patógeno oportunista que causa bacteremias em pacientes imunodeprimidos, vítimas de queimaduras, portadores de infecções urinárias associadas ao uso de cateteres e de pneumonias hospitalares, especialmente em unidades de terapia intensiva (PIRES et al., 2009; TORRES et al., 2006). Este micro-organismo possui grande capacidade de crescer e se multiplicar em diversos ambientes por possuir as mínimas necessidades nutricionais, além de ser resistente a desinfetantes químicos e antissépticos como compostos quaternários de amônio e fenol (MURRAY et al., 2004; PIRES et al., 2009).

3 Atividade antibacteriana do extrato hidroalcoólico de Jatobá-do-cerrado... 3 Visto que têm emergido um grande número de populações bacterianas resistentes aos antibióticos de escolha no tratamento das infecções ocasionadas por estes micro-organismos, sugere-se a busca por novas fontes terapêuticas de origem natural eficientes no controle da disseminação destes micro-organismos. As plantas de utilização popular constituem uma excelente alternativa para a síntese de novos fármacos antimicrobianos, visto que a diversidade das substâncias naturais é muito superior à dos fármacos de origem sintética (SILVA et al., 2010). A Organização Mundial de Saúde (OMS) reconhece a importância da utilização de fitoterápicos nos países em desenvolvimento, como o Brasil em vista do menor custo benefício para a população (REZENDE; COCCO, 2002). Atualmente os medicamentos fitoterápicos estão em crescente ascensão em diversos países, na África, por exemplo, 80% da população são dependentes do uso deste tipo de medicamento, em função do alto custo dos fármacos sintéticos. As plantas medicinais têm ocupado um papel muito importante na medicina moderna, já que oferecem recursos para produção de medicamentos que dificilmente seriam obtidos por via síntese química. Outra vantagem da fitoterapia é que as plantas naturais fornecem sustâncias que podem ser levemente modificadas tornando-as mais eficazes e menos tóxicas (TUROLLA; NASCIMENTO, 2006). Contudo houve uma diminuição no desenvolvimento de novas drogas. A principal razão pela qual as indústrias farmacêuticas reduziram as pesquisas em drogas antimicrobianas é o pequeno retorno financeiro sobre o investimento, devido aos custos cada vez mais altos (NORRBY; NORD, 2005). Existem diversos métodos utilizados para verificar a ação antimicrobiana de extratos vegetais, sendo um deles a técnica REMA (Resazurin Microtiter Assay) que consiste em uma microdiluição em placa, que utiliza volumes menores e permite a realização de vários ensaios em um período de tempo menor. O principal objetivo dessa técnica é determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) que é obtida a partir da realização diluições subsequentes, sendo a CIM correspondente à menor concentração capaz de inibir o crescimento das cepas ou provocar sua morte (PALOMINO et al., 2002). Após o crescimento bacteriano, é adicionada a resazurina como substância reveladora para obter os valores da MIC. A resazurina possui como característica coloração azul, porém, quando oxidada por microrganismos se transforma em outra substância, a resofurina, que possui coloração rosa. Portanto, a manutenção da cor azul nos orifícios é interpretada como ausência de crescimento bacteriano e o desenvolvimento de cor rosa, como presença de crescimento bacteriano (FRANZBLAU et al., 2009). As pesquisas com plantas medicinais fazem uso das diversas partes dos vegetais, como raízes, cascas, folhas, frutos e sementes, de acordo com a planta em questão (REZENDE; COCCO, 2002). Dentre as inúmeras espécies utilizadas pela população com fins terapêuticos se encontram as cascas de Stryphnodendron adstringens, uma espécie amplamente utilizada na medicina popular

4 Atividade antibacteriana do extrato hidroalcoólico de Jatobá-do-cerrado... 4 como anti-séptico e bactericida, no tratamento de diversas infecções cutâneas e Hymenaea stigonocarpa utilizada no tratamento de problemas respiratórios, vermífugo, infecções intestinais e como cicatrizante (FERREIRA et al., 2010; VALERIANO et al., 2009). Diante do exposto, o presente trabalho tem como objetivo verificar a ação antimicrobiana de extratos brutos hidroalcoólicos dos caules de Stryphnodendron adstringens e Hymenaea stigonocarpa sobre micro-organismos que apresentam resistência a diversos fármacos existentes, visando encontrar alternativas no controle de sua disseminação e desenvolvimento de novos medicamentos eficazes no combate aos mesmos. MATERIAIS E MÉTODOS Coleta e identificação botânica As espécies utilizadas foram coletadas na região norte de Minas Gerais e devidamente herborizadas, identificadas e catalogadas sob os respectivos números de tombo Jatobá-do-cerrado (Hymenaea stigonocarpa Mart. ex Hayne) voucher 19 e Barbatimão (Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville) voucher 74. As exsicatas foram depositadas no Herbário da Faculdade de Saúde Ibituruna (FASI) pertencente a coleção do Núcleo de Estudos em Plantas Medicinais (NEPM). Obtenção dos extratos As partes botânicas foram separadas do caule e estes foram triturados até obtenção de um pó fino. O pó dos caules foi submetido aos processos de extração a frio por maceração, na proporção de 1:3 (p/v) água:etanol (BRANDÃO et al., 2007). O extrato obtido foi filtrado em papel-filtro, concentrado em estufa a temperatura inferior a 40ºC, e logo após transferido para o recipiente de vidro e ficou em capela até a eliminação dos solventes. Os extratos brutos foram pesados (0,01g) e diluídos com 1,0mL do solvente dimetilsulfóxido (DMSO 0,1%) (DAYAN et al., 2000). Droga de referência Utilizou-se uma solução estoque de tetraciclina (TET Sigma) de concentração igual a μg/mL. A solução estoque será diluída 78x para a obtenção da solução de uso para S. aureus (CIM 0,25-1) e E. coli (CIM 1-4) com concentração final de 128μg/mL. Para E. faecalis (CIM 8-32) e P. aeruginosa (CIM 8-32) a solução estoque será diluída 39x para a obtenção da solução de uso com concentração final de 256μg/mL.

5 Atividade antibacteriana do extrato hidroalcoólico de Jatobá-do-cerrado... 5 Preparo do inócuo Os microrganismos utilizados foram obtidos a partir do isolado clínico Staphylococcus aureus meticilina resistente (MRSA) e os demais a partir da American Type Culture Collection (ATCC) com respectivos números: Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Escherichia coli (ATCC 25922) Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) e Enterococcus faecalis (ATCC 29212). Foram preparadas soluções bacterianas compatíveis com a escala 0,5 de MacFarland, resultando em uma suspensão de 1-2 x 10 8 UFC/mL. Da escala 0,5 de MacFarland, será realizada uma diluição de 1:100 em caldo BHI. Determinação da atividade antimicrobiana dos extratos vegetais utilizando a técnica REMA (Resazurin Microtiter Assay) Após a adição do caldo BHI e dos extratos vegetais na microplaca, realizou-se a diluição seriada dos extratos e, posteriormente, adicionou 100 µl das suspensões bacterianas. Em seguida, a microplaca fechada foi incubada a 37º C. Após 24 horas de incubação, os orifícios da microplaca receberam 50 L da solução reveladora. A microplaca foi reincubada a 37ºC por 6 horas. A seguir, foi realizada a leitura visual. Cada extrato vegetal foi testado em duplicata. RESULTADOS E DISCUSSÃO O presente trabalho fez uso de duas árvores nativas para investigação de sua atividade antibacteriana, sendo a escolha baseada no uso popular em tratamentos de diversas enfermidades e em sua disponibilidade local. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos extratos dos caules dos vegetais testados está disposta abaixo (Tabelas 1 e 2): Tabela 1 Determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) do extrato caulinar hidroalcoólico da espécie Barbatimão (Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville). Micro-organismo Tetraciclina μg/ml MIC μg/ml S. aureus (ATCC 25913) 0, S. aureus (MRSA) 0, E. coli (ATCC 25922) 2 >1000 P. aeruginosa (ATCC 27853) 16 >1000 E. faecalis (ATCC 29212) Fonte: dados da pesquisa.

6 Atividade antibacteriana do extrato hidroalcoólico de Jatobá-do-cerrado... 6 Tabela 2 Determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) do extrato caulinar hidroalcoólico da espécie Jatobá-do-cerrado (Hymenaea stigonocarpa Mart. ex Hayne). Micro-organismo Tetraciclina μg/ml MIC μg/ml S. aureus (ATCC 25923) 0,25 >1000 S. aureus (MRSA) 0,5 >1000 E. coli (ATCC 25922) 2 >1000 P. aeruginosa (ATCC 27853) 16 >1000 E. faecalis (ATCC 29212) 8 >1000 Fonte: dados da pesquisa. A CIM foi definida como a menor concentração de droga capaz de inibir o crescimento de 90% das cepas analisadas, ou seja, a menor concentração do extrato vegetal capaz de impedir a mudança de cor de azul para rosa. As bactérias tornam-se resistentes aos antimicrobianos através de mutações e a aquisição de plasmídeos por diferentes mecanismos químicos, podendo também produzir enzimas que modificam a parte ativa da molécula do medicamento, tornando-o praticamente inativo, ou ainda, sintetizar novas enzimas que não sofrem a ação do medicamento e que possuem a mesma atividade metabólica das enzimas que são inativadas pelo mesmo (MURRAY et al., 2004). O constante aumento de micro-organismos resistentes a medicamentos alopáticos, e as dificuldades nas terapêuticas das doenças infecciosas com os fármacos já conhecidos incentiva o uso racional de medicamentos de origem natural. Os vegetais possuem classes de substâncias como produtos de seu metabolismo secundário que são responsáveis por sua atividade farmacognóstica, como flavonoides, que apresentam atividade anti-inflamatória, antialérgica, anticancerígena, os alcaloides utilizados como antitumorais, antitussígenos, antivirais, os esteroides/triterpenoides com ação anti-inflamatória, terpenos que ajudam no tratamento da hipertensão arterial, queimaduras, bactericida, fungicida e saponinas que são antivirais e atuam sobre membranas celulares (SILVA; MIRANDA; CONCEIÇÃO, 2010). Para que os extratos vegetais sejam considerados como fortes antimicrobianos, a CIM deve ser menor ou igual a 100 μg/ml; para os moderados o valor passa a ser de 100 a 500 μg/ml, para os considerados como fracos, a CIM deve estar entre 500 e 1000 μg/ml, já para valores acima de 1000 μg/ml, o extrato é considerado inativo (HOLETZ et al., 2002). Sendo assim, o extrato bruto hidroalcoólico da espécie Stryphnodendron adstringens, popularmente conhecido como barbatimão, apresentou MIC de 1000 μg/ml, demonstrando assim uma atividade fraca frente à cepa de S. aureus, S. aureus meticilina resistente (MRSA) e E. faecalis. Já frente às cepas de E. coli e P. aeruginosa o extrato foi considerado inativo.

7 Atividade antibacteriana do extrato hidroalcoólico de Jatobá-do-cerrado... 7 A avaliação corrobora com Madigan et al. (2004) que citam que as bactérias Gram-positivas possuem maior susceptibilidade aos antimicrobianos. Os medicamentos que possuem ação também frente aos Gram-negativos são chamados de amplo espectro e possuem maior utilização terapêutica (MADIGAN; MARTINKO; PARKER, 2004). Este resultado pode ser de elevada importância, já que a técnica REMA faz uso de quantidades mínimas do extrato bruto obtido. Em estudo realizado por Ferreira e colaboradores (2010), foram utilizados 100% do extrato para demonstrar a atividade antimicrobiana da espécie vegetal frente a 10 cepas de S. aureus de isolados clínicos, denotando a viabilidade de o S. adstringens ser utilizado como matéria prima para novos antibióticos. Em estudo comparativo da ação antimicrobiana do extrato vegetal de algumas árvores nativas, entre elas o S. adstringens a 10% (p/v) sobre bactérias como Klebsiella spp., S. aureus, Staphylococcus spp. coagulase negativa e Streptococcus spp., dos quais somente a Klebsiella spp. apresentou resistência ao extrato hidroalcoólico da espécie vegetal, sendo que as outras cepas apresentaram halos de inibição de 20, 16 e 28 mm, respectivamente (GONÇALVES; ALVES FILHO; MENEZES, 2006). Orlando (2005), evidenciou que o extrato hidroalcoólico da espécie vegetal em questão, nas concentrações de 100mg/ml, 200mg/ml e 300mg/ml possui atividade antimicrobiana contra Candida albicans, Candida krusei, Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Kocuria rhizophila, Neisseria gonorrhoeae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e Shigella flexneri. Em contraste, este estudo não evidenciou atividade contra P. aeruginosa provavelmente, isto se deve a variações da resistência das cepas testadas ou a utilização de diluições menores. A atividade antibacteriana do S. adstringens (Tabela 1) pode dever-se a seu principal constituinte ativo que são os taninos, que possuem diversas indicações terapêuticas, destacando-se como cicatrizante. Seu potencial antisséptico deve-se a sua capacidade de precipitar proteínas das células superficiais das mucosas e tecidos, formando uma camada protetora (FERREIRA et al., 2010; PANSERA et al., 2003). Já o extrato vegetal da espécie H. stigonocarpa (Tabela 2), também conhecido como jatobá do cerrado, foi considerado inativo frente às bactérias testadas. A inatividade do extrato pode deverse à constituição química das espécies vegetais que pode ser influenciada pelas variações climáticas e localização geográfica do vegetal, estágio de desenvolvimento no momento da coleta, parte da planta testada, a forma de preparo do extrato e até os protocolos utilizados no experimento. Outra questão relevante a se considerar, pode ser uma provável dificuldade de difusão do extrato, no meio de cultura, no caso o BHI (NASCIMENTO et al., 2008; SILVA; ANTUNES; CATÃO, 2011).

8 Atividade antibacteriana do extrato hidroalcoólico de Jatobá-do-cerrado... 8 As doenças infecciosas são a segunda maior causa de mortalidade mundial, cada vez menos antimicrobianos são aprovados pela FDA (Food and Drug Administration) e ao mesmo tempo o número de espécies bacterianas que adquirem resistência aos principais fármacos de uso são exorbitantes, isso justifica a necessidade urgente de novos agente antibióticos (GUIMARÃES; MOMESSO; PUPO, 2010). Porém, é importante primeiramente, evitar aquisição de mecanismos de resistência aos fármacos pré-existentes, pois este um problema inerente à terapia antimicrobiana. CONCLUSÃO A técnica REMA é um método de microdiluição em placa, permite analisar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais obtendo-se resultados bastante satisfatórios. Além de fornecer alta sensibilidade e reprodutibilidade, requerendo pequena quantidade de amostra e realização de vários ensaios em menor período de tempo, se comparada a outras técnicas. O presente trabalho evidenciou que o extrato bruto hidroalcoólico da espécie vegetal S. adstringens apresenta atividade antimicrobiana frente a cepas de S. aureus (MRSA), S. aureus e E. faecalis o que incentiva estudos sobre a questão de novos antimicrobianos para o controle de cepas bacterianas multirresistentes. Portanto, as substâncias naturais podem ser uma solução de alta viabilidade para síntese de novos fármacos antimicrobianos. Sugere-se estudos complementares para seleção de árvores nativas a serem submetidas à análise fitoquímica e farmacológica, e investigação de sua atividade antimicrobiana, que posteriormente pode gerar grande quantidade de agentes antimicrobianos de menor custo-benefício para os consumidores, desde que mantido um extrativismo autossustentável. REFERÊNCIAS BRANDÃO, M. G. L. Produção de chás e extratos de plantas medicinais. Serviço Brasileiro de Respostas Técnicas. Fundação Centro Tecnológico de Minas Gerais (CETEC), p. CONCEICAO, N.; DARINI, A. L. C.; PALAZZO, I. C. V.; OLIVEIRA, C. C.; HUEB, B.; OLIVEIRA, A. G. First report of vancomycin-resistant Enterococcus faecalis in Uberaba, Minas Gerais state. Brazilian Journal of Microbiolgy, v. 41, n. 1, p DAYAN, F. E.; ROMAGNI, J. G.; DUKE, S. O. Investigating the mode of action of natural phytotoxins. Journal of Chemical Ecology, v. 26, p , FERREIRA, S. B.; PALMEIRA, J. D.; SOUZA, J. H.; ALMEIDA, J. M.; FIGUEIREDO, M. C. P.; PEQUENO, A. S.; ARRUDA, T. A.; ANTUNES, R. M. P.; CATÃO, R. M. R. Avaliação da Atividade Antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcóolico de Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville sobre isolados ambulatoriais de Staphylococcus aureus. Revista Brasileira de Análises Clínicas, v. 42, n. 1, p , 2010.

9 Atividade antibacteriana do extrato hidroalcoólico de Jatobá-do-cerrado... 9 FRANZBLAU, S. G.; WITZIG, R. S.; MCLAUGHLIN, J. C.; TORRES, P.; MADICO, G.; HERNANDEZ, A.; DEGNAN, M. T.; COOK, M. B.; QUENZER, V. K.; FERGUSON, R. M.; GILMAN, R. H. Rapid, olwtechnologiy MIC determination with clinical Mycobacterium tuberculosis isolates by using the Microplate Alamar Blue Assay. Journal of Clinical Microbiology, v. 32, n. 2, p , FURTADO, G. H. C.; MARTINS, S. T.; COUTINHO, A. P.; SOARES, G. M. M.; WEY, S. B.; MEDEIROS, E. A. S. Incidência de Enterococcus resistente à vancomicina em hospital universitário no Brasil. Revista de Saúde Pública, v. 39, n. 1, p. 41-6, GONCALVES, A. L.; ALVES FILHO, A.; MENEZES, H. Efeitos antimicrobianos de algumas árvores medicinais nativas nas conjuntivites infecciosas. O Biológico, v. 68, p , GUIMARÃES, D. O.; MOMESSO, L. S.; PUPO, M. T. Antibióticos: Importância terapêutica e perspectivas para a descoberta e desenvolvimento de novos agentes. Química Nova, v. 33, n. 3, p , HOLETZ, F. B.; PESSINI, G. L.; SANCHES, N. R.; CORTEZ, D. A.; NAKAMURA, C. V.; DIAS FILHO, B. P. Screening of some plants used in the Brazilian folk medicine for the treatment of infectious diseases. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, v. 97, p , MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M.; PARKER, J. Microbiologia de Brock. 10. ed. São Paulo: Prentice Hall, p. MAIA, R. R.; PEREIRA, M. S. V.; HIGINO, J. S.; SIQUEIRA JÚNIOR, J. P.; ALBUQUERQUE, A. C. L.; PEREIRA, L. F.; MACEDO-COSTA, M. R.; PEREIRA, A. V. Efeito antimicrobiano do extrato de Momordica charantia Linn isolado e em associação com antibióticos sobre Staphylococcus aureus multirresistentes. Agropecuária Científica no Semi-árido, v. 4, n. 1, p. 12-7, MENEZES, K.M.P. et al. Avaliação da resistência da Escherichia coli frente a Ciprofloxacina em uroculturas de três laboratórios clínicos de Aracaju-SE. Revista Brasileira de Análises Clínicas, v. 41, n. 3, p , MIMS, C.; DOCKRELL, H. M.; GOERING, R. V.; ROITT, I.; WAKELIN, D.; ZUCKERMAN, M. Microbiologia Médica. 3. ed. Rio de Janeiro: Elsevier, MURRAY, P. R. et al. Microbiologia médica. 4. ed. Rio de janeiro: Guanabara Koogan, NASCIMENTO, J. E. et al. Estudo fitoquímico e bioensaio toxicológico frente a larvas de Artemia salina Leach. de três espécies medicinais do gênero Phyllanthus (Phyllanthaceae). Revista Ciências Farmacêuticas Básica e Aplicada, v. 29, n. 2, p , NORRBY, S. R.; NORD, C. E. Lack of development of new antimicrobial drugs: a potential serious threat to public health. Lacet Infectious Diseases, v. 5, p , ORLANDO, S. C. Avaliação da atividade antimicrobiana do extrato hidroalcóolico bruto da casca do Stryphnodendron adstringens (Martius) Coville (Barbatimão). Dissertação de Pós - Graduação Universidade de Franca, Franca p.

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