Atualidades sobre erliquioses no Brasil

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1 Atualidades sobre erliquioses no Brasil DANIEL MOURA DE AGUIAR PROF. FACULDADE DE MEDICINA VETERINÁRIA UFMT

2 Classificação Ehrlichia minasensis Ordem Rickettsiales Familia Anaplasmataceae Genero Ehrlichia

3 Ehrlichia spp. Bactéria Gram negativa Multiplica-se em micro colônias (mórulas) Ausente de peptiídioglicano e lipopolissacarídeo Secreta diferentes proteínas que regulam a resposta celular local permitindo inibição da fusão do fagolisossoma, retardo da apoptose celular bem como a obtenção de ferro. Resultado = persistência intra-celular

4 Quais erliquias circulam no Brasil? O isolamento em laboratório confirma a presença das espécies no Brasil

5 Isolamento de E. minasensis em MT

6 Quais erliquias circulam no Brasil? Detecção molecular sugere que espécies próximas ou similares a E. ewingii e E. chaffeensis circulam no Brasil

7 Quais erliquias circulam no Brasil? Espécies e prováveis novas espécies detectadas - Brasil E. chaffeensis Blastocerus dichotomus E. ewingii Felis catus domestica Ehrlichia sp. jaguar strain Phantera onca Ehrlichia sp. fox-es-1 strain Cerdocyon thous Ehrlichia like-canis wild canidae and felidae Ehrlichia like-chaffeensis wild canidae and felidae Ehrlichia sp. clone J6 horses

8 Quais erliquias circulam no Brasil? Anaplasma marginale Ehrlichia canis São Paulo Ehrlichia minasensis UFMT Ehrlichia chaffeensis Arkansas Ehrlichia sp. clone San Luis Amblyomma tigrinum Argentina Ehrlichia sp. clone Córdoba Amblyomma tigrinum Argentina Ehrlichia sp. clone J6 jaguar Brazil Ehrlichia sp. clone Colombo Horse Brazil Ehrlichia ruminantium highway Ehrlichia peccary Amazon Ehrlichia sloth Amazon Ehrlichia sp. clone F2 Fox Brazil

9 Citology versus identification Intracellular inclusions occurring in granulocytes (neutrophils and eosinophils) are consistent with E. ewingii and A. phagocytophilum morulae. In Brazil reports of granulocytic ehrlichiosis and anaplasmosis is scarce 08 cases were diagnosed in Botucatu SP and Cuiabá MT in

10 Microscopic visualization 01 dog was nested PCR positive by Anaplasma sp. 16S rrna (Massung et al., 1998) All dogs were heminested-pcr positive by dsb erhlichial gene (Almeida et al., 2013) Anaplasma phagocytophilum?? Ehrlichia ewingii?? 16S PCR and sequencing dsb PCR and sequencing Anaplasma platys Ehrlichia canis The tropical area of Brazil is endemic for E. canis

11 Rhipicephalus sanguineus lineages X Ehrlichia canis Two distinct lineages occurring in Latin America Tropical (A B C) Able to transmit E. canis Temperate (D E F) Enable to transmit E. canis IFA 51% of dogs Identification of E. canis in dogs Culture and identification of E. canis in dogs and humans IFA - 38% of dogs Culture and identification of E. canis infecting dogs, ticks and humans IFA 26 89% of dogs IFA 51% of dogs Few reports of E. canis IFA <10% of dogs

12 Transmissão de Ehrlichia canis via transplacentária? A Transmissão transplacentária entre mãe e feto não apresenta importância na epidemiologia da erliquiose canina

13 Pathogenesis of Canine monocytotropic ehrlichiosis Obligatory intracellular pathogen Virulence factors Secreted immunoreactive tandem repeat proteins are known adhesins and effectors TRP36 of E. canis and the ortholog TRP47 of E. chaffeensis have been associated with host-pathogen interactions such as adhesion and internalization, actin nucleation and immune evasion Mavromatis K, et al J Bacteriol 188: Popov VL, et al Microb Pathog 28: Yu XJ, et al J Clin Microbiol 38: Wakeel, A, et al Microbes Infect. 12,

14 Genotipagem de Ehrlichia canis no Brasil Fatores de virulência Proteínas TRP secretadas por E. canis são associadas a interação hospedeiro parasite como adesão, penetração e evasão da resposta imune. Proteínas uteis para classificar diferentes isolados de E. canis São fortemente imunodominantes e por isso reconhecida pela Sistema imune

15 Genotipagem de Ehrlichia canis no Brasil O gene TRP36 foi utilizado para examinar a diversidade genética de 8 isolados brasileiros de E. canis Dois genótipos foram identificados entre os isolados baseados em sequencias de aminoácidos da proteína deduzida.

16 Genotipagem de Ehrlichia canis no Brasil O gene TRP36 foi utilizado para examinar a diversidade genética de 8 isolados brasileiros de E. canis Dois genótipos foram identificados entre os isolados baseados em sequencias de aminoácidos da proteína deduzida.

17 Genotipagem de Ehrlichia canis no Brasil Baseado na imunoreatividade e na divergência antigênica Desenvolvimento de ELISA para distinguir anticorpos contra diferentes genótipos

18 Distribuição de diferentes genótipos de E. canis no Brasil Uso do ELISA para distinguir anticorpos frente a diferentes genótipos 340 cães provenientes do Pantanal mato-grossense 6% das amostras não foi possível determinar o provável genótipo responsável pela estimulação

19 Distribuição de diferentes genótipos de E. canis no Brasil Dos 340 caninos 3 cães apresentaram anticorpos frente proteínas especificas de E. chaffeensis (ELISA TRP32) e IDEXX Snap 4DX 4 cães apresentaram títulos de anticorpos frente antígenos de E. minasensis superiores aos de E. canis (IFAT) 1 cão foi reagente por IDEXX Snap 4DX, porem negativos em ELISAS com proteínas especificas de E. canis e E. chaffeensis E. chaffeensis? E. minasensis? E. ewingii?

20 Infecção por Ehrlichia minasensis em cães? RIFI antígenos de E. canis RIFI antígenos de E. minasensis ELISAs com antígenos de E. canis e E. chaffeensis negativos SNAP 4Dx Ehrlichia sp. positivo Risco para infecção de cães em áreas rurais com contato com bovinos

21 DISTRIBUIÇÃO DE DIFERENTES GENOTIPOS DE Ehrlichia canis NO BRASIL Ambos genótipos estão igualmente distribuídos no Brasil 34,3% P>0,05 48,4% 42,7% 52,0% 44,7% TRP36US TRP36BR 61,6% 36,4% 38,5% 15,0% 13,3%

22 Distribuição de diferentes genótipos de Ehrlichia canis no Brasil

23 Infecção por Ehrlichia canis em gatos domésticos Detalhes sobre a patogenia e desposta imune de gatos domésticos frente a Infecção por E. canis ainda estão indefinidos

24 Investigação de diferentes genótipos de E. canis em gatos População de gatos de Cuiabá, MT. (102 Amostras) Predominância de reação frente ao genótipo brasileiro de E. canis Considerando a importância da proteína TRP36 na adaptação do agente no hospedeiro, estarão os gatos associados a divergência de isolados de E. canis no Brasil?

25 Conclusão Ehrlichia canis é a única espécie isolada de cães no Brasil Ehrlichia minasensis é a única isolada de bovinos Evidencias sorológicas e moleculares sugerem a circulação de outras espécies de erliquias no Brasil Evidencias sorológicas sugerem que E. minasensis estimulam a imunidade humoral de cães no Brasil infectam cães? A observação da infecção por E. canis em gatos domésticos e a presença de anticorpos contra TRP36Br sugere que esta espécie possa estar envolvida na diversidade genética no Brasil

26 OBRIGADO!!!!!! Daniel Moura de Aguiar Prof. Fac. Medicina Veterinária UFMT Cuiabá, MT