ESTUDO DA INFLAMAÇÃO ATRAVÉS DA VIA DE EXPRESSÃO GÊNICA DA GLUTATIONA PEROXIDASE EM PACIENTES RENAIS CRÔNICOS

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Carlos da Fonseca
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1 ESTUDO DA INFLAMAÇÃO ATRAVÉS DA VIA DE EXPRESSÃO GÊNICA DA GLUTATIONA PEROXIDASE EM PACIENTES RENAIS CRÔNICOS ALUNA: Roberta Gomes Batista ORIENTADOR: Profa. Dra. Flávia de Sousa Gehrke UNIVERSIDADE PAULISTA UNIP CURSO: BIOMEDICINA

2 Doença Renal Crônica (DRC) Definição: lesão renal com perda progressiva e irreversível da função dos rins (glomerular, tubular e endócrina). Ocorre quando uma doença ou outra condição de saúde prejudica a função renal, causando danos aos rins, que tendem a agravar-se ao longo de vários meses e até mesmo anos. Nesta patologia há um acúmulo de líquidos e resíduos no organismo e afeta a maioria dos sistemas e funções do corpo, inclusive a produção de eritrócitos, o controle da pressão arterial, a quantidade de vitamina D e a saúde dos ossos. Nos primeiros estágios, pode ser assintomática. A perda de função pode ser tão lenta que os sintomas não aparecem até que o funcionamento dos rins seja menor que um décimo do normal.

3 Grupo de risco para a DRC Dados da literatura indicam que portadores de hipertensão arterial, de diabetes mellitus, ou história familiar para doença renal crônica têm maior probabilidade de desenvolverem insuficiência renal crônica. Estadiamento da DRC Para efeitos clínicos, epidemiológicos, didáticos e conceituais, a DRC é dividida em seis estágios funcionais, de acordo com o grau de função renal do paciente. Estes estágios são numerados em 0, 1, 2, 3, 4, e 5.

4 Estadiamento e classificação da DRC Estágio Filtração Glomerular (ml/min) Grau de Insuficiência Renal 0 > 90 Grupos de Risco para DRC 1 > 90 Lesão Renal com Função Renal Normal IR Leve ou Funcional Moderada ou Laboratorial IR Severa ou Clínica 5 < 15 IR Terminal ou Dialítica

5 Indicadores e Medida da Função Excretória Renal: Indicadores Ureia (15 35 mg/dl) Creatinina Plasmáticas (0,8 1,0 mg/dl) Medida da Filtração Glomerular Clearance Creatinina VN: 110 a 120 ml/min

6 Figura. Doença Renal Crônica Pane no Sistema Fonte: lookfordiagnosis

7 Objetivo Verificar o envolvimento da Glutationa Peroxidase (GPx) na doença renal crônica, através da análise da expressão da GPx através do RT-PCR real time. Justificativa Estudos predecessores apontam resultados positivos na associação entre a atividade da GPx à outras patologias, onde foi avaliado a relação entre os níveis de concentração de Selênio (Se), e ação da GPx e a gravidade das lesões em pacientes.

8 Glutationa Peroxidase (GPx) Glutationa Peroxidase faz parte do sistema de defesa antioxidante enzimático, cuja função é inibir ou reduzir os danos causados pela a ação deletéria dos radicais livres ou das espécies reativas nãoradicais.

9 Mecanismo catalítico da seleno-enzima Glutationa Peroxidase Fonte: Revista Química Nova

10 Material e Métodos Pacientes: Trabalho aprovado pelo comitê de ética da Universidade Paulista (UNIP), sob o parecer: Foi coletado 4 tubos contendo EDTA com sangue periferico de 8 pacientes portadores de doença renal crônica em hemodiálise e 6 amostras do grupo controle. Os participantes do estudo foram submetidos ao pré-condicionamento isquêmico (PCI) que é definido como breves períodos de isquemia, intercalados com reperfusão, que antecedem um período de isquemia sustentada. Extração de RNA: O RNA das amostras foi extraído e quantificado. Síntese do cdna: Utilizando 1 μg de RNA total para síntese de cdna. RT-PCR quantitativo em tempo real: Para uma reação de volume final de 15 µl foram utilizados 0,6 μm de oligonucleotídeo GPX4 (F/R); 7,5 μm de SYBR Green PCR Master Mix; 1,5 µl cdna (diluído a 1:10) e 5,4 μm água DEPC q.s.p. Para corrida de RT-PCR utilizado o equipamento 7500 Fast Real Time PCR Systems (Programa- Desnaturação: 95º C à 10 min, 45 ciclos de 95 0 C por 15 s; 60 0 C por 60 s, Melt Curve: 95º C por 15 s, 60º C por 1 min., 95º C por 30 s, 60º C por 15s). Realizando a mesma reação para o gene endógeno GAPDH.

11 Pré Condicionamento Isquêmico (PCI) O pré-condicionamento isquêmico é um método que prepara e protege a célula para suportar um período de isquemia prolongada com menor dano celular possível.

12 Resultados Foram processadas 14 amostra, entre pacientes e grupo controle, sendo que, 50% dos pacientes são do sexo masculino e 50% sexo feminino; a média de idade é de 53 anos. Pode-se observar entre os pacientes submetidos a pesquisa a moda de idade de 52 anos, no percurso do desenvolvimento do trabalho houve 3 óbitos. No grupo pesquisado, 50% são do sexo masculino e 50% sexo feminino; a média de idade foi de 53 anos, notou-se que de 64% são acometidos por diabetes mellitus e 100% foram diagnosticados com hipertensão arterial sistêmica.

13 Curva de expressão da Glutationa Peroxidase

14 -8,33-7,11-5,40-6,04-6,91-6,30-6,32-6,72-4,73-5,25-6,11-6,39-3,87-2,63-0,58-0,69-1,27 0,38 0,25 1,37 0,68 1,02 1,45 2,77 4,45 4,07 5,38 28,67 Expressão da GPx Pré e Pós Condicionamento 35,00 EXPRESSÃO GPX4 GRUPO CONTROLE / PACIENTES 30,00 25,00 Pré condicionamento Pós Condicionamento Pré Condicionamento 20,00 Pós Condicionameto 15,00 10,00 5,00 0,00-5,00-10,00-15,00

15 Associação entre os momentos pré e pós dos marcadores no grupo com hemodiálise e sem précondicionamento físico Variáveis Média (IC95%) p* Uréia Momento pré 114,40 (86,44; 142,35) Momento pós 45,65 (21,10; 69,30) <0,001 Troponina Momento pré 0,02 (0,00; 0,03) Momento pós 0,02 (0,01; 0,02) 0,281 Tnf Momento pré 9,63 (6,07; 13,20) Momento pós 8,22 (6,34; 10,09) 0,314 I6 Momento pré 11,70 (8,59; 14,82) Momento pós 9,87 (6,52; 13,25) 0,302 Mediana (IC95%) p** GPX4 normalizada Momento pré -0,16 (-5,39; 1,81) Momento pós -5,06 (-6,38; 0,81) 0,140 p* teste de t de Student; p** Wilcoxon. IC95%: intervalo de confiança 95%.

16 Conclusão Não foi constatado uma correlação estatística entre a expressão de GPx nos pacientes e no grupo controle após o pré condicionamento cardíaco. Estes resultados podem estar associados ao pequeno número de pacientes analisados e/ou por avaliarmos apenas a primeira amostra após o pré condicionamento. Entretanto, observa-se uma correlação estatística entre a diminuição significativa da ureia pré e pós condicionamento. Esta informação pode ter um significado importante no diagnóstico e prognóstico da doença sendo necessário novos testes com um n maior de amostras.

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