Chá de Cachinde A nova arma terapêutica contra infeções nasocomiais. Pires, Pedro 1 ; Vinha, Ana 2 ; Luis, Mariele. 3 ; Soares, Marta 4

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1 Chá de Cachinde A nova arma terapêutica contra infeções nasocomiais. Pires, Pedro 1 ; Vinha, Ana 2 ; Luis, Mariele. 3 ; Soares, Marta 4 1 PhD, Prof Coordenador, 2 PhD, Professor Associado, 3 Mestre; Professor Coordenador; 4 PhD; Professor Coordenador. 1 Pedro de Pina Catarino Pires, Itituto Superior Politécnico de Benguela - Av Governador Moutinho T-125; , pedrocatarino@me.com. Palavras Chave: Chá de Cachinde, infecções hospitalares, infecções nasocomiais, actividade antibacteriana, Staphylococcus aureus MRSA, Cymbopogon citratus. Introdução: A Organização Mundial de Saúde (OMS) define a medicina tradicional como "a combinação total de conhecimentos e práticas, sejam ou não explicáveis, usados no diagnóstico, prevenção ou eliminação de doenças físicas, mentais ou sociais, e que podem assentar exclusivamente em experiências passadas e na observação tramitida de geração em geração, oralmente ou por escrito". Ao longo dos séculos tem-se verificado a necessidade de compilar o conhecimento tradicional baseado na observação, experimentação e tramissão entre gerações, tendo-se tornado uma metodologia integrante do método científico ocidental. Os estudos etnofarmacológicos realizados em África, permitiram o levantamento dos conhecimentos tradicionais relativamente à preparação e uso de medicamentos à base de plantas medicinais espontâneas ou cultivadas. São, portanto, estudos científicos que englobam, além da inventariação, outros estudos, nomeadamente o estudo fitoquímico guiado por eaios de atividade biológica, que permitem validar cientificamente o conhecimento tradicional, obtido por serendipismo (Proença da Cunha, 25). Neste trabalho apresentamos os resultados do efeito antibacteriano do óleo essencial do chá de Caxinde, tornando estes muito promissores para o combate a infecções nasocomiais. Objectivos: Objectivo Geral Estudo etnofarmacológico das plantas utilizadas na medicina tradicional Angolana Objectivos Específicos (i) Realizar o levantamento das plantas medicinais endémicas utilizadas na medicina tradicional Angolana, recorrendo a inquéritos etnobotânicos e etnofarmacológicos; (ii) Isolar e proceder à caracterização físico-química das plantas medicinais seleccionadas e identificar os cotituintes respoáveis pela actividade farmacológica; (iii) Avaliar a actividade biológica das plantas medicinais seleccionadas;

2 Foi ainda objectivo informar a população sobre o correcto uso das plantas medicinais e as respectivas acções terapêuticas. Materiais e métodos: Os inquéritos etnofarmacológicos foram realizados à população das diversas províncias, no sentido de permitir o levantamento das características farmacológicas dos diferentes medicamentos tradicionais. O óleo essencial das folhas frescas de Cymbopogon citratus (DC) Stapf. Poaceae Gramineae foi isolado por destilação de arrastamento de vapor utilizando um aparelho Clevenger modificado, de acordo com o procedimento descrito na Farmacopeia Europeia de A análise dos cotituintes do óleo essencial foi realizada por cromatografia gasosa (CG) e por cromatografia gasosa acoplada à espectroscopia de massa (CG/EM). Os cotituintes do óleo essencial foram identificados a partir do índices de retenção em duas colunas, polares e apolares (polidimetilsiloxano e polietilenoglicol), após comparação com os tempos de retenção de C8-C23 de n-alcanos, da base de dados do laboratório. As estirpes bacterianas utilizadas para comprovar a actividade antibacteriana do óleo essencial foram: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Proteus mirabilis ATCC adquiridas pelo CITS-IPSN. As estirpes multirresistentes de Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae de amostras de infecções humanas. De modo a avaliar o efeito bactericida do óleo essencial de Cymbopogon citratus e quantificar a concentração mínima inibitória prepararam-se diferentes concentrações do óleo essencial e dos seus componentes maioritários citral, geraniol, citronelal e linalool (Sigma 618, 48798, 2747, 74856, respectivamente). Para o método de difusão em disco foram utilizadas soluções com diferentes percentage de óleo essencial, nomeadamente, 5, 1, 2, 45, 6, 85 e 1%, diluídas em dimetilsulfóxido (DMSO), de forma a determinar a concentração ideal do óleo essencial com actividade bactericida. As concentrações dos compostos maioritários, citral, geraniol, citronelal e linalol utilizadas foram de 2, 45, 6, 85 e 1%. Para o método de diluição foi preparada uma solução stock do óleo essencial, que permitiu obter uma solução mãe em NB e da qual se preparou as diferentes concentrações a serem avaliadas de 5, 1, 2, 4 e 8 ppm. Resultados principais: A extração de óleo essencial das folhas secas de Cybopongus Citratos apresenta um rendimento médio de 1,3% podendo variar entre o 1% e o 1,5%, dependendo da altura do ano em que se realiza a colheita. Resumidamente, a análise cromatográfica, possibilitou a identifcação e quantificação dos cotituíntes do óleo essenical de Cymbopogon citratus (DC) Stapf. Poaceae Graminae, o maioritário corresponde ao citral com uma percentagem de 69%, este composto é uma mistura de neral (β-citral) 28% e de geranial (α-citral) 41% e de mirceno 25%.

3 O estudo do efeito bacteriostático do óleo essencial de C. citratus nas estirpes multirresistes de revelou resultados com elevado potencial clínico. A Figura 1 representa esquematicamente os resultados obtidos. a) b) C AUG Cc 4 6 Cc 8 1 Cc C PG Cc 4 6 Cc 8 1 Cc c) C Mt Cc 4 6 Cc 8 1 Cc Figura 1: Halos de inibição (mm) de diferentes concentrações de óleo essencial de Cymbopogon citratus sobre, em relação a um controlo positivo (AUG-augmentim 3 (a) PG-penicilina 1 (b) e MT-meticilina 5 (c);. não significativo. com significância estatística. A estirpe é resistente à combinação ácido clauvulâmico/penicilina (augmentim), penicilina G e meticilina, sendo classificada como uma estirpe MRSA. Utilizando o óleo essencial, em concentrações de 5%, é obtido um halo inibitório igual ao obtido quando se utiliza a meticilina, o augmentin ou a penicilina G, sendo estatisticamente não significativa a sua diferença (p>,1). Em todas as outras concentrações utilizadas, o óleo essencial obteve um efeito inibitório superior (originou um halo maior) com significância estatística (p<,1), quando comparados com os diversos antibióticos de referencia utilizados neste estudo. As estirpes S. epidermidis 1 e 2, demotram resistência à vancomicina, porém é um antibiótico que neste trabalho não foi utilizado como controlo positivo, sendo apenas uma informação adicional que demotra a multirresistência das estirpes avaliadas. É de salientar que o óleo essencial origina halos significativamente maiores a partir da concentração de 15% (p<,1), quando comparado com a penicilina e com a meticilina. O augmentim, por si, tem maior capacidade bactericida uma vez que é uma associação de uma penicilina com um inibidor β-lactâmico,

4 sendo assim necessário uma concentração superior de óleo essencial para se obter diferenças positivas nos halos de inibição, valores superiores a 3%. De modo a determinar a concentração mínima inibitória foram realizados estudos de diluição em tubos seguidos e determinada a taxa de recuperação das bactérias. O óleo essencial de Cymbopogon citratus foi testado nas três estirpes, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus epidermidis ATCC e Escherichia coli ATCC de forma a avaliar a actividade antibacteriana. Valores de,78 log (cfu/ml) significam que a população se encontra sob o limite de enumeração. O crescimento da estirpe Gram positiva testada foi inibida com uma concentração mínima de 5 ppm de óleo essencial. Elevadas concentrações do óleo essencial promovem a morte rápida demotrada pelo decréscimo do número de células viáveis, logo após a 1ª hora. A conjugação dos resultados obtidos com os obtidos no método de difusão do disco, permite verificar que o S. aureus encontra-se numa fase estacionária ao fim de 36 horas de incubação, e que quando, na presença de óleo essencial, entra numa fase de lise e morte celular após um período de incubação de 2 horas. Este facto comprova a actividade anti-bacteriana do óleo essencial, uma vez que a morte total das bactérias ocorre ao fim de duas horas com concentrações de 4ppm. As concentrações de óleo essencial de 5 e 1ppm, apresentam um efeito bacteriostático na população de S. aureus. A incubação de S. aureus com meios de cultura contendo concentrações superiores a 2ppm de óleo essencial de C. citratus produz efeito inibitório do crescimento celular bastante acentuado, relativamente ao controlo, e uma morte total das bactérias a 4ppm, após 2 horas de incubação. É possível fazer uma pequena relação sobre a concentração de óleo essencial, a 2ppm, com efeito bactericida do crescimento da estirpe, sabendo que o citral é a substância com maior concentração (69%) no óleo essencial de Cymbopogon citratus com actividade, e sabendo que a massa molar de citral é 152,24 g/mol, então a concentração da substância activa será de,92 mm. Assim, poderá concluir-se, que aproximadamente,,92 mm de óleo essencial apresenta efeito bactericida sobre a estirpe S. aureus. Estudos semelhantes foram realizados com outras estirpes tendo sido identificadas concentrações bactericidas de 4ppm para o S. epidermidis e uma concentração aproximada de óleo essencial de C. citratus de 1,84mM para a E. Coli. Foi também identificado que o óleo essencial de C. citratus apresenta actividade contra a Leishmania (Machado et al. 212). Conclusões: O efeito bactericida do óleo essencial de Cymbopogon citratus foi determinado em várias estirpes de bactérias, sendo o seu efeito comparado com o de antibióticos comerciais, tendo-se verificado que para algumas estirpes, o óleo essencial de chá de cachinde, tem um poder bactericida mais elevado os antibióticos comerciais, e actua de mais eficazmente contra bactérias multiresistentes (SAMR) Esta descoberta, não só permite reforçar o uso tradicional do chá de cachinde como abre uma importante porta ao seu uso como potente agente antimicrobiano.

5 Recomendações Recomenda-se que o âmbito do trabalho seja alargado a outras plantas, de modo a permitir a validação científica de outras plantas medicinais, usadas na Medicina Tradicional Angolana. Bibliografia FARMACOPEIA EUROPEIA, Farmacopéia Européia Europäisches Arzneibuch, Deutscher Apotheker Verlag. Stuttgart, Germany. MACHADO, M., et al. (212) Aldheides monoterpenes as potential anti- Leishmania agents: Activity of Cymbopongon citratus and citral on L. infantum, L. tropica and L. major. Exp. Parasitol. 13, PROENÇA DA CUNHA (Coord), (25). Farmacognosia e Fitoquímica. 1ª ed. Fundação Calouste Gulbenkian, Lisboa.