Métodos em Fitopatologia. Esterilização

Transcrição

1 Métodos em Fitopatologia Esterilização

2 Esterilização: processo que visa eliminar todos os microorganismos presentes em um material / meio de cultura; Assepsia: Conjunto de processos (técnicas) utilizados para impedir a entrada de microrganismos em local que não os contenha

3 Descarte e lavagem Placas contendo meio cultura: Descarte de meios com patógeno comum (lixo); Descarte de meios com patógeno exótico (autociavagem / lixo); Lavagem de placas com água e detergente; Enxaguar muito bem e secar ao ar; Embalar3a3empapel; Esterilizar em estufa; Armazenar em local livre de poeira.

4 Descarte e lavagem Vidraria: Provetas/Beckers: lavar / enxaguar / secar / esterilizar / cobertura alumínio Vidros c/ tampas rosca: lavar / enxaguar / secar / esterilizar tampar frouxamente para esterilização (autoclave) Pipetas: imersão em solução desinfetante enxaguar / secar / embalar / esterilizar (água, detergente, hipoclorito sódio)

5 ESTERILIZAÇÃO Calor úmido - Autoclavagem: meios de cultura a 121ºC durante 20 minutos - Temperaturas de autoclavagem : - vapor + 0,5 atm = 111ºC - vapor + 1,0 atm = 121ºC - vapor + 1,5 atm = 128ºC - vapor + 2,0 atm = 135ºC - Tindalização : vapor sem pressão, esterilização fracionada (15'/três dias) - Autoclavagem : Esterilização do solo para fins experimentais (campo)

6 Calor úmido Mecanismo de ação: coagulação de proteínas Alta eficiência: alta capacidade de penetração Autoclavagem = calor + pressão Autoclave Cesta interna da autoclave Válvula de exaustão e manômetro (bolsa de ar) Resistência coberta por água e suporte da cesta

7 Modelos de autoclaves Esterilização pelo calor úmido

8 ESTERILIZAÇÃO Calor seco: Mecanismo de ação: oxidação constituintes químicos da célula Eficiência: baixa capacidade de penetração - Estufas ou fornos: vidraria envolta em jornal (placas e pipetas), Temperatura de 180ºC por 2 horas - Bico de Bunsen e lamparinas: instrumentos metálicos do tipo pinças, agulhas, alças, tesouras, escalpelos.. imersão em álcool e queima na chama. queima direta na chama até atingir o rubro. flambagem de tubos de ensaio e de placas antes e após a repicagem.

9 DESINFESTANTES: - Álcool (70-96%) : para desinfestação de superfícies: mesas, balcões, câmaras de assépticas e material vegetal para isolamento de patógenos. Ação: desnaturação lipídios e proteínas. - Hipoclorito de sódio (1-2%): 3 partes de água: 1 parte de hipoclorito 5%: desinfestação de material vegetal para isolamento de patógenos, lavagem de ferramentas como canivetes de enxertia e tesouras de poda. Ação: Oxidação componentes celulares. - Amônia quaternária : eficiente e não corrosiva, princípio ativo: cloreto de amônio. Concentração do produto comercial: 50% do princípio ativo. Usar solução 0,1%. Aplicar em superfície limpa e aguardar 3-10 min. Se houver uso imediato enxaguar a superfície. Indicado p/ imersão ou pulverização. Ação: inativação enzimática, desnaturação protéica e destruição das membranas celulares.

10 ESTERILIZAÇÃO Filtração: - Membranas filtrantes (Filtros Millipore ou 0.45 micrômetros) - Usadas em conjunto de kitasato ou em seringas. - Filtros de algodão hidrofóbico / lã de vidro usados em câmaras assépticas.

11 Gás: ESTERILIZAÇÃO - Óxido de etileno. puro é inflamável, porém com CO 2 como veículo se torna seguro. usado geralmente na forma de gás. promove esterilização de placas de vidro ou de poliestireno. câmara (saco plástico especial ou tambores) é usada para expor os materiais à ação do gás. ação: desnaturação de proteínas e ácidos nucléicos

12 ESTERILIZAÇÃO Radiação Radiação ultravioleta : utilizada para criação e manutenção de ambiente asséptico. Esterilização do interior de câmaras assépticas Tempo de 5-10 minutos, podendo a câmara ser usada imediatamente. Radiação UV é fornecida por lâmpada que emite comprimentos de onda na faixa ~260nm - Radiação baixa penetração (baixa energia) - Mecanismo ação: danos ao DNA

13 Câmara Asséptica ou de Fluxo Laminar

14 Câmara Asséptica ou Fluxo Laminar

15 O COLETOR SOLAR - Caixa de madeira, medindo 1,0 m X 1,5 m - Contém seis tubos metálicos de 15 cm diâmetro - Material: ferro, chapa galvanizada, alumínio, cobre, outro - Caixa coberta por filme plástico transparente p/ permitir entrada raios solares -Tubos são preenchidos com substrato por cima e retirado por baixo -Volume solo desinfestado por tratamento: 120 litros/caixa - Tempo do tratamento: 1-2 dias Fonte: Ghini, R. EMBRAPA - Jaguariuna

16 Fonte: Ghini, R. EMBRAPA - Jaguariuna

17 Esterilização química por brometo de metila Tratamento térmico por solarização

18