OBJETIVOS Objetivo principal: Estabelecer uma rede de laboratórios de suporte à Sub-rede de Aconselhamento Genético em Oncogenética, composta por laboratórios de genética e biologia molecular de instituições públicas nacionais, sob a coordenação central da Divisão de Genética do Instituto Nacional de Câncer. Objetivos específicos: a) Padronizar os testes genéticos para as principais síndromes de câncer hereditário e desenvolver novas metodologias diagnósticas. b) Propor um programa de controle de qualidade dos testes genéticos oferecidos. c) Avaliar e otimizar os custos dos testes genéticos padronizados pela rede.
RESULTADOS ESPERADOS Resultados esperados -Elaboração e padronização de procedimentos de boas práticas de laboratório entre os centros participantes, estabelecendo normas para obtenção, identificação, armazenamento, transporte e manipulação das amostras biológicas, fazendo o bom uso dos testes genéticos; -IDENTIFICAÇÃO DA AMOSTRA -Utilização de codificação que permita identificar: Centro, Síndrome, Paciente, Origem da Amostra. Uso de código de Barras? -SELEÇÃO DE MÉTODOS: p/ex. DE ISOLAMENTO DE DNA.
- Resultados esperados RESULTADOS ESPERADOS -Elaboração e padronização de procedimentos de boas práticas de laboratório entre os centros participantes, estabelecendo normas para obtenção, identificação, armazenamento, transporte e manipulação das amostras biológicas, fazendo o bom uso dos testes genéticos; -ARMAZENAMENTO (material já processado): -Soluções para armazenamento; -Fracionamento da amostra para armazenamento; -TRANSPORTE (material já processado) -DNA: temperatura ambiente via correio? -Fracionamento da amostra prévio ao transporte.
RESULTADOS ESPERADOS - Resultados esperados -Avaliação dos custos envolvidos nos procedimentos de laboratório para detecção de mutações nos diferentes centros envolvidos visando a otimização dos mesmos; CUSTOS PARA CADA CONJUNTO DE PROCEDIMENTOS: -Diferenças regionais e custos; -Inclusão do custo de pessoal; -Fontes de financiamento dos centros envolvidos; -Trocas de informações sobre fornecedores; -Otimização dos custos dos métodos
RESULTADOS ESPERADOS - Resultados esperados -Otimização e viabilização de tecnologias entre os laboratórios dos centros envolvidos, de acordo com a demanda e disponibilidade dos mesmos; COLABORAÇÃO PARA COMPARTILHAMENTO DE TECNOLOGIAS -Estabelecimento de centros que possam realizar metodologias que necessitam de maior infraestrutura: -Sequenciamento (Next Generation), -Genotipagem, Análise de fragmentos, MLPA; -Treinamento de pessoal para análise.
RESULTADOS ESPERADOS - Resultados esperados -Desenvolvimento de novos métodos para detecção de mutações com alta especificidade e sensibilidade e validação em diferentes laboratórios; -Realização de encontros entre os centros envolvidos para difusão e discussão dos métodos, e de cursos abertos a profissionais da área de saúde com a finalidade de divulgar os métodos utilizados, a interpretação dos resultados e as limitações dos mesmos. -Possibilidade de estabelecer centros/laboratórios de referência.
PROCESSAMENTO DE DIFERENTES FONTES DE AMOSTRA DNAs obtidos com diferentes graus de integridade de inclusão em parafina PM 1 2 3 4 5 6 PM 1500 1500 600 600 300 300 100 100 Braggio, 2003
UTILIZAÇÃO DE DIFERENTES METODOLOGIAS SSCP Detecção de Variações Seqüenciamento Clonagem PCR MDE / Com e Sem Glicerol MegaBACE / ABI377 pgem-t / pmos Detecção de Grandes Rearranjos Moleculares Southern-blot gdna Endonucleases de Restrição [ 32P]dCTP
DIAGNÓSTICO DE DIFERENTES TIPOS DE MUTAÇÃO Câncer de Mama e/ou Ovário 90-95% Hereditário Esporádico 33% 1,8% Mutação BRCA1/2 Diag. negativo Metilação BRCA1/2 Mutação BRCA1/2 Grandes Rearranjos BRCA1/BRCA2 5 UTR? Promotor outros genes
Sequenciamento: Next Generation www.eurofinsdna.com