Espectrofotometria Pro r fe f ssor H elber Barc r ellos

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Luísa Bentes Lameira
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1 Espectrofotometria Professor Helber Barcellos

2 Espectrofotometria A Espectrofotometria é um processo de medida que emprega as propriedades dos átomos e moléculas de absorver e/ou emitir energia eletromagnética em uma das regiões do espectro eletromagnético. É AMPLAMENTE utilizada na análise quali e quantitativa de fármacos.

emitir energia eletromagnética em uma das regiões do espectro

3 Espectrofotometria A radiação eletromagnética é uma forma de energia que se transmite no universo em enormes velocidades. Possui natureza ondulatória e corpuscular.

4 Absorção de Radiação Vários fenômenos podem ocorrer com a radiação luminosa, como: reflexão, refração, espalhamento ou ser absorvida pelo material.

5 Espectrofotometria A radiação eletromagnética pode ser considerada como um conjunto de ondas (elétricas e magnéticas) cuja velocidade no vácuo é 3 x 10 8 m/s. As várias formas de radiação, caracterizadas pelo seu comprimento de onda, compõem o espectro eletromagnético.

6 Espectrofotometria O comprimento de onda ( ) é a distância entre as cristas (ou cavados) sucessivos, a frequência de onda é o número de ondas completas ( 1 ciclo) que passa por um dado ponto por unidade de tempo(s).

frequência de onda é o número de ondas completas ( 1

7 Espectrofotometria Comprimento de onda distância entre dois picos máximos consecutivos Unidades = 1nm = 10-3 µm= 10-9 m Frequência v numero de ciclos que passa por um ponto por seg.

8 Espectrofotometria AabsorçãoderadiaçãonoUVenovisivelporum composto orgânico deve-se a presença de duplas ligações conjugadas. Heteroátomos capazes de compartilhar pares de elétrons para o sistema conjugado podem contribuir na absorção de radiação. Grupo cromóforo = parte conjugada da molécula responsável pela absorção de radiação no ultravioleta e no visível.

Heteroátomos capazes de compartilhar pares de elétrons para o sistema conjugado podem

9 Espectrofotometria O comprimento de onda máximo de absorção corresponde ao comprimento de onda da radiação necessária para uma transição eletrônica. A cor que vemos das substâncias resulta da combinação das partes que não foram absorvidas (no Vis) pelos grupos cromóforos da substância.

10 Espectrofotometria deabsorção É a medida da interação entre radiação eletromagnética e moléculas ou átomos de uma substância química. As técnicas frequentemente empregadas na análise farmacêutica incluem: espectroscopia no UV, visível, infravermelho absorção atômica. Medidas espectrofotométricas na região do visivel são denominadas colorimetria

As técnicas frequentemente empregadas na análise farmacêutica incluem: espectroscopia

11 Espectrofotometria deabsorção Uv/visivel: soluções observadas em células de 1 cm; absorbâncias de 0,2 a 0,8. Dependencia entre átomos e moléculas de substâncias e a natureza e quantidade de REM (radiação eletromagnética, ou seja energia propagada na forma de ondas) Radiação absorvida depende da quantidade de moléculas presentes (concentração da solução) e da estrutura destas moléculas.

Dependencia entre átomos e moléculas de substâncias e a natureza e quantidade de REM (radiação

12 Espectrofotômetro É um instrumento que serve para medir a intensidade da luz em função de um comprimento de onda específico.

13 Espectrofotômetro: Componentes básicos da instrumentação Fonte de energia elétrica Fonte de energia radiante : capaz de emitir uma mistura de comprimentos de onda Monocromador : utiliza para o isolamento da porção desejada do espectro Porta cubeta: suporte Detector : recebe a energia radiante transmitida pela solução, transformando-a em energia elétrica. Circuito medidor: recebe a energia elétrica emitida pelo detector, apresentando-o ao operador sob a forma útil de leitura isto é, absorbância ou transmitância

suporte Detector : recebe a energia radiante transmitida pela solução, transformando-a em energia elétrica.

14 (a) lâmpada de deutério/tungstênio; (b) lente da fonte; (c) obturador; (d) amostra; (e) lente espectrográfica; (f) fenda; (g) rede de difração; (h) arranjo de detectores

15 Fontes Luminosas Luz UV Lâmpadas de deutério Luz Visível Tungstênio

16 Cubetas Espectrofotometria de Luz Visível Cubetade Vidro ( nm) ou Plástico (380 a 800 nm) Espectrofotometria de Luz Ultra- Violeta / Visivel Cubetade Quartzo ( nm ) BRANCO Elimina interferenciade absorção do solvente

17 Análise Qualitativa O espectro de absorção de uma substância em solução é característico e dependa de sua estrutura química. Espectro de absorção = gráfico que mostra a variaçãodeacom Por comparação entre o espectro de uma amostra com padrão de substância conhecido é possível indentificá-la.

Espectro de absorção = gráfico que mostra a variaçãodeacom Por

19 Transmitância Transmitância é a fração da luz incidente em um comprimento de onda específico, que passa por uma amostra de matéria. T = I / I 0

20 Absorbância É a capacidade do material em absorver radiações em frequência específica. A = 2-log 10 T

21 Lei de Lambert-Beer Através dessa lei, intensidades da radiação incidente e emergente podem ser relacionadas com as concentrações do material presente na solução. A radiação incidente deve ser monocromática

22 Lei de Lambert-Beer I 0 =intensidade da radiação incidente I = intensidade transmitida pela amostra l = comprimento

23 Lei de Lambert-Beer 1. A absorção da luz é tanto maior quanto mais concentrada for a solução por ela atravessada: I o I T1 feixe de luz de intensidade I o solução 10 g/l Io IT2 solução 20 g/l

24 Lei de Lambert-Beer 2. A absorção da luz é tanto maior quanto maior for a distância percorrida pelo feixe luminoso através das amostras: I o I T1 feixe de luz de intensidade I o 1 cm I o I T3 3 cm

25 Análise Quantitativa Emprega-se padrão de referência Preparam-se soluções padrão e amostra nas mesmas condições. Empregar dados de absortividade existente na literatura Empregar curva de calibração(reta)

26 Análise Quantitativa Diluições iguais amostra e padrão Comparação da Absda solução amostra com padrões de concentração conhecida Leitura da solução padrão e da solução amostra sobre concentrações experimentais idênticas ( Ca = Cp)

27 Análise Quantitativa Curva de Calibração Reta construída a partir das absrobancias, a um dado comprimento de onda de várias concentrações conhecidas da solução padrão que represente a relação linear entre absorbância e concentração. Concentração da solução da amostra Determinada a partir da interpolação na curva padrão Ou da equação da reta obtida por regressão linear do gráfico Y= ax+b a= Coeficiente angular( inclinação da reta b = Coeficiente linear intercepto ( ponto que corta o eixo y ondex= 0)

28 A regressão linear é utilizada para descrever a extensão de associação entre duas variáveis, e fundamenta-se em dois principios: Correlação Regressão Regressãolinear

29 Correlação O comportamento conjunto de duas variáveis quantitativas pode ser medido por meio de coeficiente de correlação. Este coeficiente indica o grau de intensidade da correlação entre duas variáveis e, ainda o sentido dessa correlação ( positivou ou negativo).

30 Regressão Sempre que queremos estudar determinada variável em função de outra fazemos uma regressão linear. Procuramos determinar o ajustamento de uma reta à relação entre essas variáveis ou seja, obtemos uma função definida por: Y=ax+b.

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