Eletroforese 1
Eletroforese É um processo que consste na separação dos componentes de um sstema através da aplcação de um campo elétrco. É usado para separar e analsar bomoléculas. Prncípo: Substâncas em solução que possuem carga elétrca lvre, deslocam-se quando submetdas a um campo elétrco de sentdo nvarável. Para que uma partícula se mova é necessáro que possua carga elétrca lvre, sto é, excesso ou dferença de elétrons. Portanto: - para o ânodo (+) drgem-se os ânons - para o cátodo (-) drgem-se os cátons 2
E N E N = = N N E = P E Eletroforese As moléculas são separadas umas das outras conforme o tamanho, a carga elétrca e a forma. Separa-se partículas de mesma carga, porém com quantdades dferente de carga. 3
Moléculas grandes mgram lentamente, enquanto moléculas pequenas movem-se rapdamente. 4
5
E N E N = = N N E = P E Eletroforese Suportes: Meo sóldo: - Papel - Acetato de celulose Meo sem-sóldo: - Gel de amdo - Gel de agarose - Gel de polacrlamda 6
N E 2 2 N c 2 m E = N N E P E 2 2 PV N Amu N A m N / 3 3= A A = = = c = N average knetc energy molecule 2 3 ( ) Eletroforese Marcadores de peso molecular são usados para estmar o tamanho das moléculas das amostras. 7
Eletroforese: a concentração do gel A concentração do gel defnrá o tamanho dos poros a serem atravessados pelas moléculas em mgração. Ges muto concentrados oferecerão maor resstênca à mgração das moléculas. 8
Eletroforese LpoProteínas undade de transporte lpídco - Ultracentrfugação - Separação por eletroforese Identfcação de 4 faxas lpoprotecas - Qulomcrons - Lpoproteína Beta - Lpoproteína Pré-beta - Lpoproteína Alfa 9
Eletroforese Hemoglobna - Hemoglobna anormas - Carga elétrca - Ponto soelétrco - Hemoglobna S - Hemoglobna C - Talassema Beta 10
Eletroforese Hemoglobna S - Hemoglobnopata estrutural * substtução do ácdo glutâmco pela valna - Indvíduos homozgotos (SS) - Anema hemolítca congênta ( anema falcforme) - Indvíduos heterozgotos (AS) - Traço sclêmco - Geralmente assntomátcos 11
Eletroforese Proteínas: - amnoácdos como eletróltos Proteínas sércas: - Albumna - Globulnas (α1, α2, β, δ) 12
Eletroforese: métodos de letura Denstometra 13
Espectrofotometra 14
Aplcações da espectroscopa energa frequênca de nfra- vsível ultra- raos-x raos-γ radante rádo vermelho voleta Técnca NMR Absorção Absorção Absroção Absorção Técncas rado- Analítca Mcroondas Fluorescênca Dfração métrcas Fosforescênca Fotometra de chama Espectroscopa de emssão Interação desntegração vbração e exctação eletrônca dos elétrons desntegração com a Rotação do rotação das átomos de uma moléculs nternos são do núcleo matéra núcleo moléculas deslocados 15
A regão do espectro do ultravoleta é na faxa de 200 a 400 nm e a da luz vsível é entre 400 e 800 nm. 16
Interação da radação com a matéra O que faz com que alguns raos nterajam e outros passem através das cosas? Dos requermentos devem ser observados para que uma determnada radação possa ser absorvda por uma molécula: 1 - A radação ncdente deve ser de frequênca equvalente aquela rotaconal ou vbraconal, eletrônca ou nuclear da molécula, 2 - A molécula deve ter um dpolo permanente ou um dpolo nduzdo, ou seja, deve haver algum trabalho que a energa absorvda possa fazer. 17
Les de absorção Io I1 Io = 100 I1 = 50 Io = 100 I1 = 50 I2 = 25 18
Esquema dos prncpas componentes de um espectrofotômetro A amostra deve estar em um recpente (cubeta) de quartzo quando a radação for na regão espectral do ultravoleta. Quando for na regão da luz vsível usa-se os de vdro por ter uma melhor dspersão. Os detectores devem ser altamente sensíves. Os dados obtdos pelo detector são envados para um dspostvo de processamento de dados. 19